仿刺参体壁总ＲＮＡ提取方法技术
【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种仿刺参体壁总ＲＮＡ提取方法，其特征是依次按如下步骤进行： ａ．用０．４５μｍ滤膜过滤的海水清洗仿刺参，取５０ｍｇ～１００ｍｇ仿刺参体壁组织至液氮中速冻； ｂ．将速冻的组织研磨成粉末置入加有１ｍＬ ＴＲＩｚｏｌ裂解液的匀浆器中匀浆，将匀浆液移至离心管Ａ中，室温静置５ｍｉｎ，４℃，１２０００ｒｐｍ／ｍｉｎ离心，取上清至离心管Ｂ中； ｃ．向离心管Ｂ中加入２００μＬ氯仿，摇动１４～１６ｓ，室温静置２～３ｍｉｎ，４℃，１２０００ｒｐｍ／ｍｉｎ离心，取上清至离心管Ｃ中； ｄ．向离心管Ｃ中加２５０μＬ高盐溶液（０．８ｍｏｌ／Ｌ柠檬酸钠和１．２ｍｏｌ／Ｌ氯化钠的混合液）及２５０μＬ异丙醇，室温放置１０ｍｉｎ，４℃，１２０００ｒｐｍ／ｍｉｎ离心，弃上清，沉淀用７５％乙醇漩涡振荡洗涤，４℃，７５００ｒｐｍ／ｍｉｎ离心，吸掉酒精，干燥沉淀物５ｍｉｎ～１０ｍｉｎ； ｅ．用０．１％ＤＥＰＣ处理水溶解所得沉淀物并定容至２０μｌ； ｆ．向ｅ步骤所得溶解液中依次加入３μＬ无ＲＮＡ酶的ＤＮＡ酶缓冲液、６μＬ无ＲＮＡ酶的ＤＮＡ酶（１Ｕ／μＬ）及１μＬ ＲＮＡ酶抑制剂混匀，３７℃水浴１ｈ，得ＤＮＡ裂解液； ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李霞，秦艳杰，王雪，陈秋实，郑柯，
申请(专利权)人：大连海洋大学，
类型：发明
国别省市：91[中国|大连]
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0来自[广东省广州市电信] 2015年04月04日 14:12体壁是昆虫体躯最外层组织，有胚胎的外胚层一部分未分化的细胞形成的皮细胞层及其分泌物（表皮）组成。表皮硬化成外骨骼以保持昆虫的体形和着生体壁肌，体壁还有保护作用，一方面可防止体内水分的蒸发，以保持体内水分平衡，另一方面可防止外来物质的侵入。