一种构建I型半乳糖血症基因点突变小鼠模型的方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种构建I型半乳糖血症(GAL I)基因点突变小鼠模型的方法及应用，涉及动物基因工程技术领域，包括如下步骤：利用CRISPR/Cas9系统对小鼠Galt基因c.847+1G位点进行点突变，进而使所述小鼠的Galt基因c.847+1G位点由碱基G突变为碱基T，得到I型半乳糖血症的基因点突变小鼠模型；所述CRISPR/Cas9系统包括Cas9mRNA、sgRNA和ssODN；所述sgRNA的序列如SEQ ID NO.1所示，所述ssODN的序列如SEQ ID NO.2所示。本发明专利技术针对经典半乳糖血症GALT基因的致病位点Galt c.847+1G>T(人类为GALT c.904+1G>T)设计了sgRNA、ssODN，成功构建了Galt c.847+1G>T点突变小鼠，其在转录的时候发生剪接错误，GALT蛋白无法正确翻译，为探索GAL I发生和发展机理、发现药物新靶点以及临床前药效学评价等生物医学研究奠定基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及动物基因工程，具体涉及一种构建i型半乳糖血症基因点突变小鼠模型的方法及应用。

技术介绍

1、半乳糖血症(galactosemia,gal,omim#230440)是由于半乳糖leloir代谢途径中关键酶失活或功能异常所引起的常染色体隐性遗传代谢病，包括i型、ii型和iii型。i型半乳糖血症，(type i galactosamia,gal i,omim#230400)又称经典半乳糖血症(classicgalactosemia)，其患病率为1/30000—1/60000，在三种半乳糖血症中发病率最高。半乳糖对人体至关重要，具有广泛的功能，是婴儿断奶前的关键能量来源，对早期发育尤为重要，如果不及时治疗，可致新生儿死亡。

2、gal i的临床症状可分为急性症状和慢性并发症。急性症状是由于胎儿出生后摄取乳汁中乳糖，乳糖代谢异常导致肝大、肝硬化等肝损伤，随后出现白内障及肾小管功能不全等症状，严重威胁生命。乳糖和半乳糖饮食限制治疗后，可有效缓解gal i的急性症状，然而并不能解决gal i的慢性并发症。慢性并发症主要为神经系统和生殖系统病变，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种构建I型半乳糖血症基因点突变小鼠模型的方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：利用CRISPR/Cas9系统对小鼠Galt基因c.847+1G位点进行点突变，进而使所述小鼠的Galt基因c.847+1G位点由碱基G突变为碱基T，得到I型半乳糖血症的基因点突变小鼠模型；

2.根据权利要求1所述一种构建I型半乳糖血症基因点突变小鼠模型的方法，其特征在于，所述方法包括使用所述sgRNA、所述ssODN和Cas9 mRNA的混合物的步骤。

3.根据权利要求1或2所述一种构建I型半乳糖血症基因点突变小鼠模型的方法，其特征在于，所述方法包括如下的具体的步骤：...

【技术特征摘要】

1.一种构建i型半乳糖血症基因点突变小鼠模型的方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：利用crispr/cas9系统对小鼠galt基因c.847+1g位点进行点突变，进而使所述小鼠的galt基因c.847+1g位点由碱基g突变为碱基t，得到i型半乳糖血症的基因点突变小鼠模型；

2.根据权利要求1所述一种构建i型半乳糖血症基因点突变小鼠模型的方法，其特征在于，所述方法包括使用所述sgrna、所述ssodn和cas9 mrna的混合物的步骤。

3.根据权利要求1或2所述一种构建i型半乳糖血症基因点突变小鼠模型的方法，其特征在于，所述方法包括如下的具体的步骤：

4.根据权利要求3所述一种构建i型半乳糖血症基因点突变小鼠模型的方法，其特征在于，所述sgrna、所述ssodn和所述cas9 mrna的质量比为1：1：1。

5.根据权利要求3...

【专利技术属性】
技术研发人员：于鸿浩，付灿，岳鹏鹏，辜澜涛，李勇，季子涵，
申请(专利权)人：桂林医学院，
类型：发明
国别省市：