【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于化学发光，涉及一种提高化学发光羧基磁珠偶联抗体后稳定性的方法。
技术介绍
1、化学发光检测技术是近年来逐渐发展起来的一项免疫学技术，以高灵敏度著称，可以在低浓度下检测，具有良好的检测限。免疫磁珠简称磁珠，具有良好的超顺磁性，操作简单方便，具有较大的比表面积，是一种良好的分离材料。磁珠作为一种固体材料，与化学发光免疫分析技术相结合，磁珠表面带有化学基团，可以与蛋白分子以共价键的方式进行偶联，又因为磁珠具有较大的比表面积，可以结合更多的蛋白，提高检测范围。目前化学发光免疫分析技术已经广泛应用于生物及医学检测等领域
2、磁珠需要偶联蛋白分子后再应用于化学发光免疫分析当中。由于在偶联过程中，并不能使得蛋白分子完全以共价键的方式与磁珠偶联，有少部分蛋白会以其他方式吸附在磁珠表面或者磁珠表面残留有未结合的化学键，因此会导致抗体的脱落和上机测试时非特异性吸附的产生，不利于试剂整体的性能稳定，导致试剂的稳定性不佳。因此，急需开发一种新的偶联封闭方法，使得磁珠偶联抗体后，保证尽可能多的抗体以共价键的形式与磁珠偶联，尽可能多地封闭掉磁珠表面未结合蛋白的化学键。
技术实现思路
1、针对现有偶联方法过程中封闭效果的不足，本专利技术提供一种提高化学发光羧基磁珠偶联抗体后稳定性的方法。经过本专利技术方法处理后的磁珠，在化学发光平台具有良好的稳定性，同时不改变试剂的其他性能。
2、为了提高羧基磁珠偶联抗体后的稳定性，本专利技术采用以下技术方案：一种提高磁珠偶联抗体后稳定性的
3、1)取适量磁珠的储存溶液，磁分离，除去上清液后加入偶联缓冲液，室温下混匀，得到磁珠悬浮液；
4、2)将磁珠悬浮液磁分离，去除上清液后，加入偶联缓冲液和待偶联的抗体，设置好温度和反应时间，混匀后置于血液混匀仪上进行混匀偶联；
5、3)偶联结束后，磁分离，除去上清液，得到偶联抗体的磁珠；
6、4)将上述步骤中偶联抗体的磁珠，加入封闭增强剂混匀，设置好温度和反应时间，进行封闭；所述封闭增强剂具有以下成分：10-50mm tris，10-50mm(nh4)2co3，150-450mmnacl，0.01-0.1％tween-20，0.05-0.1％proclin-300，0.1-1.0％酪蛋白或1％-5％bsa或0.1-1.0％甘氨酸。
7、5)封闭结束后，磁分离，除去封闭增强剂，加入储存液，混匀后放置于2-8℃温度下备用。
8、优选的，所述磁珠为羧基磁珠，所述羧基磁珠的偶联、封闭时的浓度为2-10mg/ml。
9、优选的，所述磁珠的储存溶液浓度为0.1-5mg/ml。
10、优选的，所述偶联抗体的羧基磁珠为羧基磁珠偶联tsh捕获抗体、羧基磁珠偶联pct捕获抗体。需要说明的是，此处这两种抗体只是举例说明，本方法可以适用于所有偶联抗体的羧基磁珠。
11、优选的，所述封闭增强剂具有如下组分：10-50mm tris，10-50mm(nh4)2co3，150-450mm nacl，0.01-0.1％tween-20，0.05-0.1％proclin-300，0.1-1.0％酪蛋白和/或1％-5％bsa和/或0.1-1.0％甘氨酸。
12、优选的，所述步骤1)和步骤2)中的偶联缓冲液为ph 4-6的mes溶液或ph 7-8的hepes溶液。
13、优选的，所述步骤2)中的偶联温度为10-50℃，反应时间0.5-24h。
14、优选的，所述步骤4)中的封闭反应温度为10-50℃，反应时间0.5-24h。
15、优选的，所述步骤5)的储存液为bsa、酪蛋白和甘氨酸中的至少一种与ph 7-8的tris缓冲液配制而成，其中bsa、酪蛋白和甘氨酸的质量浓度分别为0.01-0.5％。
16、本专利技术所述偶联抗体的磁珠为羧基磁珠，商业化磁珠粒径为2.8-3.4μm，具有单分散性，基团密度适中，偶联抗体为经过筛选的商业化抗体，具有良好的反应性。
17、使用上述经过改进后的封闭方法，本专利技术的有益效果是：
18、抗体和羧基磁珠偶联结束后，加入封闭增强剂封闭0.5-24h，封闭液由bsa、甘氨酸和酪蛋白与tris缓冲液配制而成，其中封闭增强剂中的bsa、甘氨酸、酪蛋白的质量浓度分别为1.0％-5.0％，0.1％-1.0％，0.1％-1.0％。封闭时控制温度为20-35℃，封闭时间为0.5-24h，封闭增强剂可以提供合适的盐浓度和带有氨基的化合物，在协同作用下除去磁珠表面非特异性吸附的蛋白，并对裸露的磁珠位点进行填充，减少非特异性吸附，防止蛋白脱落造成的试剂性能下降和测试时试剂本底值的升高。
19、与现有技术相比，本专利技术方法处理后的羧基磁珠在化学发光平台的使用过程中具有优异的稳定性能，且不改变试剂的其他性能。本专利技术方法简单方便，易于放大，有利于工艺控制。
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1.一种提高磁珠偶联抗体后稳定性的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的提高磁珠偶联抗体后稳定性的方法，其特征在于，步骤1)所述磁珠为羧基磁珠，所述羧基磁珠的偶联、封闭时的浓度为2-10mg/mL；所述磁珠的储存溶液浓度为0.1-5mg/mL。
3.根据权利要求1所述的提高磁珠偶联抗体后稳定性的方法，其特征在于，所述偶联抗体的磁珠为羧基磁珠偶联TSH捕获抗体、羧基磁珠偶联PCT捕获抗体。
4.根据权利要求1所述的提高磁珠偶联抗体后稳定性的方法，其特征在于，所述步骤1)和步骤2)中的偶联缓冲液为pH 4-6的MES溶液或pH 7-8的HEPES溶液。
5.根据权利要求1所述的提高磁珠偶联抗体后稳定性的方法，其特征在于，所述步骤2)中的偶联反应温度为10-50℃，反应时间0.5-24h。
6.根据权利要求1所述的提高磁珠偶联抗体后稳定性的方法，其特征在于，所述步骤4)中的封闭反应温度为10-50℃，反应时间0.5-24h。
7.根据权利要求1所述的提高磁珠偶联抗体后稳定性的方法，其特征
8.一种提高磁珠偶联抗体后稳定性的方法的应用，其特征在于，所述方法用于提高化学发光平台使用的羧基磁珠偶联抗体后的稳定性。
...【技术特征摘要】
1.一种提高磁珠偶联抗体后稳定性的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的提高磁珠偶联抗体后稳定性的方法，其特征在于，步骤1)所述磁珠为羧基磁珠，所述羧基磁珠的偶联、封闭时的浓度为2-10mg/ml；所述磁珠的储存溶液浓度为0.1-5mg/ml。
3.根据权利要求1所述的提高磁珠偶联抗体后稳定性的方法，其特征在于，所述偶联抗体的磁珠为羧基磁珠偶联tsh捕获抗体、羧基磁珠偶联pct捕获抗体。
4.根据权利要求1所述的提高磁珠偶联抗体后稳定性的方法，其特征在于，所述步骤1)和步骤2)中的偶联缓冲液为ph 4-6的mes溶液或ph 7-8的hepes溶液。
5.根据权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵汉辉，赵光耀，张子昕，郑慧茹，杨承凤，
申请(专利权)人：苏州纳微生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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