【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物源农药检测，特别涉及一种基于纳米材料quechers技术对微生物菌剂中植物源农药残留检测方法。
技术介绍
1、农随着农业种植的发展，连作重茬及过量使用化肥造成的土传病害、土壤板结等问题，不仅造成了农产品品质下降，产量降低，而且造成生态环境污染，已严重影响农产品产业的发展。因此，改变这一现状成为农业发展急需解决的问题。
2、微生物菌剂是一种低碳、纯天然、无毒、无害、无污染的有机微生物菌剂。由于其具有调节植物体内营养平衡，提高肥料利用率，改良土壤等作用，近年来在农业生产中的应用越来越广泛。
3、天然芸苔素内酯是一种活性极强的新型甾醇类物质，是国际公认的高效、低毒的植物生长调节剂，也是当前中国发展高产、优质、高效农业和生态农业最有生机和活力的一种新型物质。其主要作用是促进细胞分裂，增强作物抗逆性及光合作用，调节植物体内营养物质分配，提高作物产量和改善作物品质等，与生物菌剂不但没有拮抗作用，而且有协同作用，可以混合使用。
4、目前，市售微生物菌剂种类众多，质量更是参差不齐，不法销售企业为降低成本谋取利润不合理添加植物源农药芸苔素内酯的有效成分种类及含量造成农作物减产及品质降低，给农户造成严重经济损失。同时，也严重损害了正规生产商的合法利益。另外，随着芸苔素内酯植物生长调节剂类农药用量增多及使用范围日益扩大，其安全性越来越受到关注。研究表明不同种类植物生长调节剂均具有生殖毒性，部分还能够增加肿瘤风险和影响心肌功能等。因此，开发一种快速、简便、灵敏、准确的分析方法用于检测微生物菌剂中芸苔
5、quechers技术是在分散固相萃取技术基础上发展的一种新型前处理方法，具有快速简单、经济高效、可靠安全等优点，针对不同类型样品还可以通过改变吸附剂的种类以及填装量达到最佳的净化效果。quechers技术目前在果蔬样品检测领域应用较广，但在微生物菌剂中的农药残留检测应用甚少。超高效色谱-串联质谱法(uplc-msms)不仅具备液相色谱分析范围广、选择性强的优点，而且通过三重四极杆质谱仪获取待测组分的一级、二级离子碎片能够对复杂样本进行准确定性和定量分析，目前已被相关标准(国家药品检验补充检验方法检验项目批准件2006004、2012005及bjs 201701《食品中西布曲明等化合物的测定》等)广泛采用。
6、张俊杰等(农药科学与管理，2021,42(6))公开了一种采用气相色谱-串联质谱法对韭菜和姜上虫螨腈及其代谢物的残留检测方法，其采用的净化剂组合为40mg psa、10mgc18、5mg mwcnt。吴学进等(南方农业学报，2020，51(10)：2532-2539)公开了一种quechers净化—超高效液相色谱—串联质谱法同步测定荔枝中10种植物生长调节剂残留的方法，该方法采用甲醇-5mmol/l乙酸铵水溶液(含0.1％甲酸，v/v)缓冲溶液为流动相，以150mgmgso4、50mg psa、50mg c18作为净化组合物。
7、当前对芸苔素内酯的残留检测研究的报道相对较少，而且检测活性成分的种类也偏少，微生物菌剂中多种芸苔素内酯活性成分的检测更是尚未有报道。综上所述，建立微生物菌剂中3种芸苔素内酯活性成分检测方法，需求迫切且意义深远。
技术实现思路
1、本专利技术采用quechers-uplc-msms开发一种具有操作简单、成本较低、分析快速、回收率高等优点的方法，实现对微生物菌剂中痕量3种芸苔素内酯活性成分的检测，以满足市场需求。
2、因此，本专利技术提供一种基于纳米材料quechers-uplc-msms检测微生物菌剂中芸苔素内酯的方法，所述方法包括如下步骤：
3、(1)样品采集
4、采集待检测微生物菌剂产品，进行标记，然后密封贮存于-18℃冰箱，备用。
5、(2)quechers样品前处理
6、采用干净研钵将冷冻状态的微生物菌剂样品充分研碎，准确称取2-4g研碎样品于50ml的离心管中，加入8-15ml乙腈迅速摇匀，再加入0.5-2g氯化钠及3-6g无水硫酸镁，在2500rpm下涡旋振荡提取7-14min，再以5000rpm离心3-6min，弃沉淀得到上清液；
7、取上述上清液1.5ml于2ml的离心管中，所述离心管中预先装有净化剂组合和无水硫酸镁，以2500rpm涡旋振荡3-8min，再以10000rpm离心2-4min，上清液过0.22μm有机滤膜，待检测。
8、(3)uplc-msms分析检测
9、采用uplc-msms(超高效液相色谱-串联质谱)法对处理后的待检测样品进行检测，检测样品中的芸苔素内酯及其含量。
10、在本专利技术的一种实施方式中，所述的芸苔素内酯包括28-表高芸苔素内酯、28-高芸苔素内酯、22,23,24-表芸苔素内酯中的一种或多种。
11、在本专利技术的一种实施方式中，所述步骤“(2)样品前处理”优选为：
12、采用干净研钵将冷冻状态的微生物菌剂样品充分研碎，准确称取2.5g研碎样品于50ml的离心管中，加入10ml乙腈迅速摇匀，再加入1g氯化钠及4g无水硫酸镁，在2500rpm下涡旋振荡提取10min，再以5000rpm离心5min，弃沉淀得到上清液；
13、取上述上清液1.5ml于2ml的离心管中，所述离心管中预先装有净化剂组合和无水硫酸镁，以2500rpm涡旋振荡5min，再以10000rpm离心3min，上清液过0.22μm有机滤膜，待检测。
14、在本专利技术的一种实施方式中，在所述步骤“(2)样品前处理”中，所述净化剂组合为：30mg nano-zro2、20mg psa、30mg c18、3-8mg mwcnts(即nano-zro2/psa/c18/mwcnts＝30/20/30/3-8mg)。优选的，所述净化剂组合为：30mg nano-zro2、20mg psa、30mg c18、3mgmwcnts(即nano-zro2/psa/c18/mwcnts＝30/20/30/3mg)。所述无水硫酸镁的加入量为200mg。
15、其中，nano-zro2指纳米氧化锆；psa指乙二胺-n-丙基硅烷化硅胶吸附剂；c18指十八烷基硅烷吸附剂(50μm)；mwcnts指多壁碳纳米管。
16、在本专利技术的一种实施方式中，在所述步骤“(3)uplc-msms分析检测”中：
17、所述的超高效液相色谱条件为：色谱柱为c18(2.6μm*2.1mm*50mm)；采用含0.1％甲酸水溶液(a相)与甲醇(b相)为流动相，采用梯度洗脱的方式进行目标化合物的分离，梯度洗脱程序为：0min 90％a+10％b，4.0min 5％a+95％b，5.5min5％a+95％b，5.6min 90％a+10％b，7.0min 90％a+10％b；流速：0.40ml/min；进本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于纳米材料QuEChERS-UPLC-MSMS检测微生物菌剂中芸苔素内酯的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的芸苔素内酯包括28-表高芸苔素内酯、28-高芸苔素内酯、22,23,24-表芸苔素内酯中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤“(2)样品前处理”优选为：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述净化剂组合为：30mg nano-ZrO2、20mgPSA、30mg C18、3-8mg MWCNTs。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述净化剂组合为：30mg nano-ZrO2、20mgPSA、30mg C18、3mg MWCNTs。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤“(3)UPLC-MSMS分析检测”中：
7.一种净化剂组合用于在采用QuEChERS-UPLC-MSMS方法检测微生物菌剂中芸苔素内酯含量时，对微生物菌剂样品进行净化的用途，其特征在于，所述净化剂组合为：30m
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述净化剂组合为：30mg nano-ZrO2、20mgPSA、30mg C18、3mg MWCNTs。
...【技术特征摘要】
1.一种基于纳米材料quechers-uplc-msms检测微生物菌剂中芸苔素内酯的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的芸苔素内酯包括28-表高芸苔素内酯、28-高芸苔素内酯、22,23,24-表芸苔素内酯中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤“(2)样品前处理”优选为：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述净化剂组合为：30mg nano-zro2、20mgpsa、30mg c18、3-8mg mwcnts。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述净化剂组合为：3...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨松，邹洁，顾爱国，尤吉涛，陈昌旸，
申请(专利权)人：江苏省产品质量监督检验研究院，
类型：发明
国别省市：
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