【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的引物组合、试剂盒及方法。
技术介绍
1、白血病是一种骨髓造血干细胞恶性克隆性增生的疾病，尤其在儿童和青少年中较为常见。研究表明大部分的白血病患者中存在某种染色体机结构的畸变，包括染色体的缺失、插入、倒位、重复、易位等引起染色体重排，形成新的融合基因。融合基因是肿瘤发生发展的重要驱动因素，形成的融合基因可以通过激活原癌基因表达，使抑癌基因结构变异，失去活性或者形成新的融合蛋白导致转录调节因子异常，进而造成下游信号通路的激活或者增强，最终促进细胞生长增殖，抑制细胞分化，从而导致肿瘤的发生。迄今为止，白血病涉及至少数百种融合基因。白血病融合基因可以作为诊断不同类型白血病的分子生物学特异性标志和确诊依据。如慢性粒细胞白血病cml或者部分急性淋巴细胞白血病all中：bcr-abl1；急性t淋巴细胞白血病中(t-all)：sil-tal1；急性早幼粒细胞白血病apl：pml-rara等。
2、who 2016版血液肿瘤分类标准中所提到的融合基因已有一百多种，融合基因的鉴定为血液肿瘤的诊断、分型、临床治疗方案的选择、疗效监测和靶向药物的研发提供了重要的分子指标。血液肿瘤中融合基因检测技术的开发具有极大的临床意义和市场价值。
3、当前，融合基因的检测方法主要包括染色体核型分析，荧光原位杂交(fish)，以及多重巢式rt-pcr，实时荧光定量pcr和数字pcr定量检测，以及高通量测序检测。但这几种方法都有各自的缺陷或者弊端。染色体核型分析分辨率
4、因此，目前市面上，用来进行血液病多种融合基因定性筛查的方法为多重巢式rt-pcr技术，但是该技术也存在如下缺陷：
5、(1)巢式rt-pcr，需要经过至少两轮pcr的扩增，利用第一次扩增产生的产物开盖稀释后，再作为扩增模板，进行第二轮扩增得到特异性的目的片段。pcr产物稀释返回模板处理间，进行再扩增这一实验过程的增加，不仅增加了实验的繁琐性，还很大程度增加了污染概率，也不符合pcr实验室常规操作流程的顺利开展。
6、(2)巢式pcr得到的最终产物，目前都是通过琼脂糖凝胶电泳进行产物的分析，根据是否有对应的目的片段及目的片段的长度，来确定是否有相应融合基因产生。由于琼脂糖凝胶电泳对于扩增片段的分辨率在50-100bp，这大大降低了每管多重可扩增的片段数，每管扩增至多进行5-10个扩增片段。
7、(3)同样由于琼脂糖凝胶电泳分辨率限制，该技术对于同种融合基因的不同融合形式也很难有具体区分，如pml-rara融合形式有s型，v性和l型。其中s型和v型之间断裂点相隔较近，有的融合形式之间片段相差不足100bp，通过琼脂糖凝胶电泳很难确定具体是什么融合形式。
8、(4)对于基因融合导致基因表达量增加，如hox11，hox11l2，evi基因的表达增强，通过该类方法也很难实现检测。
9、随着对白血病研究的不断深入，越来越多的白血病融合基因已被发现，当前检测白血病融合病基因的方法已经远远不能满足市场对于同时对绝大部分融合基因进行一次性筛查的需求，亟待开发一种快速，方便，有效，准确且易于标准化的血液病融合基因检测方法和试剂。
技术实现思路
1、为了解决上述问题中的一种，本专利技术提供了一种基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的引物组合、试剂盒及方法，本专利技术的检测方法操作简单、特异性强、快速高效，通量高、成本低，可一次性实现对白血病121种融合基因共291种融合亚型的定性检测。
2、为了达到上述目的，本专利技术采用了如下技术手段：
3、本专利技术的第一方面提供了一种基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的引物组合，所述引物组合由四个引物大组组成：第一引物大组包括seq id no.1-seq idno.48所示的引物序列；第二引物大组包括seq id no.47-seq id no.84所示的引物序列；第三引物大组包括seq id no.85-seq id no.134所示的引物序列；第四引物大组包括seqid no.47-seq id no.48以及seq id no.135-seq id no.189所示的引物序列，所述引物组合可检测白血病的121种融合基因的291种融合亚型，所述融合基因还包括监测表达量的融合基因类型。
4、在本专利技术的一些实施方案中，所述引物组合中的各引物大组分别由两个引物小组组成：第一引物大组包括由seq id no.1-seq id no.24所示的引物序列组成的第一引物小组和seq id no.25-seq id no.48所示的引物序列组成的第二引物小组；第二引物大组包括由seq id no.47-seq id no.64所示的引物序列组成的第一引物小组和seq id no.65-seq id no.84所示的引物序列组成的第二引物小组；第三引物大组包括由seq id no.85-seq id no.116所示的引物序列组成的第一引物小组和seq id no.117-seq id no.134所示的引物序列组成的第二引物小组；第四引物大组包括由seq id no.135-seq id no.164所示的引物序列组成的第一引物小组和seq id no.165-seq id no.189以及seq idno.47-seq id no.48所示的引物序列组成的第二引物小组，其中seq id no.47-seq idno.48为第一引物大组、第二引物大组和第四引物大组的质控引物，seq id no.133-seq idno.134为第三引物大组的质控引物。
5、在本专利技术的一些实施方案中，所述第一引物大组、第二引物大组、第三引物大组、第四引物大组的不同引物小组中的引物序列，分别采用不同的荧光标记；所述荧光标记的荧光基团选自fam、hex、vic、tamra、rox、texred中的任意一种。优选地，荧光基团尽量标记在多种融合基因扩增通用最多的引物上，减少引物合成成本和减少扩增中太多荧光引物造成的荧光干扰。
6、在本专利技术的一些实施方案中，所述第一引物大组中seq id no.5、seq id no.15、seq id no.22、seq id no.27、seq id no.43、seq id no.46、seq id no.本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的引物组合，其特征在于：所述引物组合由四个引物大组组成：第一引物大组包括SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.48所示的引物序列；第二引物大组包括SEQ ID NO.47-SEQ ID NO.84所示的引物序列；第三引物大组包括SEQ ID NO.85-SEQ ID NO.134所示的引物序列；第四引物大组包括SEQ ID NO.47-SEQ IDNO.48以及SEQ ID NO.135-SEQ ID NO.189所示的引物序列，所述引物组合可检测白血病的121种融合基因的291种融合亚型，所述融合基因还包括监测表达量的融合基因类型。
2.根据权利要求1所述的一种基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的引物组合，其特征在于：所述引物组合中的各引物大组分别由两个引物小组组成：第一引物大组包括由SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.24所示的引物序列组成的第一引物小组和SEQ ID NO.25-SEQ ID NO.48所示的引物序列组成的第二引物小组；第二引物大组包括由SEQ ID NO.47-SEQ ID N
3.根据权利要求2所述的一种基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的引物组合，其特征在于：所述第一引物大组、第二引物大组、第三引物大组、第四引物大组的不同引物小组中的引物序列，分别采用不同的荧光标记；所述荧光标记的荧光基团选自FAM、HEX、VIC、TAMRA、ROX、TEXRED中的任意一种。
4.根据权利要求3所述的一种基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的引物组合，其特征在于：所述第一引物大组中SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.22、SEQ IDNO.27、SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.47所示的引物序列5’端进行荧光标记；所述第二引物大组中SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.59、SEQ ID NO.62、SEQ ID NO.64、SEQ IDNO.65、SEQ ID NO.67、SEQ ID NO.70、SEQ ID NO.72、SEQ ID NO.74、SEQ ID NO.77、SEQ IDNO.79、SEQ ID NO.80、SEQ ID NO.83所示的引物序列5’端进行荧光标记；所述第三引物大组中SEQ ID NO.85、SEQ ID NO.115、SEQ ID NO.116、SEQ ID NO.117、SEQ ID NO.124、SEQID NO.125、SEQ ID NO.128、SEQ ID NO.132、SEQ ID NO.133所示的引物序列5’端进行荧光标记；所述第四引物大组中SEQ ID NO.135、SEQ ID NO.137、SEQ ID NO.147、SEQ IDNO.154、SEQ ID NO.156、SEQ ID NO.163、SEQ ID NO.165、SEQ ID NO.168、SEQ ID NO.175、SEQ ID NO.181、SEQ ID NO.182、SEQ ID NO.183、SEQ ID NO.184、SEQ ID NO.47、SEQ IDNO.186、SEQ ID NO.188所示的引物序列5’端进行荧光标记，位于同一小组的引物序列荧光标记相同。
5.一种基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1-4任一项所述的引物组合。
6.根据权利要求5所述的一种基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的试剂盒，其特征在于：还包括扩增酶混合液、阳性分型参考标准物质、阴性对照，毛细管电泳内标试剂。
7.根据权利要求6所述的一种基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的试剂盒...
【技术特征摘要】
1.一种基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的引物组合，其特征在于：所述引物组合由四个引物大组组成：第一引物大组包括seq id no.1-seq id no.48所示的引物序列；第二引物大组包括seq id no.47-seq id no.84所示的引物序列；第三引物大组包括seq id no.85-seq id no.134所示的引物序列；第四引物大组包括seq id no.47-seq idno.48以及seq id no.135-seq id no.189所示的引物序列，所述引物组合可检测白血病的121种融合基因的291种融合亚型，所述融合基因还包括监测表达量的融合基因类型。
2.根据权利要求1所述的一种基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的引物组合，其特征在于：所述引物组合中的各引物大组分别由两个引物小组组成：第一引物大组包括由seq id no.1-seq id no.24所示的引物序列组成的第一引物小组和seq id no.25-seq id no.48所示的引物序列组成的第二引物小组；第二引物大组包括由seq id no.47-seq id no.64所示的引物序列组成的第一引物小组和seq id no.65-seq id no.84所示的引物序列组成的第二引物小组；第三引物大组包括由seq id no.85-seq id no.116所示的引物序列组成的第一引物小组和seq id no.117-seq id no.134所示的引物序列组成的第二引物小组；第四引物大组包括由seq id no.135-seq id no.164所示的引物序列组成的第一引物小组和seq id no.165-seq id no.189以及seq id no.47-seq id no.48所示的引物序列组成的第二引物小组，其中seq id no.47-seq id no.48为第一引物大组、第二引物大组和第四引物大组的质控引物，seq id no.133-seq id no.134为第三引物大组的质控引物。
3.根据权利要求2所述的一种基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的引物组合，其特征在于：所述第一引物大组、第二引物大组、第三引物大组、第四引物大组的不同引物小组中的引物序列，分别采用不同的荧光标记；所述荧光标记的荧光基团选自fam、hex、vic、tamra、rox、texred中的任意一种。
4.根据权利要求3所述的一种基于毛细管电泳片段分析检测白血病融合基因的引物组合，其特征在于：所述第一引物大组中seq id no.5、seq id no.15、seq id no.22、seq idno.27、seq id no.43、seq id no.46、seq id no.47所示的引物序列5’端进行荧光标记；所述第二引物大组中seq id no.49、seq id no.59、seq id no.62、seq id no.64、seq idno.65、seq id no.67、seq id no.70...
【专利技术属性】
技术研发人员：金芬芬，李璐，杨亚萍，王雪，任云飞，
申请(专利权)人：杭州宏望医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：
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