【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物药物领域，具体涉及一种鸦胆子外泌体在制备抗乳腺癌药物和抑制肿瘤血管生成药物中的应用。
技术介绍
1、恶性肿瘤是威胁人类健康亟待解决的困局。临床的大多数治疗方案，如手术切除和放化疗等，都存在明显的副作用大、化疗耐药、复发率高等瓶颈。由于单药治疗无法达到预期的肿瘤治疗效果，因此人们开始寻求多模式联合治疗，例如同时解决肿瘤细胞及其生存所依赖的微环境。血管生成是实体瘤微环境的关键参与者，促进肿瘤进展所需的氧气和营养供应。调节肿瘤血管生成的血管内皮生长因子vegf在多种实体瘤中异常高表达，与肿瘤的发生、转移密切相关，提示联合抗肿瘤与抑制肿瘤微环境中血管生成可能是一种有前景的疗法。
2、外泌体是在细胞分泌过程中形成的一类直径约为30-150nm，具有脂质双分子层结构的细胞外囊泡，包含了多种来源于母细胞的蛋白质、核酸、脂质等生物活性物质，对多种生物过程与疾病治疗具有重要的调控作用。不仅能够被细胞高效摄取，提高生物大分子活性物质的体内生物利用度，还可进一步携载其它外源性药物或功能分子，用于药物的联合递送与治疗等多种用途。
3、近年来，药用植物分泌的外泌体囊泡同样被证明具有显著的治疗作用，有望发展成为一类全新的天然纳米制剂。与动物、细菌外泌体相比，具有生物相容性、稳定性更高、生物半衰期更长、细胞与组织穿透性更高等显著优势。使其在作为天然的纳米制剂靶向递送载体用于肿瘤、炎症、免疫治疗等领域具有重要的临床应用价值，在创新药物制剂领域具有巨大的开发前景。然而，目前植物外泌体研究较缺乏，相关的具体机制仍不明确，极
技术实现思路
1、针对现有用于肿瘤治疗的药物不足之处，本专利技术旨在提供一种高效安全的用于抗肿瘤与抗肿瘤微环境中血管生成的新型植物外泌体纳米药物。
2、本专利技术首次成功制备分离到药用植物鸦胆子来源的外泌体，证明其可以通过递送功效核酸分子调节相关通路抑制肿瘤细胞增殖、迁移和促进活性氧相关的细胞凋亡以用于肿瘤治疗。本专利技术中的鸦胆子外泌体能进一步作用于肿瘤微环境中的血管内皮细胞，抑制血管生长因子的分泌与内皮细胞功能，进而发挥抗肿瘤微环境中血管生成的功效。本专利技术中的鸦胆子外泌体具有制备方法简单，抗肿瘤和血管生成功效显著，生物相容性良好，递送效率高效等优点。本专利技术将对各类药用植物外泌体的进一步开发和在肿瘤治疗中的应用提供新型的借鉴意义与价值。
3、为实现上述目的，本专利技术旨在解决技术问题时采用的技术方案为：
4、本专利技术提出了鸦胆子外泌体在制备抗乳腺癌药物中的应用。
5、本专利技术还提出了鸦胆子外泌体在制备抑制肿瘤血管生成药物中的应用。
6、进一步的，所述肿瘤为乳腺肿瘤。
7、进一步的，所述鸦胆子外泌体由以下方法制备：
8、1)将新鲜药用鸦胆子活性部位与磷酸盐缓冲液混合进行榨汁，榨汁次数为5-15次，每次榨汁时间为15-60s，得到含鸦胆子外泌体的浆体；
9、2)滤除步骤1)得到的浆体中的残渣并收集汁液，汁液通过差速离心法得到含鸦胆子外泌体的沉淀物；
10、3)将步骤2)得到的沉淀物用pbs重悬，纯化得到所述鸦胆子外泌体；
11、更进一步的，所述的步骤2)中，所述的差速离心法为：将过滤所得汁液在4℃依次1000×g离心5-20min，4000×g离心20-60min，10000×g离心60-120min，得到上清液；再将上清液在4℃100000×g-150000×g离心60-150min，得到含鸦胆子外泌体的沉淀物。
12、更进一步的，步骤3)中，所述的纯化为经0.22μm膜过滤器过滤。
13、更进一步的，步骤3)中，所述的纯化为采用蔗糖密度梯度离心法进行纯化。
14、进一步的，所述鸦胆子外泌体中含有活性物质，所述活性物质来源于鸦胆子外泌体内含的蛋白质、脂质、mrna、小rna中的一种或多种；所述小rna为mirna、lncrna和circlerna中的一种或多种。
15、本专利技术所用试剂和原料均市售可得。
16、本专利技术的有益之处在于：
17、(1)本专利技术提供的鸦胆子外泌体廉价易得，安全低毒，生物相容性高，可以克服肿瘤治疗药物成本高、疗效差、易耐药、毒性与不良反应大、吸收与递送效率低等问题。
18、(2)本专利技术提供的鸦胆子外泌体能显著降低肿瘤细胞中pi3k/akt/mtor通路蛋白的表达，抑制肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭。通过ros/caspase途径高效诱导肿瘤细胞凋亡，从而发挥抗肿瘤生长与转移的疗效。
19、(3)本专利技术提供的鸦胆子外泌体能显著降低血管内皮细胞中vegf血管生长因子的分泌，抑制内皮细胞增殖、迁移和管形成，从而发挥抗肿瘤血管生成的疗效。
20、(4)本专利技术提供的鸦胆子外泌体能作为一种生物大分子递送纳米载体，被细胞高效摄取并递送内部所含活性物质，跨界调控哺乳动物细胞多种基因和蛋白的表达发挥疗效，为动植物跨界医疗提供了一个新的策略。
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1.鸦胆子外泌体在制备抗乳腺癌药物中的应用。
2.鸦胆子外泌体在制备抑制肿瘤血管生成药物中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为乳腺肿瘤。
4.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述鸦胆子外泌体由以下方法制备：
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的步骤2)中，所述的差速离心法为：将过滤所得汁液在4℃依次1000×g离心5-20min，4000×g离心20-60min，10000×g离心60-120min，得到上清液；再将上清液在4℃100000×g-150000×g离心60-150min，得到含鸦胆子外泌体的沉淀物。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤3)中，所述的纯化为经0.22μm膜过滤器过滤。
7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤3)中，所述的纯化为采用蔗糖密度梯度离心法进行纯化。
8.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述鸦胆子外泌体中含有活性物质，所述活性物质来源于鸦胆子外泌体内含的蛋白质、脂质、mRN
...【技术特征摘要】
1.鸦胆子外泌体在制备抗乳腺癌药物中的应用。
2.鸦胆子外泌体在制备抑制肿瘤血管生成药物中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为乳腺肿瘤。
4.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述鸦胆子外泌体由以下方法制备：
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的步骤2)中，所述的差速离心法为：将过滤所得汁液在4℃依次1000×g离心5-20min，4000×g离心20-60min，10000×g离心60-120min，得到上清液；再将上清液在4℃100000×g...
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