【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于多肽的合成制备，具体涉及一种“困难多肽”的合成方法及应用。
技术介绍
1、公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
2、多肽是一种由两个或两个以上氨基酸通过肽键连接而成的生物活性物质，能够广泛作用于免疫系统、心血管系统、内分泌系统、血液系统。消化系统等。凭借分子量适中、特异性强及毒性小等特性，多肽化合物也受到制药领域越来越多的关注。目前已上市的多肽药物被广泛应用于多种疾病的治疗，包括肿瘤、糖尿病、骨质疏松症、病毒与细菌感染、慢性疼痛等。多肽产品的获取主要包括动植物组织提取、基因重组表达和化学合成三种途径。与前两种方法相比，化学合成方式能够更加方便快捷地对多肽进行结构修饰，如引入非天然氨基酸，环化，特定位点的糖基化、磷酸化、乙酰化等，从而调节其稳定性、亲和性以及成药性。
3、1963年由美国化学家r.bruce merrifield教授专利技术的多肽固相合成技术，能够在一个反应容器中进行所有的反应，简化了操作步骤，避免了中间体的分离纯化，便于自动化操作，极大地促进了多肽相关领域的发展。随着固相合成技术的不断发展和优化，大量具有生物活性的中小型多肽分子能够在短时间内被高效合成。然而，对于一些具有较多疏水性氨基酸片段且易形成β-折叠、α-螺旋等二级结构的“困难多肽”，其固相合成仍然存在巨大挑战。目前解决“困难多肽”合成的方法主要有改变反应体系、改变反应条件、改变合成策略、采用新的合成技
4、有研究公开了一种丝氨酸/苏氨酸连接的机制，具体如下：
5、
6、但在上述机制中，需通过多肽片段的连接反应，生成相应的中间体，这主要依赖于两条多肽片段的溶解性，然而“困难多肽”的溶解性往往较差，因此限制了上述机制方法的应用。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术提供一种简单有效的“困难多肽”固相合成方法，通过高效的合成与引入相关二肽片段，避免了多肽序列延长过程中二级结构的产生，避免了溶解度差问题，有效地提高了“困难多肽”的固相合成产率与纯度。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、本专利技术的第一个方面，提供了一种“困难多肽”的合成方法，包括：
4、将氨基保护的α-氨基酸水杨醛酯，与丝氨酸或苏氨酸苄酯进行连接反应，得到全保护的二肽中间体，然后，将所述全保护的二肽中间体进行氢化反应，脱除苄基保护，合成得到ψ2-hydroxyphenylpro类二肽化合物；
5、在固相树脂上采用固相合成策略将ψ2-hydroxyphenylpro类二肽化合物引入多肽序列，得到具有目标序列的多肽；
6、将所述具有目标序列的多肽从固相树脂上裂解下来，同时酸解开环，得到目标多肽产物。
7、在一些实施方式中，所述ψ2-hydroxyphenylpro类二肽化合物的结构式如下式所示：
8、
9、其中，r1为任何侧链，r2为h或me。
10、在一些实施方式中，所述ψ2-hydroxyphenylpro类二肽化合物引入多肽序列的方法为按照目标序列依次进行氨基酸或二肽片段的偶合。
11、在一些实施方式中，氨基酸与二肽化合物的临时保护基团为fmoc。
12、在一些实施方式中，所述固相树脂为2-氯三甲苯树脂、rink树脂、hmpa-pega树脂、wang树脂或fmpb am树脂。
13、在一些实施方式中，氨基保护的α-氨基酸为fmoc保护的天然或非天然氨基酸；
14、在一些实施方式中，连接反应的溶剂为醋酸和吡啶混合溶液；
15、在一些实施方式中，氢化反应的溶剂为甲醇或乙酸乙酯。
16、在一些实施方式中，固相合成过程中，反应溶剂为二氯甲烷、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二乙基甲酰胺、氯仿、四氢呋喃、n-甲基吡咯烷酮和二甲基亚砜中的一种或多种；
17、在一些实施方式中，偶合反应中，缩合试剂为hatu、hbtu、dcc、dic、edci、pybop、pyaop、oxyma pure、hoat、hobt、hoobt、boat、dmap中的一种或几种；
18、在一些实施方式中，fmoc保护基的脱除溶液为哌啶和dmf的混合溶液。
19、在一些实施方式中，多肽裂解液为三氟乙酸、三乙基硅烷和水的混合物，体积比例为95：2.5：2.5，裂解时间为120min-180min。
20、本专利技术的第二个方面，提供了上述的方法合成的多肽在制备免疫系统、心血管系统、内分泌系统、血液系统或消化系统疾病的药物中的应用。
21、本专利技术的第三个方面，提供了ψ2-hydroxyphenylpro类二肽化合物在制备多肽中的应用。
22、本专利技术的有益效果
23、(1)本专利技术通过丝氨酸/苏氨酸连接反应，可以高效的合成2-羟基苯基ψphenolpro类二肽化合物。此反应的反应时间短，操作简便，产率高，二肽产物无需柱层析纯化，可直接应用于后续的多肽固相合成。
24、(2)本专利技术的2-羟基苯基ψphenolpro类二肽化合物，能够有效的提高“困难多肽”的固相合成效率，特别是对于一些序列较长、易形成二级结构的多肽序列，能够显著提高多肽产物的产率和纯度。
25、(3)本专利技术的方法简单易行，且已在多个药用多肽的合成中得以验证，在多肽的实验室合成研究和工业化生产中都具有很高的实用价值。
26、(4)本专利技术制备方法简单、实用性强，易于推广。
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1.一种“困难多肽”的合成方法，其特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的“困难多肽”的合成方法，其特征在于，所述ψ2-hydroxyphenylpro类二肽化合物的结构式如下式所示：
3.如权利要求1所述的“困难多肽”的合成方法，其特征在于，所述ψ2-hydroxyphenylpro类二肽化合物引入多肽序列的方法为按照目标序列依次进行氨基酸或二肽片段的偶合。
4.如权利要求1所述的“困难多肽”的合成方法，其特征在于，氨基酸与二肽化合物的临时保护基团为Fmoc。
5.如权利要求1所述的“困难多肽”的合成方法，其特征在于，所述固相树脂为2-氯三甲苯树脂、Rink树脂、HMPA-PEGA树脂、Wang树脂或FMPB AM树脂。
6.如权利要求1所述的“困难多肽”的合成方法，其特征在于，氨基保护的α-氨基酸为Fmoc保护的天然或非天然氨基酸；
7.如权利要求1所述的“困难多肽”的合成方法，其特征在于，固相合成过程中，反应溶剂为二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二乙基甲酰胺、氯仿、四氢呋喃、N-甲基吡咯烷酮和二
8.如权利要求1所述的“困难多肽”的合成方法，其特征在于，多肽裂解液为三氟乙酸、三乙基硅烷和水的混合物，体积比例为95：2.5：2.5，裂解时间为120min-180min。
9.权利要求1-8任一项所述的方法合成的多肽在制备免疫系统、心血管系统、内分泌系统、血液系统或消化系统疾病的药物中的应用。
10.ψ2-hydroxyphenylpro类二肽化合物在制备多肽中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种“困难多肽”的合成方法，其特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的“困难多肽”的合成方法，其特征在于，所述ψ2-hydroxyphenylpro类二肽化合物的结构式如下式所示：
3.如权利要求1所述的“困难多肽”的合成方法，其特征在于，所述ψ2-hydroxyphenylpro类二肽化合物引入多肽序列的方法为按照目标序列依次进行氨基酸或二肽片段的偶合。
4.如权利要求1所述的“困难多肽”的合成方法，其特征在于，氨基酸与二肽化合物的临时保护基团为fmoc。
5.如权利要求1所述的“困难多肽”的合成方法，其特征在于，所述固相树脂为2-氯三甲苯树脂、rink树脂、hmpa-pega树脂、wang树脂或fmpb am树脂。
6.如权利要求1所述的“...
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