【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药的，具体涉及一种功能化红细胞的应用。
技术介绍
1、白细胞粘附是机体处理炎症反应的正常现象，当炎症反应发生时，体内补体系统会被激活，同时释放过敏毒素例如c3a以及c5a，这些过敏毒素都能促进白细胞的粘附。不仅如此，当白细胞与材料接触时会生成补体激活蛋白(例如ic3b)，这也会促进白细胞黏附在材料表面。
2、近些年有研究表明，细胞膜结构在抵抗生物粘附和生物污染方面起着关键作用。包裹同源细胞膜后的纳米粒子，在体内可以避免被白细胞吞噬从而延长了在体内循环的时间。在我们之前的研究中，通过对红细胞进行功能化修饰，可将其直接代替粒子用于ctc的捕获。
3、因此，本专利技术旨在研究一种采用功能化红细胞制备可用于抗白细胞黏附涂层。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种功能化红细胞的应用，应用于制备抗白细胞黏附涂层。
2、本专利技术实现目的所采用的方案是：一种功能化红细胞的应用，应用于制备抗白细胞黏附涂层，所述功能化红细胞为dspe-peg-fa修饰的红细胞。
3、优选地，所述抗白细胞黏附涂层的制备方法包括以下步骤：
4、(1)将pbs配置的dspe-peg-fa的溶液与红细胞混合均匀，静置孵育，pbs离心洗涤后获得表面修饰叶酸的红细胞；
5、(2)将步骤(1)获得的表面修饰叶酸的红细胞与pbs配置的聚凝胺溶液混合均匀，静置孵育，用pbs离心洗涤除去未反应的聚凝胺后获得表面修饰聚凝胺与fa的红细胞
6、(3)将过量步骤(2)得到的溶液滴加在氨基载玻片上，静置孵育，用pbs冲洗掉未能黏附在载玻片上多余的红细胞，得到所述抗白细胞黏附涂层。
7、通常情况下，红细胞表面会产生静电斥力，阻止彼此靠近，这会导致无法形成致密的仿生结构。而带正电荷的聚合物，例如聚凝胺((1,5-dimethyl-1,5-diazaundecamethylene polymethobromide)或聚赖氨酸(polylysine)可以克服这种作用力并且可以凝集人的红血细胞。在实验的过程中，我们发现经过聚凝胺处理后的红细胞在黏附载玻片上致密排布形成皮肤状仿生结构，同时该仿生层依然具有出色的抗白细胞黏附的能力。
8、优选地，所述步骤(1)中，dspe-peg-fa的溶液的浓度为0.05～0.8mg/ml。
9、优选地，所述步骤(1)中，孵育温度为4～25℃，孵育时间为1～10min。
10、优选地，所述步骤(1)中，表面修饰叶酸的红细胞的叶酸修饰量为3.14×10-9～6.27×10-8mol每五千万个红细胞。
11、优选地，所述步骤(2)中，聚凝胺溶液的浓度为1～10mg/ml。
12、优选地，所述步骤(2)中，孵育温度为4～25℃，孵育时间为1～10min。
13、优选地，所述步骤(3)中，孵育温度为4～25℃，孵育时间为30min～2h。
14、优选地，所述红细胞来源于血液中。
15、红细胞修饰原理：在红细胞表面修饰叶酸分子，叶酸的修饰是利用亲疏水作用力将二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇-叶酸(dspe-peg-fa)嵌入红细胞膜内。dspe-peg-fa是一种两亲嵌段共聚物，dspe端通过亲疏水相互作用嵌入疏水性的红细胞膜内部，dspe端的成功嵌入标志着红细胞表面叶酸的修饰成功。红细胞可以利用疏水作用力将二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺类物质(dspe)锚定在细胞膜表面。dspe的另一端可以通过连接聚乙二醇(peg)用以实现对红细胞的功能化修饰。不同修饰量的dspe-peg会对红细胞的形态造成不同的影响。这是由于随着细胞膜表面修饰的peg量越来越大，peg链段之间分子的斥力使得细胞形态发生变化。本专利技术用dspe-peg-fa为模型分子来修饰红细胞制备功能化红细胞，并系统的研究了红细胞膜上dspe-peg-fa修饰量对红细胞形态的影响。同时通过实验，在保持功能化红细胞制备得到的仿生层抗白细胞黏附能力不受影响的前提下确定了模型分子的最大修饰量。
16、平面致密红细胞仿生涂层设计原理：
17、红细胞与氨基载玻片可通过膜蛋白与载玻片表面氨基之间的氢键作用黏附在载玻片上，而由于红细胞之间存在静电斥力，因此难以在载玻片表面形成致密层状状态。对红细胞进行聚凝胺溶液浸泡处理后，可以大大减小这种静电斥力。这是由于红细胞均带有负电荷，在经过聚凝胺溶液浸泡后，表面可以吸附一层聚阳离子聚合物聚凝胺，从而实现电中性，使得红细胞之间的静电斥力消失。经过聚凝胺处理后的红细胞可以在氨基载玻片上形成致密的单细胞层状结构。
18、通过聚凝胺的修饰可以让红细胞在氨基载玻片上致密排布，那么加入解凝剂枸橼酸钠则可以中和聚凝胺的电荷，使得聚凝胺从红细胞表面脱落，红细胞表面电荷恢复至修饰前的状态，导致大量红细胞从载玻片上脱落。不仅如此，加入红细胞裂解液可通过破坏红细胞结构进一步使红细胞从基底表面脱落。因此，通过将致密红细胞仿生涂层浸入至红细胞裂解液配置的枸橼酸钠溶液中可以实现基底表面大部分红细胞的脱落。
19、本专利技术具有以下优点和有益效果：
20、本专利技术中将功能化红细胞用于制备抗白细胞黏附涂层，具有良好的抗白细胞黏附能力。具体的采用dspe-peg-fa修饰的红细胞，红细胞还可以利用疏水作用力将二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺类物质(dspe)锚定在细胞膜表面。
21、本专利技术利用疏水作用力将dspe-peg-fa修饰在红细胞膜上，并探究了红细胞上dspe-peg-fa的修饰量对红细胞形态的影响。随着红细胞膜上dspe-peg-fa的修饰量逐渐增大，红细胞的形貌逐渐由最初的双凹圆碟形，逐渐变为海胆状，最终在修饰量达到最大时，红细胞成为球形。本专利技术还成功利用聚凝胺处理红细胞得到致密的单层红细胞仿生层，该仿生层具有极佳的抗白细胞黏附能力。同时本专利技术证明了聚凝胺不会影响dspe-peg-fa在红细胞上的修饰，最后本专利技术在保证仿生层抗白细胞黏附能力不受影响的情况下，确定了红细胞膜上最大的dspe-peg-fa修饰量。
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1.一种功能化红细胞的应用，其特征在于：应用于制备抗白细胞黏附涂层，所述功能化红细胞为DSPE-PEG-FA修饰的红细胞。
2.根据权利要求1所述的功能化红细胞的应用，其特征在于：所述抗白细胞黏附涂层的制备方法包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的功能化红细胞的应用，其特征在于：所述步骤(1)中，DSPE-PEG-FA的溶液的浓度为0.05～0.8mg/mL。
4.根据权利要求2所述的功能化红细胞的应用，其特征在于：所述步骤(1)中，孵育温度为4～25℃，孵育时间为1～10min。
5.根据权利要求2所述的功能化红细胞的应用，其特征在于：所述步骤(1)中，表面修饰叶酸的红细胞的叶酸修饰量为3.14×10-9～6.27×10-8mol每五千万个红细胞。
6.根据权利要求2所述的功能化红细胞的应用，其特征在于：所述步骤(2)中，聚凝胺溶液的浓度为1～10mg/mL。
7.根据权利要求2所述的功能化红细胞的应用，其特征在于：所述步骤(2)中，孵育温度为4～25℃，孵育时间为1～10min。
8.根据权
9.根据权利要求1或2所述的功能化红细胞的应用，其特征在于：所述红细胞来源于血液中。
...【技术特征摘要】
1.一种功能化红细胞的应用，其特征在于：应用于制备抗白细胞黏附涂层，所述功能化红细胞为dspe-peg-fa修饰的红细胞。
2.根据权利要求1所述的功能化红细胞的应用，其特征在于：所述抗白细胞黏附涂层的制备方法包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的功能化红细胞的应用，其特征在于：所述步骤(1)中，dspe-peg-fa的溶液的浓度为0.05～0.8mg/ml。
4.根据权利要求2所述的功能化红细胞的应用，其特征在于：所述步骤(1)中，孵育温度为4～25℃，孵育时间为1～10min。
5.根据权利要求2所述的功能化红细胞的应用，其特征在于：所述步骤(...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘武，
申请(专利权)人：江阴市珞珈飞流数字科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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