【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种双靶双响应纳米药物的制备方法及其抗肿瘤的用途，具体为一种双靶双响应纳米药物的制备方法及光动力抗血管和可激活神经抑制的抗肿瘤用途。将光敏剂和神经毒性药物分别赋予靶向和条件响应性，构建能够双靶和双响应的智能纳米药物，实现药物对肿瘤血管和相关神经的逐级靶向和响应性释放，从而有效阻断肿瘤的营养和转移途径，抑制恶性肿瘤的生长和转移。
技术介绍
1、恶性肿瘤是导致人类死亡的主要原因之一。目前临床上主要治疗方式为手术或者术后联合放化疗。但由于多种恶性肿瘤发现时即为中晚期，错过了最佳的手术期，同时肿瘤细胞极易侵袭到周围组织，导致手术边界不清，增加了手术的难度，而扩大手术范围容易造成功能障碍以及多种严重副作用。术后放疗可以在一定程度上抑制局部复发，但无法避免远处转移。化疗毒副作用大且极易产生耐药。同时多项研究显示治疗后的转移和复发是造成患者治疗失败，预后不良的主要因素。因此亟需探索一种安全有效的治疗方式抑制肿瘤的复发和转移，改善肿瘤治疗效果，相关研究工作具有重要的理论意义与临床引用价值。
2、光动力疗法（photodynamic therapy, pdt）是近年来肿瘤治疗的研究热点之一，具有时间空间可控性，微创，副作用小，可重复性好等优点。其机制是利用光敏剂在特定激光照射下可以将氧气转化为具有细胞毒性的活性氧（reactive oxygen species，ros），通过损伤细胞的脂质，蛋白和核酸，从而杀伤肿瘤细胞，达到抗肿瘤的效果。与传统治疗方法相比，pdt 可以借助光纤等仪器精准定位肿瘤部位，创面小，可有效保护面
3、近年来，血管靶向的pdt得到了广大研究者的注意，其可以靶向肿瘤部位的血管内皮细胞，通过光动力效应产生的ros， 损伤肿瘤部位的血管。血管靶向的pdt不仅可以切断肿瘤细胞的营养和氧气供应，还可以阻断肿瘤的血行转移。而且针对血管的pdt克服了上述pdt的局限性，既不需要光敏剂向肿瘤内部渗透，也能够借助血管内丰富的氧气提高光动力效果。鉴于恶性肿瘤本身富含血管，并且易发生血行转移。血管靶向pdt或许能通过损伤血管，从而显著抑制恶性肿瘤的生长和转移。此外，血管的损伤有利于其他治疗药物在肿瘤部位的蓄积，可以联合其他疗法增强对肿瘤的治疗效果。
4、除了血管以外，神经作为肿瘤微环境的重要组成成分，其对肿瘤的影响在近几年得到了广大研究者的关注。越来越多的证据表明，正如健康组织需要神经调节、支配稳态一样，神经也参与了肿瘤的发生发展。肿瘤部位的神经纤维可以分泌一系列的神经递质和神经肽，如去甲肾上腺素、谷氨酸、乙酰胆碱、p物质等促癌分子，可以促进肿瘤细胞的增殖，迁移，以及向神经的侵袭，同时, 肿瘤也可以分泌一些列神经营养因子，如神经生长因子（nerve growth factors, ngfs）、脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophicfactors, bdnfs）、神经营养因子（neurotrophic factors, ntfs）等促进神经轴突的发生发展，并诱导其向肿瘤生长，增加肿瘤内部神经密度。神经的新生刺激了肿瘤的增殖和迁移，而神经也最终被肿瘤细胞包围、侵入。两者之间相互干扰，最终达到相互促进的终效应。文献显示，多种恶性肿瘤的高神经密度与其预后不良有关，尤其是颌面部的腺样囊性癌具有嗜神经的特性，极易侵袭邻近的神经并沿神经进行转移，其患者多出现疼痛、面瘫、舌麻木甚至舌功能障碍等神经受损的症状。并且据统计，出现神经浸润的恶性肿瘤患者中大多会发生复发和转移。神经浸润是肿瘤尤其头颈部肿瘤复发、转移以及严重不良预后的主要原因。因此抑制肿瘤相关神经，或许能在一定程度上抑制肿瘤的发展和转移。去神经支配是目前临床研究较多，应用最为广泛的肿瘤神经疗法，其主要是采用物理神经切除或者是化学神经消融。人类复杂的神经解剖结构使得针对性的手术去神经支配在临床实践中极具挑战性，因此针对神经的化学神经毒性疗法有望改善上述缺陷。例如6-羟多巴胺可以使肾上腺素能神经末梢化学中毒，从而抑制前列腺癌的发生和进展；直肠超声引导下向前列腺注射肉毒杆菌素可以促进肿瘤细胞凋亡；采用辣椒素消融感觉神经元可以明显抑制乳腺癌转移。以上研究表明，去神经支配可以直接切断神经与肿瘤之间的互相作用，减少肿瘤内的神经浸润，抑制肿瘤的生长、复发和转移。
5、纳米药物递送系统是目前前沿交叉性的新兴领域，因其具有高效载药，靶向给药，缓控释放，生物利用度高等优点，在肿瘤治疗中有着广泛的应用前景。采用纳米技术递送药物具有以下优势：纳米载体的疏水内核可以改善药物稳定性；实现药物在血液中的长循环，逃逸免疫细胞的清除；纳米尺寸粒子本身的高通透性滞留（enhanced permeability andretention, epr）效应使其可被动转运至肿瘤部位；实现多种药物的共载，联合不同治疗方式显著提高抗肿瘤效果。然而，单纯的纳米载体无法实现精准可控释药，而智能响应性纳米载药体系可以通过响应肿瘤部位的特定刺激或外部物理化学刺激，从而精准递药，定点可控释放药物，实现对疾病安全高效的智能化、多功能化治疗。外部物理刺激如光动力响应可以实现时间和空间上的特定控制，也可以在强度和波长上进行精确的调控，因此光动力响应性的智能纳米载药体系受到了广泛关注。例如，双硒键作为氧化还原型响应键，可以在ros存在下发生断键，从而实现纳米粒子的光动力响应性解体。因此，我们尝试借助光动力响应的纳米载体，在肿瘤血管部位的精准释药，联合多种疗法发挥抗肿瘤效果的同时，降低药物对其他组织的毒副作用。
技术实现思路
1、本专利技术旨在提供一种双靶双响应纳米药物的制备方法及其抗肿瘤的用途。该双靶双响应纳米药物的制备方法及光动力抗血管和可激活神经抑制的抗肿瘤用途是分别合成具有肿瘤血管靶向性和ros响应性键的光敏剂rc，以及具有神经靶向性和ph响应性键的神经毒性药物，并通过光敏剂与神经毒性药物的疏水相互作用，制备稳定的纳米胶束。该纳米药物可以在肿瘤血管靶向肽的作用下蓄积于肿瘤部位，此时给予特定的激光处理，在光敏剂的介导下，产生大量的ros，从而损伤肿瘤部位的血管，同时将ros响应性键断裂，从而暴露出神经靶向肽。在神经靶向肽的作用下，神经毒性药物可以被神经细胞特异性摄取，并在溶酶体中ph响应性键断裂释放出游离dox（阿霉素），从而发挥神经抑制作用。该智能纳米药物可以联合抗血管光动力疗法和神经抑制疗法，阻断肿瘤部位血管和神经，切断肿瘤的营养途径，饿死肿瘤的同时抑制肿瘤的转移。
2、本专利技术提供的一种双靶双响应纳米药物的制备方法包括的步骤：通过肿瘤血管靶向肽本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种双靶双响应纳米药物的制备方法，其特征在于：所述方法包括的步骤：通过肿瘤血管靶向肽和活性氧响应性键来修饰光敏剂，得到两亲性大分子光敏剂；通过神经靶向肽和pH响应性键修饰神经毒性药物，得到前药；通过纳米沉淀法得到多功能纳米药物；
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的两端具有功能键的聚合物大分子为两端具有功能键的高分子材料为聚乙二醇（PEG）、聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）或其他可修饰两端功能键的聚合物大分子，优选两端分别为马来酰亚胺和琥珀酰亚胺的功能键的聚乙二醇；所述的活性氧响应性键为双硒键，缩硫酮键，芳香硼酸酯等，其中优先双硒键。
4.根据权利要求1-2所述的制备方法，其特征在于：所述的光敏剂为吲哚菁绿、IR780、IR808、IR820、二氢卟吩或其组合及其衍生物，优选二氢卟吩e6（Ce6）。
5.根据权利要求1-2所述的制备方法，其特征在于：所述的肿瘤靶向肽为cRGD、iRGD、NGR肽，优选cRGD多肽；所述的神经靶向为RVG29多
6.根据权利要求1-2所述的制备方法，其特征在于：所述的神经毒性药物为阿霉素、顺铂、河豚毒素、辣椒素，优选阿霉素。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的DMSO与DDW的体积比例为1：0.5-1：4，其中优选1：1；同时第二步反应中反应液与DDW的体积比例为1：10-1：40，其中优选1：20。
8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的双靶双响应纳米药物的终浓度为1-5 mg/mL，其中优选2.5 mg/mL。
9.权利要求1-8任一项所述的制备方法制备的双靶双响应纳米药物。
10.权利要求9所述的双靶双响应纳米药物在用于制备治疗高度神经浸润和血管丰富的恶性肿瘤中药物的应用；所述的高度神经浸润和血管丰富的恶性肿瘤包括：口腔鳞癌、涎腺腺样囊性癌、舌癌等一系列的头颈部肿瘤以及胰腺癌、乳腺癌、胃癌。
...【技术特征摘要】
1.一种双靶双响应纳米药物的制备方法，其特征在于：所述方法包括的步骤：通过肿瘤血管靶向肽和活性氧响应性键来修饰光敏剂，得到两亲性大分子光敏剂；通过神经靶向肽和ph响应性键修饰神经毒性药物，得到前药；通过纳米沉淀法得到多功能纳米药物；
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的两端具有功能键的聚合物大分子为两端具有功能键的高分子材料为聚乙二醇（peg）、聚乳酸-羟基乙酸共聚物（plga）或其他可修饰两端功能键的聚合物大分子，优选两端分别为马来酰亚胺和琥珀酰亚胺的功能键的聚乙二醇；所述的活性氧响应性键为双硒键，缩硫酮键，芳香硼酸酯等，其中优先双硒键。
4.根据权利要求1-2所述的制备方法，其特征在于：所述的光敏剂为吲哚菁绿、ir780、ir808、ir820、二氢卟吩或其组合及其衍生物，优选二氢卟吩e6（ce6）。
5.根据权利要求1-2所述的制备方法，其特征在于：所述的肿瘤靶...
【专利技术属性】
技术研发人员：李玉囡，陈倩，杨晟楠，韩璐，吴佳欣，王银松，
申请(专利权)人：天津市胸科医院，
类型：发明
国别省市：
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