【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种新型冠状病毒delta和omicron变异株嵌合抗原、其制备方法和应用。
技术介绍
1、新型冠状病毒肺炎(也称covid-19)是由新型冠状病毒(也称新冠病毒，sars-cov-2)感染导致的一种急性呼吸道传染病。新冠病毒属于冠状病毒科β-冠状病毒属，具有囊膜，是正链rna病毒。新冠病毒表面的刺突(s)蛋白负责病毒的受体识别和膜融合，s蛋白上存在受体结合结构域(rbd)是一个重要的疫苗靶点，它激发中和抗体的产生，具有免疫聚焦的优势。在新冠疫情初期我们紧急攻关开发了基于新冠病毒rbd二聚体的重组亚单位蛋白疫苗zf2001，在之后的临床实验中显示出良好的免疫原性和保护效果。
2、目前，新冠病毒变异株不断出现和流行，其中有些会逃逸现有疫苗的免疫反应，引起突破性感染。特别是德尔塔(delta)和奥密克戎(omicron)变异株依次成为了优势流行毒株。omicron变异株的s蛋白突变位点多达32处，对新冠病毒中和抗体药物和疫苗激活的体液免疫反应都有严重的免疫逃逸。然而，有研究报道，以omicron序列开发的疫苗激活的免疫反应虽然对omicron变异株较强，但是对原型毒株以及其它毒株的交叉反应很弱，不适应当前原型株和多种变异株共存，且流行变异株仍在较快变化的情况，因此，需要研发一款针对当前的全球流行株均具有较强保护效果，可以诱导广谱的免疫反应的疫苗。
3、公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一
技术实现思路
1、专利技术目的
2、本专利技术的目的在于提供一种新型冠状病毒delta和omicron变异株的重组嵌合抗原、其相关产品及其制备方法和应用。根据本专利技术的重组抗原为由(1)来自新型冠状病毒delta变异株的rbd蛋白的特定氨基酸序列或与其具有至少90％，92％，95％，96％，97％，98％或99％同一性的氨基酸序列和(2)来自新型冠状病毒omicron变异株的rbd蛋白的特定氨基酸序列或与其具有至少90％，92％，95％，96％，97％，98％或99％同一性的氨基酸序列直接串联或者通过适当的连接序列串联而形成的单链二聚体，其能够高效地激活广谱保护性抗体，对原始毒株以及当前的各种变异株都能起到很好的预防或治疗效果。
3、解决方案
4、为实现本专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
5、第一方面，本专利技术提供了一种新型冠状病毒delta和omicron变异株的重组嵌合抗原，所述重组抗原的氨基酸序列包括：按照(a-b)-(a-b’)或(a-b)-c-(a-b’)样式排列的氨基酸序列，其中：
6、a-b表示如seq id no:1所示的氨基酸序列或与其具有至少90％，92％，95％，96％，97％，98％或99％同一性的氨基酸序列，
7、a-b’表示如seq id no:2所示的氨基酸序列或与其具有至少90％，92％，95％，96％，97％，98％或99％同一性的氨基酸序列，并且
8、c表示连接序列。
9、在上述重组抗原的一种可行的实现方式中，c表示如(ggs)n所示的连接序列，其中，n表示ggs的个数，n为1至10之间的整数，优选为1-5之间的整数。
10、在上述重组抗原的一种优选的实施方案中，所述重组抗原的氨基酸序列包括：按照(a-b)-(a-b’)样式排列的氨基酸序列，其中：
11、a-b表示如seq id no:1所示的氨基酸序列或与其具有至少90％，92％，95％，96％，97％，98％或99％同一性的氨基酸序列，优选为如seq id no:1所示的氨基酸序列；
12、a-b’表示如seq id no:2所示的氨基酸序列或与其具有至少90％，92％，95％，96％，97％，98％或99％同一性的氨基酸序列，优选为如seq id no:2所示的氨基酸序列。
13、在一个优选的具体实施方案中，所述重组抗原的氨基酸序列如seq id no:3所示。
14、第二方面，本专利技术提供了一种如上述第一方面所述重组抗原的制备方法，其包括以下步骤：
15、在编码如上述第一方面所述重组抗原的核苷酸序列的5’端加上编码信号肽的序列，3’端加上组氨酸和终止密码子，进行克隆表达，筛选正确的重组子，然后将其转染表达系统的细胞进行表达，收集细胞培养上清，从中分离获得所述重组抗原。
16、在上述制备方法的一种可行的实现方式中，所述表达系统的细胞包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、酵母细胞或细菌细胞；
17、可选地，所述哺乳动物细胞包括hek293t细胞、hek293f细胞、expi293f细胞或cho细胞；
18、可选地，所述细菌细胞包括大肠杆菌细胞。
19、第三方面，本专利技术提供了一种多核苷酸，其编码如上述第一方面所述的重组抗原。
20、所述多核苷酸为经人源密码子优化的核苷酸序列，可以为dna或mrna；
21、优选地，所述多核苷酸为如seq id no:4所示的核苷酸序列。
22、第四方面，本专利技术提供了一种核酸构建体，其包含如上述第三方面所述的多核苷酸，以及任选地，与所述多核苷酸可操作地连接的至少一个表达调控元件。
23、第五方面，本专利技术提供了一种表达载体，其包含如上述第四方面所述的核酸构建体。
24、第六方面，本专利技术提供了一种转化的细胞，其包括如上述第三方面所述的多核苷酸、如上述第四方面所述的核酸构建体或如上述第五方面所述的表达载体。
25、第七方面，本专利技术提供了如上述第一方面所述的重组抗原、如上述第三方面所述的多核苷酸、如上述第四方面所述的核酸构建体、如上述第五方面所述的表达载体或如上述第六方面所述的转化的细胞在制备新型冠状病毒疫苗中的应用。
26、第八方面，本专利技术提供了一种疫苗或免疫原性组合物，其包含如上述第一方面所述的重组抗原、如上述第三方面所述的多核苷酸、如上述第四方面所述的核酸构建体、如上述第五方面所述的表达载体或如上述第六方面所述的转化的细胞，以及生理学可接受的媒介物、佐剂、赋形剂、载体和/或稀释剂。
27、在一个优选的具体实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物为新型冠状病毒重组蛋白疫苗，其包括如上述第一方面所述的重组抗原和佐剂；
28、可选地，所述佐剂为选自以下佐剂中的一种或多种：铝佐剂、mf59佐剂和类mf59佐剂。
29、在另一个优选的具体实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物为新型冠状病毒dna疫苗，其包括：
30、(1)真核表达载体；和
31、(2)构建入所述真核表达载体中的、编码如上述第一方面所述的重组抗原的dna序列；
32、可选地，所述真核表达载体选自pgx0001、pvax1、pcaggs和pcdna系列载本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种新型冠状病毒Delta和Omicron变异株的重组嵌合抗原，其特征在于：所述重组嵌合抗原的氨基酸序列包括：按照(A-B)-(A-B’)样式排列的氨基酸序列，其中：
2.根据权利要求1所述的重组嵌合抗原，其特征在于：所述重组嵌合抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。
3.一种如权利要求1或2所述重组嵌合抗原的制备方法，其包括以下步骤：在编码如权利要求1或2所述重组嵌合抗原的核苷酸序列的5’端加上编码信号肽的核苷酸序列，3’端加上编码组氨酸的核苷酸序列和终止密码子，进行克隆表达，筛选正确的重组子，然后将其转染表达系统的细胞进行表达，收集细胞培养上清，从中分离获得所述重组嵌合抗原。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述表达系统的细胞包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、酵母细胞或细菌细胞；
5.一种多核苷酸，其编码如权利要求1或2所述的重组嵌合抗原。
6.根据权利要求5所述的多核苷酸，其特征在于：所述多核苷酸为DNA或mRNA；
7.一种核酸构建体，其包含如权利要求5或6所述的多核苷酸，以及任选
8.一种表达载体，其包含如权利要求7所述的核酸构建体。
9.一种转化的细胞，其包括如权利要求5或6所述的多核苷酸、如权利要求7所述的核酸构建体或如权利要求8所述的表达载体。
10.如权利要求1或2所述的重组嵌合抗原、如权利要求5或6所述的多核苷酸、如权利要求7所述的核酸构建体、如权利要求8所述的表达载体或如权利要求9所述的转化的细胞在制备新型冠状病毒疫苗中的应用。
11.一种疫苗或免疫原性组合物，其包含如权利要求1或2所述的重组嵌合抗原、如权利要求5或6所述的多核苷酸、如权利要求7所述的核酸构建体、如权利要求8所述的表达载体或如权利要求9所述的转化的细胞，以及生理学可接受的媒介物、佐剂、赋形剂、载体和/或稀释剂。
12.根据权利要求11所述的疫苗或免疫原性组合物，其为新型冠状病毒重组蛋白疫苗，其包括如权利要求1或2所述的重组嵌合抗原和佐剂；
13.根据权利要求11所述的疫苗或免疫原性组合物，其为新型冠状病毒DNA疫苗，其包括：
14.根据权利要求11所述的疫苗或免疫原性组合物，其为新型冠状病毒mRNA疫苗，其包括编码如权利要求1或2所述的重组嵌合抗原的mRNA序列和脂质纳米颗粒。
15.根据权利要求11所述的疫苗或免疫原性组合物，其为新型冠状病毒-病毒载体疫苗，其包括：
16.根据权利要求11-15任一项所述的疫苗或免疫原性组合物，其特征在于，所述疫苗或免疫原性组合物为鼻喷剂、口服制剂、栓剂或胃肠外制剂的形式；
...【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒delta和omicron变异株的重组嵌合抗原，其特征在于：所述重组嵌合抗原的氨基酸序列包括：按照(a-b)-(a-b’)样式排列的氨基酸序列，其中：
2.根据权利要求1所述的重组嵌合抗原，其特征在于：所述重组嵌合抗原的氨基酸序列如seq id no:3所示。
3.一种如权利要求1或2所述重组嵌合抗原的制备方法，其包括以下步骤：在编码如权利要求1或2所述重组嵌合抗原的核苷酸序列的5’端加上编码信号肽的核苷酸序列，3’端加上编码组氨酸的核苷酸序列和终止密码子，进行克隆表达，筛选正确的重组子，然后将其转染表达系统的细胞进行表达，收集细胞培养上清，从中分离获得所述重组嵌合抗原。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述表达系统的细胞包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、酵母细胞或细菌细胞；
5.一种多核苷酸，其编码如权利要求1或2所述的重组嵌合抗原。
6.根据权利要求5所述的多核苷酸，其特征在于：所述多核苷酸为dna或mrna；
7.一种核酸构建体，其包含如权利要求5或6所述的多核苷酸，以及任选地，与所述多核苷酸可操作地连接的至少一个表达调控元件。
8.一种表达载体，其包含如权利要求7所述的核酸构建体。
9.一种转化的细胞，其包括如权利要求5或6所述的多核苷酸、如权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：高福，戴连攀，徐坤，郑天依，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：
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