【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种结合tnfr2和ccr8的双特异性抗体及其应用。
技术介绍
1、肿瘤坏死因子受体2(tnfr2)，也称为肿瘤坏死因子受体超家族1b(tnfrsf1b)和cd120b，是一种75-kda型i型跨膜蛋白，属于肿瘤坏死因子受体超家族成员，其含有细胞外结构域(ecd，残留物1-257)和具有traf2结合结构域的细胞内结构域(icd，残基288-461)。在正常的t细胞中，tnfa-tnfr2相互作用通过nfkb信号通路触发细胞存活信号。然而，在自身免疫t细胞中，tnfa-tnfr2相互作用通过caspase途径触发凋亡信号。
2、目前，tnfr2已被证明能增强效应t细胞(teff)的激活并减少调节t细胞(treg)介导的抑制作用。tnfr2的活化通过有丝分裂原活化的蛋白激酶(mapk)信号传导途径诱导信号传导，其协调通过traf2/3信号传导和nfκb介导的促进逃避细胞凋亡和细胞增殖的基因的转录。tnfr2不仅可以在癌细胞，浸润肿瘤的treg上表达，还可以在效应teff细胞上表达。研究表明，tnfr2的激动剂单抗能够刺激cd8+t细胞的增殖，活化cd8+t细胞，释放ifnγ和il2等抗肿瘤因子；tnfr2的拮抗剂单抗则能够阻断tnf-tnfr2，抑制treg增殖。
3、ccr8(chemokine(c-c motif)receptor 8)是一种肿瘤浸润的treg中高表达趋化因子受体，结构与g蛋白耦连受体相似，属于七次跨膜蛋白。ccr8在肿瘤浸润的调节性t细胞(treg)
4、ccr8已知受体有四个：ccl1、ccl8、ccl16和ccl18，其中主要受体-趋化因子ccl1，在炎症发生位置会表达上调。ccl1能够招募foxp3+ccr8+treg细胞浸润到肿瘤组织中，发挥免疫抑制功能，同时可以诱导foxp3+treg细胞表面ccr8表达上调，诱发ca2+流动，诱导stat3依赖性的foxp3、cd39、il-10和颗粒酶b表达上调，进而增强这些肿瘤浸润的treg细胞的免疫抑制活性。因此，靶向ccr8的药物可以通过耗竭肿瘤浸润的foxp3+ccr8+treg细胞，或阻断ccl1/ccr8途径，以增强抗肿瘤免疫效应。
技术实现思路
1、在本申请中，专利技术人开发了具有良好性能的能够与tnfr2和ccr8结合的双特异性抗体，本专利技术的双特异性抗体为肿瘤微环境的t细胞调节剂，可以利用激动型抗tnfr2单抗刺激cd8+t细胞的增殖，活化cd8+t细胞，释放ifnγ和il2等抗肿瘤因子；或利用tnfr2拮抗剂阻断tnf-tnfr2，抑制treg增殖。同时抗ccr8抗体清除肿瘤微环境的treg，同时阻断ccl1-ccr8轴。通过tnfr2激动剂或拮抗剂抗体与ccr8抗体组合为双抗，以此调节teff和treg比例，逆转肿瘤微环境中的免疫细胞比例，促使肿瘤凋亡。
2、本专利技术提供了一种能与tnfr2和ccr8特异性结合的双特异性抗体，所述双特异性抗体包含：
3、(a)特异性结合第一抗原的第一抗体或其抗原结合片段；和
4、(b)特异性结合第二抗原的第二抗体或其抗原结合片段；
5、其中：所述第一抗原为ccr8，并且所述第二抗原为tnfr2。
6、在一些实施方案中，所述第一抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链；所述第二抗体或其抗原结合片段包含scfv或vhh。
7、在一些实施方案中，所述第一抗体的一条重链的重链可变区与一条轻链的轻链可变区形成抗原结合部位，另一条重链的重链可变区与另一条轻链的轻链可变区形成抗原结合部位。
8、在一些实施方案中，所述双特异性抗体包含一个第一抗体或其抗原结合片段和一个或多个所述的scfv。
9、在一些实施方案中，所述双特异性抗体包含一个第一抗体或其抗原结合片段和一个所述的scfv，所述scfv连接于所述第一抗体或其抗原结合片段的重链或轻链的n端。
10、在一些实施方案中，所述双特异性抗体包含一个第一抗体或其抗原结合片段和一个所述的scfv，所述scfv连接于所述第一抗体或其抗原结合片段的重链或轻链的c端。
11、在一些实施方案中，所述双特异性抗体包含一个第一抗体或其抗原结合片段和两个所述的scfv。
12、在一些实施方案中，两个所述scfv分别连接于所述第一抗体或其抗原结合片段的两条重链的n端。
13、在一些实施方案中，两个所述scfv分别连接于所述第一抗体或其抗原结合片段的两条轻链的n端。
14、在一些实施方案中，两个所述scfv分别连接于所述第一抗体或其抗原结合片段的两条重链的c端。
15、在一些实施方案中，两个所述scfv分别连接于所述第一抗体或其抗原结合片段的两条轻链的c端。
16、在一些实施方案中，所述双特异性抗体包含特异性结合ccr8的第一抗体和两个特异性结合tnfr2的scfv，两个特异性结合tnfr2的scfv分别连接于所述第一抗体两条重链的n端。
17、在一些实施方案中，所述双特异性抗体包含特异性结合ccr8的第一抗体和两个特异性结合tnfr2的scfv，两个特异性结合tnfr2的scfv分别连接于所述第一抗体两条重链的c端。
18、在一些实施方案中，所述双特异性抗体包含特异性结合ccr8的第一抗体和两个特异性结合tnfr2的scfv，两个特异性结合tnfr2的scfv分别连接于所述第一抗体两条轻链的n端。
19、在一些实施方案中，所述双特异性抗体包含特异性结合ccr8的第一抗体和两个特异性结合tnfr2的scfv，两个特异性结合tnfr2的scfv分别连接于所述第一抗体两条轻链的c端。
20、在一些实施方案中，所述双特异性抗体包含两条第一多肽链和两条第二多肽链，对于所述每条多肽链：
21、(a)所述第一多肽链各自独立地包含所述第一抗体或其抗原结合片段的轻链；和
22、(b)所述第二多肽链各自独立地包含所述第一抗体或其抗原结合片段的重链和所述scfv。
23、在一些实施方案中，其中所述双特异性抗体包含两条第一多肽链和两条第二多肽链，对于所述每条多肽链：
24、(a)所述第一多肽链各自独立地包含所述第一抗体或其抗原结合片段的轻链和所述scfv；和
25、(b)所述第二多肽链各自独立地包含所述第一抗体或其抗原结合片段的重链。
26、在一些实施方案中，所述双特异性抗体的两条第一多肽链相同或不同，和/或两条第二多肽链相同或不同。
27、在一些实施方案中，所述双特异性抗体包含一个第一抗体或其抗原结合片段和一个或多个本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种能与TNFR2和CCR8特异性结合的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体包含：
2.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，
3.根据权利要求1或2所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一抗体的一条重链的重链可变区与一条轻链的轻链可变区形成抗原结合部位，另一条重链的重链可变区与另一条轻链的轻链可变区形成抗原结合部位。
4.根据权利要求2或3所述的双特异性抗体，其特征在于，其包含一个第一抗体或其抗原结合片段和一个或多个所述的scFv或VHH。
5.根据权利要求4所述的双特异性抗体，其特征在于，其包含一个第一抗体或其抗原结合片段和一个所述的scFv或一个所述的VHH，所述scFv或VHH连接于所述第一抗体或其抗原结合片段的重链或轻链的N端或C端。
6.根据权利要求4所述的双特异性抗体，其特征在于，其包含一个第一抗体或其抗原结合片段和两个所述的scFv或两个所述的VHH。
7.根据权利要求6所述的双特异性抗体，其特征在于，两个所述的scFv或两个所述的VHH分别连接于所述第一抗体或其抗原结合片段
8.根据权利要求6所述的双特异性抗体，其特征在于，两个所述的scFv或两个所述的VHH分别连接于所述第一抗体或其抗原结合片段的两条重链或两条轻链的C端。
9.根据权利要求7或8所述的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体包含两条第一多肽链和两条第二多肽链，其特征在于，对于所述每条多肽链：
10.根据权利要求7或8所述的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体包含两条第一多肽链和两条第二多肽链，其特征在于，对于所述每条多肽链：
...【技术特征摘要】
1.一种能与tnfr2和ccr8特异性结合的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体包含：
2.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，
3.根据权利要求1或2所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一抗体的一条重链的重链可变区与一条轻链的轻链可变区形成抗原结合部位，另一条重链的重链可变区与另一条轻链的轻链可变区形成抗原结合部位。
4.根据权利要求2或3所述的双特异性抗体，其特征在于，其包含一个第一抗体或其抗原结合片段和一个或多个所述的scfv或vhh。
5.根据权利要求4所述的双特异性抗体，其特征在于，其包含一个第一抗体或其抗原结合片段和一个所述的scfv或一个所述的vhh，所述scfv或vhh连接于所述第一抗体或其抗原结合片段的重链或轻链的n端或c端。
6.根据...
【专利技术属性】
技术研发人员：周冲，周金花，吴崇兵，姜晓玲，殷刘松，
申请(专利权)人：盛禾中国生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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