【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及疫苗，尤其是涉及一种用于实现新型冠状病毒异源初免-加强免疫的试剂盒及其制备方法和应用。
技术介绍
1、冠状病毒属于冠状病毒科(coronaviridae)，包括α-冠状病毒、β-冠状病毒、γ-冠状病毒和δ-冠状病毒四个属，此次暴发的新型冠状病毒(severe acute respiratorysyndrome coronavirus 2，sars-cov-2)属于β属的冠状病毒，主要经呼吸道飞沫传播，也可通过接触传播引起肺炎(novel coronavirus-infected pneumonia，ncp)，人群普遍易感。
2、虽然目前国内病毒传播得到了有效控制，但世界其他国家仍处于疫情的高发乃至二次大流行期。尤其是2021年底在博茨瓦纳和南非等非洲国家开始蔓延扩散一种新型的新冠病毒变异株。2021年11月26日，世界卫生组织召开紧急会议，将这一新型变异株b.1.1.529 命名为omicron，并将其列为与alpha、beta、gamma、delta等突变株齐名的“引发忧虑的变异毒株”(variant of concern,voc)；omicron的出现引发了新一波的感染浪潮，迅速席卷全球。原始株疫苗目前能够充分预防新冠重症，但预防感染的能力稍弱。疫苗接种后omicron感染者的常见症状已经完全不同，最常见的症状依次是：咳嗽(83％)、流涕(78％)、疲劳(74％)、咽痛(72％)和头痛(68％)，现有数据表明omicron突变株传染性极强，对疫苗的免疫逃逸非常明显，新型冠状病毒至今仍然严重威胁人类健
3、虽然目前已被条件性批准的紧急授权使用的新冠疫苗有mrna疫苗，腺病毒载体疫苗，蛋白疫苗、灭活疫苗等，但由于各种已上市疫苗存在着如诱导的体液免疫对突变株的中和效果下降、不能同时激发高水平细胞免疫及体液免疫等问题，因此亟需结合不同形式疫苗联合免疫来克服上述不足之处。
4、有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的第一目的在于提供一种用于实现新型冠状病毒异源初免-加强免疫的试剂盒，以缓解目前单一种类新冠疫苗诱导的体液免疫对突变株的中和效果下降、不能同时激发强的细胞免疫及体液免疫的技术问题。
2、本专利技术的第二目的在于提供上述用于实现新型冠状病毒异源初免-加强免疫的试剂盒的制备方法和应用。
3、为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：
4、根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种用于实现新型冠状病毒异源初免-加强免疫的试剂盒，包含独立包装的初免试剂和独立包装的加强免疫试剂；
5、所述初免试剂为新型冠状病毒dna疫苗，且所述加强免疫试剂为新型冠状病毒重组蛋白疫苗；或，所述初免试剂为新型冠状病毒重组蛋白疫苗，且所述加强免疫试剂为新型冠状病毒dna疫苗；
6、所述新型冠状病毒重组蛋白疫苗含有第一抗原；所述新型冠状病毒dna疫苗含有编码第二抗原的dna片段；
7、所述第一抗原和所述第二抗原分别独立的为新型冠状病毒抗原或其抗原表位；所述第一抗原和所述第二抗原相同，或具有70％以上的一致性。
8、根据本专利技术的另一个方面，本专利技术还提供了上述试剂盒的制备方法，包括：
9、(a)制备新型冠状病毒dna疫苗并独立包装；
10、(b)制备新型冠状病毒重组蛋白疫苗并独立包装；
11、(c)将分别独立包装的新型冠状病毒dna疫苗和新型冠状病毒重组蛋白疫苗分别独立的标识为初免试剂或加强免疫试剂，组装成试剂盒。
12、根据本专利技术的另一个方面，本专利技术还提供了上述用于实现新型冠状病毒异源初免- 加强免疫的试剂盒在制备预防和/或治疗新型冠状病毒感染和/或新型冠状病毒感染引发的疾病covid-19的药物或产品中的应用。
13、根据本专利技术的另一个方面，本专利技术还提供了一种预防和/或治疗新型冠状病毒sars- cov-2感染和/或新型冠状病毒sars-cov-2感染引发的疾病covid-19的方法，该方法包括向受试者施用上述用于实现新型冠状病毒异源初免-加强免疫的试剂盒中的疫苗。
14、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
15、本专利技术提供的用于实现新型冠状病毒异源初免-加强免疫的试剂盒包含独立包装的初免试剂和独立包装的加强免疫试剂。该试剂盒使用时，初免试剂用于初免，加强免疫试剂用于加强免疫。初免试剂和加强免疫试剂分别独立的为新型冠状病毒dna疫苗和新型冠状病毒重组蛋白疫苗，且初免试剂和加强免疫试剂所使用的疫苗种类不同，能够实现新型冠状病毒dna疫苗和新型冠状病毒重组蛋白疫苗的联合免疫方案。
16、本专利技术提供的试剂盒中新型冠状病毒dna疫苗中dna编码的抗原或抗原表位与新型冠状病毒重组蛋白疫苗中含有的抗原或抗原表位相同，或者至少具有70％的一致性，使初免和二次免疫的抗原同源性更高，能够取得更好的免疫效果。
17、本专利技术提供的试剂盒采用异源初免-加强免疫策略，能够激发出更为高效地免疫反应，能够克服现有单一种类疫苗的不足，从而更好地发挥新型冠状病毒疫苗的免疫效果。经本专利技术实验证实，这种异源初免-加强免疫策略所产生的免疫原性高于同源初免-加强免疫策略。异源初免-加强免疫策略对靶抗原的免疫反应具有加强协同作用，这种协同作用表现在抗原特异性功能性t细胞数量的增加、加强的细胞免疫和体液免疫，以及较为广谱的免疫反应。因此本专利技术提供的用于实现新型冠状病毒异源初免-加强免疫的试剂盒诱发的保护性免疫应答要优于单独施用单个成分所诱发的免疫应答，能够提供针对多种sars-cov-2病毒突变株的保护作用。
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1.用于实现新型冠状病毒异源初免-加强免疫的试剂盒，其特征在于，包含独立包装的初免试剂和独立包装的加强免疫试剂；
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述新型冠状病毒抗原或其抗原表位的氨基酸序列部分或全部来源于新型冠状病毒的表面刺突蛋白的受体结合区；
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述第一抗原的氨基酸序列含有由两个如seq_4所示的氨基酸序列直接串联得到的序列；
4.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述新型冠状病毒DNA疫苗包含质粒，所述质粒由表达载体，和插入所述表达载体的外源序列部分组成，所述外源序列部分含有所述编码第二抗原的DNA片段；
5.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述初免试剂和所述加强免疫试剂的数量比为1～2：1～2；
6.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述新型冠状病毒DNA疫苗和所述新型冠状病毒重组蛋白疫苗还分别独立的包含药学上可接受的赋形剂；所述药学上可接受的赋形剂包括载体、稀释剂、助悬剂、转染促进剂、佐剂和编码佐剂的核苷酸中
7.权利要求1-6任一项所述的新型冠状病毒疫苗试剂盒的制备方法，其特征在于，包括：
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(a)包括制备质粒，所述制备质粒包括将所述编码第二抗原的DNA片段插入表达载体中；
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(b)包括将编码所述第一抗原的核苷酸序列的5’端加入编码信号肽的序列，3’端加上终止密码子，进行克隆表达，筛选正确的重组子，然后转染表达系统的细胞进行表达，表达后收集细胞上清，纯化得到所述第一抗原；
10.权利要求1-6任一项所述的用于实现新型冠状病毒异源初免-加强免疫的试剂盒在制备预防和/或治疗新型冠状病毒感染和/或新型冠状病毒感染引发的疾病COVID-19的药物或产品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.用于实现新型冠状病毒异源初免-加强免疫的试剂盒，其特征在于，包含独立包装的初免试剂和独立包装的加强免疫试剂；
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述新型冠状病毒抗原或其抗原表位的氨基酸序列部分或全部来源于新型冠状病毒的表面刺突蛋白的受体结合区；
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述第一抗原的氨基酸序列含有由两个如seq_4所示的氨基酸序列直接串联得到的序列；
4.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述新型冠状病毒dna疫苗包含质粒，所述质粒由表达载体，和插入所述表达载体的外源序列部分组成，所述外源序列部分含有所述编码第二抗原的dna片段；
5.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述初免试剂和所述加强免疫试剂的数量比为1～2：1～2；
6.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述新型冠状病毒dna疫苗和所述新型冠状病...
【专利技术属性】
技术研发人员：高福，戴连攀，安亚玲，徐坤，赵干，侯佳望，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：
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