【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医学检测的，特别是涉及口蹄疫病毒抗体和/或水疱性口炎病毒的检测试剂盒。
技术介绍
1、口蹄疫是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,fmdv)引起的,发生于牛、羊、猪等偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。世界动物卫生组织将口蹄疫列为动物a类烈性传染病,严重危害畜牧业的健康发展以及相关产品的对外贸易。
2、水疱性口炎是由水疱性口炎病毒(vesicularstomatitisvirus，vsv)引起的一种急性热性人畜共患传染，会造成动物的口腔黏膜表层和深层组织的炎症，该病症与口蹄疫相似处在于发病位置相同、临床特征十分相似，无法通过临床特征加以鉴别，因此就需要进一步的進行实验室诊断来为临床诊断提供可靠依据。
3、胶体金是由氯金酸(haucl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷，与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能，可以与葡萄球菌a蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生
4、目前，还未见到对口蹄疫和水疱性口炎同时进行检测的胶体金试纸；因此，亟需一种能够对口蹄疫和水疱性口炎同时进行检测的胶体金试纸方法，对口蹄疫和水疱性口炎进行快速区分。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是能够对口蹄疫和水疱性口炎同时进行检测，对口蹄疫和水疱性口炎进行快速区分；同时，在疫苗生产过程中，绝大部分的非结构蛋白已被消除，因此免疫动物后，体内不产生非结构蛋白抗体，而自然感染动物体内有非结构蛋白的表达可刺激产生相应的抗体，因此本专利技术旨在利用检测非结构蛋白抗体来区分自然感染动物和免疫动物。
2、基于上述目的，本专利技术提出了一种口蹄疫病毒抗体和/或水疱性口炎病毒的检测试剂盒，包括检测卡、样本稀释液和吸滴管，所述检测卡包括底板、一个样品垫和两个检测部；
3、其中，所述底板用于固定所述样品垫和两个所述检测部；所述样品垫用于接收待测样品；所述检测部用于对所述待测样品进行检测；
4、两个所述检测部为第一检测部和第二检测部，其中，所述第一检测部包括第一胶体金垫、第一硝酸纤维素膜和第一吸水垫；所述第二检测部包括第二胶体金垫、第二硝酸纤维素膜和第二吸水垫；
5、所述第一胶体金垫吸附有第一胶体金标记物和第二胶体金标记物，所述第一胶体金标记物为胶体金标记的第一口蹄疫o型病毒抗原，所述第二胶体金标记物为第二口蹄疫o型病毒抗原；所述第二胶体金垫吸附有第三胶体金标记物，所述第三胶体金标记物为胶体金标记的水疱性口炎病毒抗原。
6、进一步的，所述第一硝酸纤维素膜上设置有两条检测线和质控线；所述第二硝酸纤维素膜上设置有一条检测线和质控线。
7、进一步的，所述第一硝酸纤维素膜上设置有两条检测线，两条所述检测线分别吸附有羊抗鼠igg抗体。
8、进一步的，所述质控线吸附有鼠抗人igg抗体。
9、进一步的，所述第一口蹄疫o型病毒抗原为口蹄疫o型病毒vp1蛋白，所述口蹄疫o型病毒vp1蛋白的序列如seq id no.1所示。
10、进一步的，所述第二口蹄疫o型病毒抗原为口蹄疫o型病毒3abc蛋白，所述口蹄疫o型病毒3abc蛋白的序列如seq id no.2所示。
11、进一步的，所述水疱性口炎病毒抗原的制备方法为：
12、将水疱性口炎病毒毒株接种于vero单层细胞，在dmem无血清维持液中培养后收获病毒，4℃反复冻融后，除去细胞碎片，获得水疱性口炎病毒抗原。
13、进一步的，所述水疱性口炎病毒抗原的制备方法为：
14、将水疱性口炎病毒毒株接种于vero单层细胞，在dmem无血清维持液至少48小时细胞病变达80％以上时收获病毒4℃反复冻融至少3次后，30000r/min离心除去细胞碎片获得上清液，对所述上清液进行纯化，获得水疱性口炎病毒抗原。
15、进一步的，所述胶体金的制备方法为：取氯化金加到超纯水中加热搅拌至沸；沸腾后加入柠檬酸三钠液，振荡混匀，待煮至颜色发生变化后进行冷却，获得所述胶体金。
16、本专利技术还提供一种根据任一所述的检测试剂盒对口蹄疫o型病毒和/或水疱性口炎病毒的检测方法，包括：吸取血样滴加在所述样品垫上，然后在所述样品垫上滴加所述样本稀释液，水平静置等待后查看结果；所述检测方法用于非疾病的诊断和/或治疗。
17、与现有技术相比，其有益效果在于：
18、本专利技术公开的检测试剂盒能够对口蹄疫和水疱性口炎同时进行检测，对口蹄疫和水疱性口炎进行快速区分；同时，在疫苗生产过程中，绝大部分的非结构蛋白已被消除，因此免疫动物后，体内不产生非结构蛋白抗体，而自然感染动物体内有非结构蛋白的表达可刺激产生相应的抗体，因此本专利技术公开的检测试剂盒通过利用检测非结构蛋白抗体完成了区分自然感染动物和免疫动物的目的。
19、本专利技术的检测试剂盒检测过程中无需附加其它仪器设备和试剂，可节省检测成本，降低检测费用，具有广阔的市场前景。
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1.一种口蹄疫病毒抗体和/或水疱性口炎病毒的检测试剂盒，包括检测卡、样本稀释液和吸滴管，其特征在于，所述检测卡包括底板、一个样品垫和两个检测部；
2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述第一硝酸纤维素膜上设置有两条检测线和质控线；所述第二硝酸纤维素膜上设置有一条检测线和质控线。
3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述第一硝酸纤维素膜上设置有两条检测线，两条所述检测线分别吸附有羊抗鼠IgG抗体；所述第二硝酸纤维素膜的检测线吸附有所述羊抗鼠IgG抗体。
4.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述质控线吸附有鼠抗人IgG抗体。
5.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述第一口蹄疫O型病毒抗原为口蹄疫O型病毒VP1蛋白，所述口蹄疫O型病毒VP1蛋白的序列如SEQ ID No.1所示。
6.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述第二口蹄疫O型病毒抗原为口蹄疫O型病毒3ABC蛋白，所述口蹄疫O型病毒3ABC蛋白的序列如SEQ ID No.2所示。
7.根据权利要求3
8.根据权利要求7所述的检测试剂盒，其特征在于，所述水疱性口炎病毒抗原的制备方法为：
9.根据权利要求1-8任一项所述的检测试剂盒，其特征在于，所述胶体金的制备方法为：取氯化金加到超纯水中加热搅拌至沸；沸腾后加入柠檬酸三钠液，振荡混匀，待煮至颜色发生变化后进行冷却，获得所述胶体金。
10.一种根据权利要求1-9任一项所述的检测试剂盒对口蹄疫O型病毒和/或水疱性口炎病毒的检测方法，其特征在于，包括：吸取血样滴加在所述样品垫上，然后在所述样品垫上滴加所述样本稀释液，水平静置等待后查看结果；
...【技术特征摘要】
1.一种口蹄疫病毒抗体和/或水疱性口炎病毒的检测试剂盒，包括检测卡、样本稀释液和吸滴管，其特征在于，所述检测卡包括底板、一个样品垫和两个检测部；
2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述第一硝酸纤维素膜上设置有两条检测线和质控线；所述第二硝酸纤维素膜上设置有一条检测线和质控线。
3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述第一硝酸纤维素膜上设置有两条检测线，两条所述检测线分别吸附有羊抗鼠igg抗体；所述第二硝酸纤维素膜的检测线吸附有所述羊抗鼠igg抗体。
4.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述质控线吸附有鼠抗人igg抗体。
5.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述第一口蹄疫o型病毒抗原为口蹄疫o型病毒vp1蛋白，所述口蹄疫o型病毒vp1蛋白的序列如seq id no.1所示。
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【专利技术属性】
技术研发人员：左青山，宋启超，田露露，刘禄情，
申请(专利权)人：上海鸣捷生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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