【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于天然高分子材料，具体涉及一种黄精纯化多糖及其制备方法和在制备缓解乳腺增生的药物中的应用。
技术介绍
1、乳腺增生是一种常见的非炎症性乳腺疾病，主要是由于体内雌孕激素失衡所导致的。乳腺增生常见于绝经前和围绝经期妇女，临床病症主要为周期性乳房胀痛、乳房包块和乳叶增厚。随着现今生活节奏加快、生活环境变化等因素，年轻群体需要承受巨大的社会压力，乳腺增生发病开始显现年轻化的趋势。乳腺增生虽然一种良性疾病，但仍具有癌变的风险，尤其是由非典型性增生引发的乳腺癌，因此应对本病给予足够的重视，做到早发现早治疗。
2、目前临床上治疗乳腺增生的药物主要以激素类药物、维生素类药物以及碘制剂为主。激素类药物，比如他莫昔芬，通过雌激素竞争受体从而抑制雌激素的作用。维生素类药物，比如维生素e，主要是通过肝功能的改善从而对过多的雌激素进行灭活。碘制剂，主要通过促进黄体生成素的生成，对卵巢进行修复，平衡雌激素。虽然它们都有一定疗效，但它们或是疗效较短，或是有明显的副作用，并不能长期用于治疗乳腺增生。因此，除非症状对生活造成严重影响，否则一般不把西药作为治疗乳腺增生的首要选择。由于中医药具有无创性、毒性小、疗效显著等特点，将中医药用于治疗乳腺增生开始逐渐被人们接受。
3、黄精为百合科黄精属植物的干燥根茎，味甘，平，归脾经、肺经及肾经，具有补中益气，益肾滋阴，健脾润肺，祛风湿痹的功效。黄精中含有多糖、皂苷类、黄酮类和生物碱类等多种化学成分，其中多糖是其主要成分之一。对于分离纯化后的黄精纯化多糖的药理作用及用途有待进一步探究。p>
技术实现思路
1、本专利技术的第一个目的在于提供一种黄精纯化多糖，本专利技术的第二个目的在于提供该黄精纯化多糖的制备方法，本专利技术的第三个目的在于提供该黄精纯化多糖的应用。
2、根据本专利技术的第一个方面，提供了一种黄精纯化多糖，其单糖组成包括木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖，木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖的摩尔比为6.45：30.26：7.43：55.87。
3、在一些实施方式中，黄精纯化多糖的红外图谱的主要伸缩振动吸收峰与附图4所示的红外图谱中的基本一致。
4、在一些实施方式中，黄精纯化多糖的分子量分布在2000-30000da内，分子量集中在22877da。
5、根据本专利技术的第二个方面，提供了上述的黄精纯化多糖的制备方法，包括如下步骤：
6、(1)称取黄精粉末，按照1:8～15的料液比加入水，搅拌均匀，浸泡20～30min，得到黄精水沫混合液，然后将黄精水沫混合液在55～70℃提取2～4次，每次2～4h，将各次提取得到的提取液合并，得黄精水提液；然后将黄精水提液减压浓缩，得到浓缩液，然后按照1:3～5的体积比向浓缩液中加入无水乙醇，在室温下静置过夜，然后离心，收集沉淀；
7、(2)将步骤(1)得到的沉淀加水复溶，得到醇沉多糖复溶溶液，然后向醇沉多糖复溶溶液中加入sevage试剂除蛋白，振荡静置过夜，然后离心，取上清液，随后将上清液减压浓缩，得到浓缩液，然后将浓缩液添加到大孔树脂中进行脱色处理，用纯水洗脱，收集洗脱液，将洗脱液冷冻干燥，得到黄精粗多糖；
8、(3)将步骤(2)得到的黄精粗多糖加水配制成浓度为40～60mg/ml的溶液，经0.22μm滤膜过滤后，得到滤液，再将滤液经deae-52纤维素离子交换柱分离，上样量为柱体积的1.2～1.8％，用纯水进行洗脱，手动收集洗脱液，然后将洗脱液减压浓缩，得到浓缩液，再将浓缩液冷冻干燥，得到黄精水洗多糖；
9、(4)将步骤(3)得到的黄精水洗多糖加水配制成浓度为40～60mg/ml的溶液，经0.22μm滤膜过滤后，得到滤液，再将滤液加入sephadex g-50葡聚糖凝胶柱中进行分离纯化，上样量为柱体积的1.2～1.8％，用纯水进行洗脱，手动收集洗脱液，每管收集2ml，收集第21～41管洗脱液，合并后经减压浓缩，得到浓缩液，然后将浓缩液进行透析，得到透析液，然后将透析液冷冻干燥，得到黄精纯化多糖。
10、本专利技术先通过deae-52纤维素离子交换柱把黄精多糖从复杂的混合物中提取出来，再通过sephadex g-50葡聚糖凝胶柱把黄精多糖中的不同成分的糖分离出来。由于经滤膜过滤后可以去除部分杂质，使样品更好的上柱纯化，因此本专利技术先经滤膜过滤，再上柱纯化。由于分离的是中性多糖，此多糖可以溶于水，因此用纯水进行洗脱。
11、在一些实施方式中，步骤(1)中，以6000r/min离心15min，收集沉淀；步骤(2)中，以12000r/min离心10min后取上清液。
12、在一些实施方式中，步骤(2)中，用2bv纯水洗脱，洗脱的流速为20ml/min；步骤(3)中，用2bv纯水洗脱，洗脱的流速为10ml/min；步骤(4)中，用2bv纯水进行洗脱，洗脱流速为1ml/min。
13、在一些实施方式中，步骤(2)中，sevage试剂是将氯仿和正丁醇按照体积比为4:1进行混合得到的，sevage试剂与醇沉多糖复溶溶液的体积比为2:1。
14、在一些实施方式中，步骤(4)中，将浓缩液过截留分子量为2000da的透析袋进行透析，透析时间为24h。
15、根据本专利技术的第三个方面，提供了上述的黄精纯化多糖在制备缓解/治疗乳腺增生的药物中的应用。
16、根据本专利技术的第四个方面，提供了一种缓解/治疗乳腺增生的药物，其由上述的黄精纯化多糖和药学上可接受的辅料制得。
17、本专利技术的有益效果包括：
18、(1)本专利技术的黄精纯化多糖可以减少雌孕激素失调对hc11乳腺上皮细胞的毒性损伤，低浓度(5μg/ml)的黄精纯化多糖即可对细胞产生保护作用，当黄精纯化多糖的浓度达到500μg/ml时，就能够完全保护hc11乳腺上皮细胞免受雌孕激素失调产生的细胞毒性损伤。
19、(2)本专利技术通过小鼠乳腺增生模型干预实验验证了本专利技术的黄精纯化多糖具有显著抑制小鼠乳腺增生的作用，这提示可以将其用于开发治疗乳腺增生的药物。
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1.黄精纯化多糖，其特征在于，其单糖组成包括木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖，所述木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖的摩尔比为6.45：30.26：7.43：55.87。
2.根据权利要求1所述的黄精纯化多糖，其特征在于，所述黄精纯化多糖的红外图谱的主要伸缩振动吸收峰与附图4所示的红外图谱中的基本一致。
3.根据权利要求1或2所述的黄精纯化多糖，其特征在于，所述黄精纯化多糖的分子量分布在2000-30000Da内，分子量集中在22877Da。
4.权利要求1-3任一项所述的黄精纯化多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
5.根据权利要求4所述的黄精纯化多糖的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，以6000r/min离心15min，收集沉淀；步骤(2)中，以12000r/min离心10min后取上清液。
6.根据权利要求4或5所述的黄精纯化多糖的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，用2BV纯水洗脱，洗脱的流速为20mL/min；步骤(3)中，用2BV纯水洗脱，洗脱的流速为10mL/min；步骤(4)中，用2BV纯水进行洗脱，洗脱流
7.根据权利要求4或5所述的黄精纯化多糖的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述Sevage试剂是将氯仿和正丁醇按照体积比为4:1进行混合得到的，所述Sevage试剂与醇沉多糖复溶溶液的体积比为2:1。
8.根据权利要求4或5所述的黄精纯化多糖的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，将浓缩液过截留分子量为2000Da的透析袋进行透析，透析时间为24h。
9.权利要求1～3任一项所述的黄精纯化多糖在制备缓解/治疗乳腺增生的药物中的应用。
10.缓解/治疗乳腺增生的药物，其特征在于，其由权利要求1～3任一项所述的黄精纯化多糖和药学上可接受的辅料制得。
...【技术特征摘要】
1.黄精纯化多糖，其特征在于，其单糖组成包括木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖，所述木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖的摩尔比为6.45：30.26：7.43：55.87。
2.根据权利要求1所述的黄精纯化多糖，其特征在于，所述黄精纯化多糖的红外图谱的主要伸缩振动吸收峰与附图4所示的红外图谱中的基本一致。
3.根据权利要求1或2所述的黄精纯化多糖，其特征在于，所述黄精纯化多糖的分子量分布在2000-30000da内，分子量集中在22877da。
4.权利要求1-3任一项所述的黄精纯化多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
5.根据权利要求4所述的黄精纯化多糖的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，以6000r/min离心15min，收集沉淀；步骤(2)中，以12000r/min离心10min后取上清液。
6.根据权利要求4或5所述的黄精纯化多糖的制...
【专利技术属性】
技术研发人员：杜志云，曾绮颖，朱溶滔，苏湘，黎永良，谢玲娜，彭奕，
申请(专利权)人：广东工业大学，
类型：发明
国别省市：
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