【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及多价蛋白质支架及其作为对标靶分子的组合进行表型筛选的模块化系统以及作为治疗剂的用途。本专利技术还涉及包括多个结合域以及一个结构域的多域多肽构建体。本专利技术进一步涉及以所述蛋白质支架鉴别新的治疗剂的方法，并且涉及可按照这一方式鉴别出的治疗剂。
技术介绍
1、对于多种病理状况，需要持续不断地鉴别新的治疗方式。
2、基于蛋白质的疗法为许多常见疾病提供一种引人瞩目的解决方式。事实证明，此类疗法具有很高的临床成功率，而且许多蛋白质治疗剂已被世界各地的监管机构批准用于临床使用。
3、蛋白质类治疗剂具有各种各样的作用方式——例如：取代存在缺陷或异常的蛋白质；增强已有通路；提供具有治疗效用的新功能或新活性；对分子或微生物施加干扰；以及递送放射性核素、细胞毒性药物或效应蛋白等其他化合物或蛋白质。治疗性蛋白质可根据其物理和结构特性分类，并且可例如分为基于抗体的药物、fc融合蛋白、抗凝剂、血液因子、骨形态发生蛋白、基因工程蛋白质支架、酶、生长因子、激素、干扰素、白介素、溶栓剂等。治疗性蛋白质也可以根据其分子活性机制分类。例如，单克隆抗体一般通过与标靶非共价结合而发挥作用。酶可对标靶内的共价键施加影响。血清白蛋白等其他蛋白质可在不发生特异性相互作用的情况下发挥其活性。
4、治疗性抗体为一类已在临床上获得成功的蛋白质类治疗剂。抗体也称免疫球蛋白(ig)，其已作为多种疾病状况的潜在治疗方法受到研究和评价。例如，单克隆抗体疗法已用于治疗包括类风湿性关节炎、多发性硬化症、银屑病及各种形式的癌症在内的疾病。市售
5、抗体通常包含形成一个fc区以及两个抗原结合(fab)区的四条多肽链。每一fab区含形成互补位且与抗原接触的可变区(fv)。自然界存在的天然抗体的可变区一般为对称结合。然而，这一限制意味着给定抗体的可变区通常仅能靶向单种类型的受体(或其他标靶)。
6、为了解决这一问题，大部分研究兴趣已转向双特异性抗体。双特异性抗体与传统单特异性抗体的区别在于，其两个fab位点可分别与不同的抗原结合。双特异性抗体通常分为ig样抗体和非ig样抗体，后一种抗体可由化学连接的fab区组成。
7、目前，人们正在积极研究双特异性抗体的临床应用。市售双特异性抗体的两例为：贝林妥欧单抗(blinatumomab)，商品名为倍利妥(blincyto)，同时含有靶向t细胞的cd3位点以及靶向b细胞的cd19位点，可用于治疗费城染色体阴性复发性或难治性急性淋巴细胞白血病；以及艾美赛珠单抗(emicizumab)，商品名为舒友立乐(hemlibra)，同时靶向ixa和x两种凝血因子，用于治疗a型血友病。双特异性抗体通常用于例如通过在与肿瘤细胞受体结合的同时招募细胞毒性免疫细胞的方式，同时与多种类型的细胞相结合。
8、虽然一些双特异性抗体具有良好的前景，但仍然存在问题。抗体治疗剂的生产成本较高，原因尤其在于其本身的尺寸，以及包括复杂的糖基化模式在内的复杂翻译后修饰化学机制。抗体生产需要先进行极大规模的哺乳动物细胞培养，然后进行大量的纯化步骤，从而导致生产成本极为高昂，限制了此类药物的广泛使用。除此之外，抗体已知因肿瘤靶向性较差而在癌症治疗中的应用有限(例如，研究表明，在向小鼠异种移植模型给药后，与肿瘤相互作用的抗体比例通常不及20％)。抗体(如igg抗体)的fc部分可与多种细胞表面上表达的各种受体相互作用，从而增大其在血液循环中的滞留量。此外，抗体因尺寸较大而在体内扩散缓慢。igg样抗体可具有免疫原性，从而在下游因fc受体激活而导致有害的免疫反应。具体而言，对于双特异性抗体，现有针对ig样抗体的“杵臼结构”(knobs into holes)方法因模块化程度不足而难以改造用于对大量的抗原结合域进行筛选。此外，该双特异性抗体方法在实际中仅限于fv/fab区的筛选，无法用于研究免疫球蛋白之外的其他蛋白质的域的治疗潜力。针对非ig样抗体的串联融合方法虽然更加易于改造，但是难以扩大规模。
9、布兰科托里比奥(blanco-toribio)等人(单克隆抗体(mabs)，2013年1月1日，5卷，1期，70～79页)描述了单特异性和双特异性六价三聚体的生成和表征。称为“三聚体”的此类分子将人胶原蛋白xviii的非胶原1(nc1)域的n末端三聚体化区的两侧具有两个柔性接头的修饰形式用作三聚体化支架。该文作者通过将具有相同或不同特异性的单链可变片段(scfv)同时与三聚体化支架域的n末端和c末端相融合，获得由转染后的哺乳动物细胞有效分泌为可溶性蛋白质的单特异性或双特异性六价分子。已发现，n末端和c末端分别具有抗层粘连蛋白和抗cd3特性的双特异性三聚体在溶液中也为三聚体形式。这一方法的一项缺点在于，由于其涉及转染，因此在生产上较为不便。
10、wo-a-2020/0188346描述一种双特异性抗原结合蛋白，其中，两个抗原结合域(“abd”)与由两个或更多个域构成的融合蛋白共价结合，所述两个或更多个域形成含有该抗原结合蛋白的异肽键。形成异肽键的此类域通常为谍捕手(spycatcher，sc)等捕手域，所得双特异性蛋白质的形式为abd-sc-sc-abd。
11、布鲁内(brune)等人(生物共轭化学(bioconjugate chem.)，2017年，28卷，5期，1544～1551页)描述了一种使用双抗原免疫正交反应蛋白质的“即插即用”型合成组装体。该文作者通过对多聚体化卷曲螺旋结构imx313及两种正交反应脱落蛋白进行基因工程改造，制备出一种双寻址合成纳米颗粒。该构建体的形式为谍捕手-imx-探捕手(snoopcatcher)，并提供一种仅通过混合便可在颗粒的相对两面分别实现谍捕手与抗原的多聚体化以及探捕手与抗原的多聚体化的模块化平台。
12、因此，需要一种能够以快速、可规模化、可改造方式鉴别和设计能够克服上述所有或部分问题的蛋白质治疗剂的新模式，尤其需要一种与传统抗体平台相媲美的新的平台技术。
技术实现思路<本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种多价蛋白质支架，包括：
2.根据前述权利要求当中任何一项所述的蛋白质支架，其中，所述寡聚体核心中的每一单体包括至少一个第一结合位点和至少一个第二结合位点，并且其中，所述至少一个第一结合位点与所述至少一个第二结合位点正交。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的蛋白质支架，其中，每一单体包括连接在所述单体的第一末端的第一结合位点以及在所述单体的第二末端的第二结合位点。
4.根据权利要求1至3当中任何一项所述的蛋白质支架，其中，每一单体的所述第一末端和所述第二末端位于所述单体的同一面上，并且/或者位于所述单体的寡聚体的同一面上。
5.根据前述权利要求当中任何一项所述的蛋白质支架，其中，所述第一结合位点包括能够与第一多肽标靶形成共价键的第一蛋白域，并且所述第二结合位点包括能够与第二多肽标靶形成共价键的第二蛋白域；
6.根据权利要求5所述的蛋白质支架，其中，所述第一结合位点和所述第二结合位点中的每一者包括不同的脱落配体结合蛋白域；
7.根据权利要求6所述的蛋白质支架，其中，所述第一结合位点和所述第二结合位点中的
8.根据任何前述权利要求所述的蛋白质支架，其中，所述寡聚体核心包括至少三个亚基单体，
9.根据任何前述权利要求所述的蛋白质支架，其中，所述亚基单体是非共价地连接在一起。
10.根据权利要求1至8所述的蛋白质支架，其中，所述亚基单体是共价地连接在一起；
11.根据前述权利要求当中任何一项所述的蛋白质支架，其中，所述寡聚体核心为同源寡聚体核心。
12.根据权利要求1至6当中任何一项所述的蛋白质支架，其中，所述寡聚体核心为异源寡聚体核心。
13.根据前述权利要求当中任何一项所述的蛋白质支架，其中：
14.根据前述权利要求当中任何一项所述的蛋白质支架，其中，所述寡聚体核心：(i)不包括抗体Fc区；或(ii)不包括CH2域；或(iii)不包括CH3域；或(iv)不包括CH2域或CH3域。
15.根据前述权利要求当中任何一项所述的蛋白质支架，其中，所述寡聚体核心包括多聚体蛋白质的可溶性多聚体化结构单元。
16.根据权利要求15所述的蛋白质支架，其中，所述多聚体蛋白质包括胶原蛋白VIIINC1(非胶原蛋白)域，胶原蛋白XNC1(非胶原蛋白)域，C1q头部域，CutA1蛋白，巨噬细胞迁移抑制因子(MIF或MIF-2)，肿瘤坏死因子(TNF)，或其同源物或旁系同源物。
17.根据权利要求15或权利要求16所述的蛋白质支架，其中，所述多聚体化结构单元包括与SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：19，SEQ ID NO：29，SEQ ID NO：60，SEQ ID NO：25，SEQ ID NO：26，SEQ ID NO：27，SEQ ID NO：42，SEQ ID NO：31或SEQ IDNO：58具有至少30％或至少50％的氨基酸一致性的多肽。
18.一种蛋白质复合物，包括根据前述权利要求当中任何一项所述的蛋白质支架，其中，所述第一结合位点与连接于第一效应部分的第一多肽标靶结合，并且所述第二结合位点与连接于第二效应部分的第二多肽标靶结合。
19.根据权利要求18所述的蛋白质复合物，其中，所述第一结合位点/多肽标靶对和所述第二结合位点/多肽标靶对中的每一者独立选自所述以下组合：(i)SEQ ID NO：4，6或8中的任何一者与SEQ ID NO：5，7或9中的任何一者；(ii)SEQ ID NO：12与SEQ ID NO：13或15；(iii)SEQ ID NO：5与SEQ ID NO：11；(iv)SEQ ID NO：15与SEQ ID NO：16)；(v)SEQ ID NO：17与SEQ ID NO：18；或(vi)SEQ ID NO：23与SEQ ID NO：16)。
20.一种筛选平台，包括一个库，其中，所述库包括：
21.一种鉴别治疗药物或药物类似物的方法，所述方法包括：
22.根据权利要求21所述的方法，还包括：
23.一种根据如权利要求21或权利要求22所述的方法可获得的或获得的治疗药物或药物候选物。
24.一种治疗药物或药物候选物，包括：
25.如权利要求24(a)所述的治疗药物或药物候选物，其中，所述寡聚体核心如权利要求1至17当中任何一项所定义。
26.如权利...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种多价蛋白质支架，包括：
2.根据前述权利要求当中任何一项所述的蛋白质支架，其中，所述寡聚体核心中的每一单体包括至少一个第一结合位点和至少一个第二结合位点，并且其中，所述至少一个第一结合位点与所述至少一个第二结合位点正交。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的蛋白质支架，其中，每一单体包括连接在所述单体的第一末端的第一结合位点以及在所述单体的第二末端的第二结合位点。
4.根据权利要求1至3当中任何一项所述的蛋白质支架，其中，每一单体的所述第一末端和所述第二末端位于所述单体的同一面上，并且/或者位于所述单体的寡聚体的同一面上。
5.根据前述权利要求当中任何一项所述的蛋白质支架，其中，所述第一结合位点包括能够与第一多肽标靶形成共价键的第一蛋白域，并且所述第二结合位点包括能够与第二多肽标靶形成共价键的第二蛋白域；
6.根据权利要求5所述的蛋白质支架，其中，所述第一结合位点和所述第二结合位点中的每一者包括不同的脱落配体结合蛋白域；
7.根据权利要求6所述的蛋白质支架，其中，所述第一结合位点和所述第二结合位点中的每一者独立与seq id no：4～9，11～13，23或15～18中的任何一者具有至少50％的氨基酸一致性。
8.根据任何前述权利要求所述的蛋白质支架，其中，所述寡聚体核心包括至少三个亚基单体，
9.根据任何前述权利要求所述的蛋白质支架，其中，所述亚基单体是非共价地连接在一起。
10.根据权利要求1至8所述的蛋白质支架，其中，所述亚基单体是共价地连接在一起；
11.根据前述权利要求当中任何一项所述的蛋白质支架，其中，所述寡聚体核心为同源寡聚体核心。
12.根据权利要求1至6当中任何一项所述的蛋白质支架，其中，所述寡聚体核心为异源寡聚体核心。
13.根据前述权利要求当中任何一项所述的蛋白质支架，其中：
14.根据前述权利要求当中任何一项所述的蛋白质支架，其中，所述寡聚体核心：(i)不包括抗体fc区；或(ii)不包括ch2域；或(iii)不包括ch3域；或(iv)不包括ch2域或ch3域。
15.根据前述权利要求当中任何一项所述的蛋白质支架，其中，所述寡聚体核心包括多聚体蛋白质的可溶性多聚体化结构单元。
16.根据权利要求15所述的蛋白质支架，其中，所述多聚体蛋白质包括胶原蛋白viiinc1(非胶原蛋白)域，胶原蛋白xnc1(非胶原蛋白)域，c1q头部域，cuta1蛋白，巨噬细胞迁移抑制因子(mif或mif-2)，肿瘤坏死因子(tnf)，或其同源物或旁系同源物。
17.根据权利要求15或权利要求16所述的蛋白质支架，其中，所述多聚体化结构单元包括与seq id no：1，seq id no：2，seq id no：3，seq id no：19，seq id no：29，seq id no：60，seq id no：25，seq id no：26，seq id no：27，seq id no：42，seq id no：31或seq idno：58具有至少30％或至少50...
【专利技术属性】
技术研发人员：阿恩·哈根·奥古斯特·施埃，伊斯耶特·诺·阿巴迪·宾·凯里尔·安努亚，英·汀·谢乐尔·林，
申请(专利权)人：利联姆X有限公司，
类型：发明
国别省市：
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