一种分离植物种胚细胞核的方法技术

本发明专利技术属于农业生物学的技术领域，具体涉及一种分离植物种胚细胞核的方法。本发明专利技术通过对高油脂、高淀粉含量的植物种胚进行裂解和固液分离，使该植物细胞核进行充分的释放；通过对细胞核悬液进行Percoll溶液密度梯度离心，有利于分离得到更多完整的细胞核。实验证明，与流式细胞仪分选法相比，采用本发明专利技术的技术方案分离油松种胚后，其细胞核的完整率高达85.9％，较对照高出7.7％。因此，本发明专利技术提供的技术方案能够高效分离得到高脂质、高淀粉含量的植物种胚细胞核，为该类植物后续进行单细胞测序提供基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于农业生物学的，具体涉及一种分离植物种胚细胞核的方法。

技术介绍

1、植物单细胞测序多依靠植物的原生质体来实现，而针对难解离为原生质体的组织可以通过先提取细胞核，再进行测序的方法来达到研究细胞异质性的效果，同时由于提取细胞核的过程不存在酶解等胁迫过程，因而其能够减少假性细胞群的产生，更好地反映基因表达的真实状态。

2、然而，细胞核的纯化与提取仍存在技术难点。例如，采用流式细胞仪进行细胞核分选时，其成本较高，且分选时间过长极易导致细胞核rna的降解，不利于后续建库测序。此外，尽管现有技术中有通过密度梯度离心法粗提玉米、大豆、水稻、小麦、番茄、烟草、棉花等植物根尖、叶片等部位细胞核的报道，但不同植物材料之间存在较大的结构与成分差别，因而提取细胞核的方法无法通用。因此，如何对高脂质、高淀粉含量的植物种胚细胞核进行提取，对充分了解该植物基因表达具有重要的意义。

技术实现思路

1、本专利技术的目的在于提供一种分离植物种胚细胞核的方法，能够高效分离得到高脂质、高淀粉含量的植物种胚细胞核，具有细胞核本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种分离植物种胚细胞核的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Percoll溶液密度梯度离心包括：将细胞核悬液转移到非连续分散的Percoll溶液上层进行第一离心，之后对体积百分比为45％Percoll溶液进行第二离心；

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述细胞核悬液、体积百分比为45％的Percoll溶液和体积百分比为70％的Percoll溶液的体积比为3～4：3～4：3～4。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述第一离心的速度为250～270g，时间为8～10min，温度为4℃；...

【技术特征摘要】

1.一种分离植物种胚细胞核的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述percoll溶液密度梯度离心包括：将细胞核悬液转移到非连续分散的percoll溶液上层进行第一离心，之后对体积百分比为45％percoll溶液进行第二离心；

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述细胞核悬液、体积百分比为45％的percoll溶液和体积百分比为70％的percoll溶液的体积比为3～4：3～4：3～4。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述第一离心的速度为250～270g，时间为8～10min，温度为4℃；

5.根据权利要求1所述的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：林金星，沈诗雅，胡子建，张曦，李雨健，吴卫倩，
申请(专利权)人：北京林业大学，
类型：发明
国别省市：