【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程，具体涉及用于慢病毒包装的plenti系列载体。
技术介绍
1、慢病毒(lentivirus)载体是以hiv-1(人类免疫缺陷i型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。慢病毒载体的研究发展的很快，研究的也非常深入，慢病毒可以将外源基因有效地整合到宿主细胞的基因组染色体上，从而达到稳定整合，并随宿主细胞的分裂增殖而稳定遗传给子代细胞。
2、慢病毒具有感染谱很广的优点，可以有效地感染神经元细胞，肝细胞，心肌细胞，肿瘤细胞，内皮细胞等多种类型的细胞，因而其在基因治疗和细胞治疗领域具有潜在的广泛应用，目前在全世界范围内已经开展了很多慢病毒治疗相关的临床研究。在cart细胞治疗中，从病人自身分离到的t细胞通过基因工程化修饰，可以选择性地攻击肿瘤细胞。而实现t细胞的基因工程化修饰，是car-t生产的核心技术，而这一步需要利用载体将car基因导入t细胞，慢病毒和逆转录病毒作为常用的病毒载体，逆转录病毒感染效率高，比较稳定，而慢病毒需要大量质粒进行瞬时转染，但安全性较高。
3、目前，慢病毒研究领域涉及众多方向，各类研究对慢病毒载体的需求可能存在差异。构建一系列便于慢病毒载体改造的基础载体有助于提高载体改造的效率，因此，提出用于慢病毒包装的plenti系列载体，为慢病毒的临床研究提供更优质的辅助工具。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供用于慢病毒包装的plenti系列载体，为慢病毒的临床研究提供更好的辅助工具。
2、本专利技术的目的可以
3、用于慢病毒包装的plenti系列载体，包括慢病毒载体plenti-mcs1和慢病毒载体plenti-mcs1+msc2，通过如下步骤制备：
4、步骤一：以nhei和bspdi对慢病毒载体plenti-cmv-egfp-pgk-hygro进行酶切线性化，胶回收，得到线性化好的载体；以慢病毒载体plenti-cmv-egfp-pgk-hygro为模板，通过wpre引物进行pcr扩增，将pcr产物进行琼脂糖凝胶电泳之后并进行胶回收，得到的pcr产物和线性化好的载体进行无缝克隆，得到最终的慢病毒骨架载体plenti-backbone，其全序列如seq id no2所示；
5、步骤二：以bspdi对慢病毒骨架载体plenti-backbone进行酶切线性化，胶回收；合成mcs1的多克隆位点序列并设计mcs1引物，通过mcs1引物进行pcr扩增后胶回收，得到mcs1pcr产物；将胶回收的mcs1 pcr产物和线性化的慢病毒骨架载体plenti-backbone进行无缝克隆，得到慢病毒载体plenti-mcs1，其全序列如seq id no3所示；
6、步骤三：以nhei对慢病毒载体plenti-mcs1进行酶切线性化，胶回收；合成mcs2序列并设计mcs2引物，pcr扩增后得到mcs2 pcr产物；将mcs2 pcr产物和线性化后的plenti-mcs1载体进行无缝克隆，得到慢病毒载体plenti-mcs1+msc2，其全序列如seq id no4所示。
7、本专利技术的有益效果：
8、本专利技术以慢病毒载体plenti-cmv-egfp-pgk-hygro为骨架进行载体改造，得到包括慢病毒载体plenti-mcs1和慢病毒载体plenti-mcs1+mcs2的用于慢病毒包装的plenti系列载体，可以应用于基因治疗与细胞治疗等领域，为慢病毒的临床研究提供更优质的辅助工具；其中，慢病毒载体plenti-mcs1可以应用于各类单启动子启动单片段或者多片段的慢病毒相关载体的改造；慢病毒载体plenti-mcs1+mcs2可以应用于各类多启动子启动多片段的慢病毒相关载体的改造。
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1.用于慢病毒包装的pLENTI系列载体，其特征在于，包括慢病毒载体pLenti-MCS1和慢病毒载体pLenti-MCS1+MSC2，慢病毒载体pLenti-MCS1通过慢病毒骨架载体pLenti-backbone改造得到；
2.根据权利要求1所述的用于慢病毒包装的pLENTI系列载体，其特征在于，所述慢病毒骨架载体pLenti-backbone通过如下步骤制备：
3.根据权利要求2所述的用于慢病毒包装的pLENTI系列载体，其特征在于，所述慢病毒骨架载体pLenti-backbone的全序列如SEQ ID NO2所示。
4.根据权利要求1所述的用于慢病毒包装的pLENTI系列载体，其特征在于，所述慢病毒载体pLenti-MCS1通过如下步骤制备：
5.根据权利要求4所述的用于慢病毒包装的pLENTI系列载体，其特征在于，所述MCS1引物包括MCS1-FP和MCS1-RP，MCS1-FP的序列为TTCAAAATTTTATCGTTCGAACTGCAGTCGACCGTTTAG；MCS1-RP的序列为AGAGGTTGATTATCGGAC
6.根据权利要求1所述的用于慢病毒包装的pLENTI系列载体，其特征在于，所述慢病毒载体pLenti-MCS1+MSC2通过如下步骤制备：
7.根据权利要求6所述的用于慢病毒包装的pLENTI系列载体，其特征在于，所述MCS2引物包括MCS2-FP和MCS2-RP，MCS2-FP的序列为GGGCCGCCTCCCCGCGATATCCGGACTAGTGATCTCTCGAGAC；MCS2-RP的序列为TTGGGAGTGAGCTAGCCCTTCCACCCGGGCC。
...【技术特征摘要】
1.用于慢病毒包装的plenti系列载体，其特征在于，包括慢病毒载体plenti-mcs1和慢病毒载体plenti-mcs1+msc2，慢病毒载体plenti-mcs1通过慢病毒骨架载体plenti-backbone改造得到；
2.根据权利要求1所述的用于慢病毒包装的plenti系列载体，其特征在于，所述慢病毒骨架载体plenti-backbone通过如下步骤制备：
3.根据权利要求2所述的用于慢病毒包装的plenti系列载体，其特征在于，所述慢病毒骨架载体plenti-backbone的全序列如seq id no2所示。
4.根据权利要求1所述的用于慢病毒包装的plenti系列载体，其特征在于，所述慢病毒载体plenti-mcs1通过如下步骤制备：
5.根据权利要求4所述的用于慢病毒包装的plenti...
【专利技术属性】
技术研发人员：施荣辉，刘登辉，周金山，
申请(专利权)人：通用生物安徽股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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