【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物形态处理，尤其涉及一种油浸式青霉形态处理方法。
技术介绍
1、目前，青霉菌是自然界中常见的一种丝状真菌，其形态和构造多样，是常规分离鉴定的重要依据。因此，如何快速、有效地观察和鉴定青霉种属分类及其生长特性显得尤为重要。对于青霉的鉴定,采用宏观特征观察的传统方法中以制片观察为主,包括菌丝挑取制片法、插片法、载片培养法、琼脂槽培养法、仪器设备自动制片法等。这些方法有以下不足之处:(1)青霉菌丝较短且致密，挑取制片往往出现菌丝重叠、菌丝自然生长状态遭到破坏的现象,不能获取正常的真菌显微形态；(2)由于青霉菌丝体呈无色，分生孢子为淡绿，插片法对菌体没有进行着色，菌体与背景没有形成明显的色差，显微观察时个体形态不易观察和图片采集；(3)载片培养法需要制作湿室,操作过程繁琐复杂，对操作人员以及实验器材要求较高；(4)仪器设备自动制片法要求样本在压力差作用下,待检样品通过选择性过滤膜的筛选后进行制片和观察，该方法仅局限于细胞、细菌、花粉等颗粒材料，无法对丝状材料进行制片，同时，仪器设备较为昂贵。根据青霉菌个体形态特征，采用油浸式观察青霉形态，一方面，染色使菌体与背景形成明显的色差，从而可清晰观察到青霉形态和构造；另一方面，油浸式观察有效减少气泡与水印带来的观察困扰，而且可较长时间反复观察辨识，便于青霉形态图片的采集。为青霉形态观察及形态学鉴定的提供了可行的科学方法。
2、通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：印片法观察效果不佳，无法清晰辨别菌丝和孢子的形态构造；载片法中湿室支架在培养皿不稳定，载玻片中央小琼
技术实现思路
1、针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种油浸式青霉形态处理方法。
2、本专利技术是这样实现的，一种油浸式青霉形态处理方法，所述油浸式青霉形态处理方法，包括以下步骤：
3、第一步，倒平板、插片培养：将高温灭菌的察氏培养基，冷却至倒平板；用无菌镊子取无菌盖玻片，在平板培养基的上面插上无菌盖玻片，然后在交界线上接种，将插片平板倒置于恒温培养箱；
4、第二步，染色：培养后，用镊子小心取出盖玻片后，将盖玻片(菌丝体朝上)放在洁净的载玻片上，滴加乙醇番红溶液于盖玻片上；自然晾干，再向盖玻片上滴加无水乙醇后，将酒精倾倒，再次自然晾干；
5、第三步，在另一个洁净的载玻片上滴加一滴香柏油，用镊子将染色盖玻片的一端与香柏油油面接触后，放下；用低倍镜、高倍镜进行观察。
6、进一步，所述第一步冷却至50℃倒平板。
7、进一步，所述第一步平板使用9cm大小培养皿25ml培养基，冷凝待用。
8、进一步，所述第一步接种线长为盖玻片的一半，即在盖玻片两端留有空白。
9、进一步，所述第一步将插片平板倒置于28℃恒温培养箱培养3-4天。
10、进一步，所述第二步培养3-4天后，用镊子小心取出盖玻片。
11、进一步，所述第二步滴加0.5％乙醇番红溶液于盖玻片上，染2min。
12、进一步，所述第三步用镊子将染色盖玻片菌丝体面朝下的一端与香柏油油面接触后。
13、进一步，所述染色液的配制：0.5％乙醇番红的配制为：0.5g番红溶于100ml无水乙醇；染色液配置完成后需要加盖保存。
14、进一步，所述第一步滴加香柏油：将香柏油充满滴头，滴加到载玻片中央，不要产生有可视的气泡。
15、本专利技术的另一目的在于提供一种用于观察青霉菌形态的系统，包括：
16、自动化倾倒控制单元，配置为在培养基自动化灭菌后将其冷却到设定温度并倾倒至一规定尺寸的培养皿中；
17、无菌操作机构，配备用于自动插入无菌盖玻片到培养基上并在预定区域进行微生物接种的无菌工具；
18、温控培养箱，用于以设定的温度和时间倒置培养处理过的培养皿；
19、染色装置，配置为在培养周期完成后自动对盖玻片上的微生物菌丝体施加特定的染色液，并控制染色和干燥过程；
20、显微观察单元，包含自动滴加香柏油的设备和可切换倍率的显微镜头，以便对染色后的微生物进行观察和分析。
21、进一步包括一个图像捕捉装置，用于捕捉并存储显微镜下观察到的青霉菌形态的图像，该图像捕捉装置与数据处理单元相连，数据处理单元配置有分析软件，用于分析并记录菌丝体形态和大小变化。
22、结合上述的技术方案和解决的技术问题，本专利技术所要保护的技术方案所具备的优点及积极效果为：
23、第一、在实验中常采用印片法，载片法和水浸片法观察基内菌丝和气生菌丝。印片法观察效果不佳，无法清晰辨别菌丝和孢子的形态构造。载片法是将菌种接种在载玻片中央小琼脂块培养基上，然后覆以盖玻片，再放在湿室中作适温培养，之后随时观察青霉的形态。该方法湿室支架在培养皿不稳定，载玻片易滑落，载玻片中央小琼脂培养基极易失水干裂，均会导致青霉不能生长。水浸片法是在载玻片中央滴加一滴水，挑取少量菌丝体置于水中，加盖盖玻片。该方法一方面对菌体没有进行染色，菌体与背景没有形成明显的色差，致使观察时辨识度低，另一方面，盖盖玻片时易产生水泡，且随着观察时间的延长菌丝体与和水分间出现水印，致使观察时清晰度进一步降低，不易观察和采集图像资料。针对上述问题，探索出采用油浸式青霉形态观察方法，第一，插片培养获得了的完整、直观与自然着生的青霉菌丝体玻片标本；第二，0.5％乙醇番红染色使菌体与背景形成明显的色差，从而可清晰观察到青霉形态和构造；第三，油浸式观察不仅可有效较少气泡与水印带来的观察困扰，而且可较长时间反复观察辨识，便于青霉形态图片的采集。为青霉形态观察及形态学鉴定提供了简单、快捷、行之有效的方法。
24、第二，本专利技术通过0.5％乙醇番红染色和油浸式观察，其中染色使菌体与背景形成明显的色差，从而可清晰观察到青霉个体形态和构造；油浸式观察不仅可有效较少气泡与水印带来的观察困扰，而且可较长时间反复观察辨识，可用手机随时采集青霉个体形态图片。为青霉形态观察及形态学鉴定提供了简单、快捷、行之有效的方法。
25、第三，作为本专利技术的权利要求的创造性辅助证据，还体现在以下几个重要方面：
26、(1)本专利技术的技术方案填补了国内外业内技术空白：针对对显微镜操作技术不熟练，对微生物认知基础薄弱，采用油浸式观察不仅可有效较少气泡与水印带来的观察困扰，而且可较长时间反复观察辨识，用手机随时采集青霉个体形态图片，填补了国内油浸式丝状真菌形态观察的空白。
27、国内真菌个体观察方法，如菌丝挑取制片法、插片法、载片培养法、琼脂槽培养法等，是适用于大多数丝状真菌的观察，并没有根据丝状真菌的特征将其细化，本专利技术根据青霉个体特征，如菌丝体和分生孢子颜色为淡色，在显微镜下清晰度低等，通过染色使菌体与背景形成明显的色差，可清本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种油浸式青霉形态处理方法，其特征在于，所述油浸式青霉形态处理方法，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的油浸式青霉形态处理方法，其特征在于，所述第一步冷却至50℃倒平板；平板使用9cm大小培养皿25mL培养基，冷凝待用；接种线长为盖玻片的一半，即在盖玻片两端留有空白。
3.如权利要求1所述的油浸式青霉形态处理方法，其特征在于，所述第一步将插片平板倒置于28℃恒温培养箱培养3-4天。
4.如权利要求1所述的油浸式青霉形态处理方法，其特征在于，所述第二步培养3-4天后，用镊子小心取出盖玻片。
5.如权利要求1所述的油浸式青霉形态处理方法，其特征在于，所述第二步滴加0.5％乙醇番红溶液于盖玻片上，染2min。
6.如权利要求1所述的油浸式青霉形态处理方法，其特征在于，所述第三步用镊子将染色盖玻片菌丝体面朝下的一端与香柏油油面接触后。
7.如权利要求1所述的油浸式青霉形态处理方法，其特征在于，所述染色液的配制：0.5％乙醇番红的配制为：0.5g番红溶于100ml无水乙醇；染色液配置完成后需要加盖保存。
<...【技术特征摘要】
1.一种油浸式青霉形态处理方法，其特征在于，所述油浸式青霉形态处理方法，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的油浸式青霉形态处理方法，其特征在于，所述第一步冷却至50℃倒平板；平板使用9cm大小培养皿25ml培养基，冷凝待用；接种线长为盖玻片的一半，即在盖玻片两端留有空白。
3.如权利要求1所述的油浸式青霉形态处理方法，其特征在于，所述第一步将插片平板倒置于28℃恒温培养箱培养3-4天。
4.如权利要求1所述的油浸式青霉形态处理方法，其特征在于，所述第二步培养3-4天后，用镊子小心取出盖玻片。
5.如权利要求1所述的油浸式青霉形态处理方法，其特征在于，所述第二步滴加0.5％乙醇番红溶液于盖玻片上，染2min。
6.如权利要求1所述的油浸式青霉形...
【专利技术属性】
技术研发人员：王静，徐世宏，姜伟，王弋博，石国玺，
申请(专利权)人：天水师范学院，
类型：发明
国别省市：
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