一种可连接多片段的重叠延伸ＰＣＲ方法技术

本发明专利技术提供了一种可有效连接多个ＤＮＡ片段的ＳＯＥ－ＰＣＲ方法，该方法通过采用完全互补的拼接区域引物和在重叠链延伸时引入非对称量引物（即位于目的长片度两末端的引物与位于目的长片段拼接区域的引物的摩尔比为４０～１２０∶１），实现了在同一个反应里完成多个片段的连接，同时还具有不需优化模板量和扩增特异性高的优点。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种可连接多片段的重叠延伸ＰＣＲ方法，该方法由以下步骤组成：　　（１）亚片段的合成：针对不同的目的亚片段设计并合成具有互补末端的引物，以具有目的亚片段的ＤＮＡ为模板，在ＤＮＡ聚合酶的作用下进行平行ＰＣＲ反应，扩增出具有重叠末端的亚片段；（２）亚片段的连接：将所得亚片段等摩尔混合，加入步骤（１）中用于合成亚片段的所有引物，在ＤＮＡ聚合酶的作用下进行第二轮ＰＣＲ反应，通过亚片段重叠末端的延伸使各亚片段ＤＮＡ连接成目的长片度；所述引物的用量比例为：位于目的长片度两末端的引物与位于目的长片段拼接区域的引物的摩尔比为４０～１２０∶１；　　上述步骤中，　　所述亚片段的数量为２～５个；　　所述引物由位于目的长片度两末端的引物与位于目的长片段拼接区域的引物组成，其中位于目的长片段拼接区域的引物两两互补。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵卫，钟志成，黎诚耀，朱利，熊建英，万成松，张玲，
申请(专利权)人：南方医科大学，
类型：发明
国别省市：81