一种提高丙酮酸脱羧酶SsPDC在大肠杆菌中可溶性表达的方法技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域，具体涉及一种提高丙酮酸脱羧酶SsPDC在大肠杆菌中可溶性表达的方法。本发明专利技术是以聚集抗性蛋白SlyD为融合标签，通过引入SlyD融合标签来提高SsPDC蛋白的可溶性表达量，具体是在SsPDC序列的N端加上一个融合标签SlyD序列构建新的质粒SlyD‑SsPDC，得到新的质粒后，重新在大肠杆菌中进行转化表达。本发明专利技术通过增加一个融合标签SlyD，使SsPDC在大肠杆菌中的蛋白表达量极大提升，有效提高了蛋白的可溶性表达，同时也解决了包涵体表达的难题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程，具体涉及一种提高丙酮酸脱羧酶sspdc在大肠杆菌中可溶性表达的方法。

技术介绍

1、蛋白的异源表达是目前生物
中极其重要的一环，涉及生物制药、医美、疫苗药物、体外诊断等多个行业，外源重组蛋白的成功生产包括基因的表达、蛋白的溶解性控制及其纯化。

2、目前，可溶性表达一直是蛋白质高效生产中的一个难以解决的问题，尤其是在大肠杆菌表达系统中，受限于蛋白的溶解性，许多较复杂的重组蛋白在表达上都会遇到形成包涵体这一问题，很多重要的蛋白质家族包括磷酸酶、羧化酶、激酶、膜相关蛋白以及许多其他类型的酶都是难以在大肠杆菌表达系统中作为可溶性蛋白质表达生产。

3、融合标签是一些蛋白质或多肽，将合适的融合标签与目的蛋白融合表达，这些蛋白质或多肽能够帮助目的蛋白进行正确的折叠，从而提高蛋白的可溶性，融合标签通过与目标重组蛋白的n端或c端相连共同表达，从而发挥其作用。

4、丙酮酸脱羧酶（pyruvate decarboxylase，pdc）是硫胺素焦磷酸（thdp）依赖型酶，sspdc是来自磺酸杆菌属的丙酮酸脱羧酶，能本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种提高丙酮酸脱羧酶SsPDC在大肠杆菌中可溶性表达的方法，其特征在于，以聚集抗性蛋白SlyD为融合标签，以大肠杆菌基因组为模板扩增SlyD基因片段，以同源重组的方式连接至pET28a-SsPDC上，构成SlyD-SsPDC重组质粒，此重组质粒即为pET28a-SlyD-SsPDC原核表达载体，将该原核表达载体导入大肠杆菌表达系统中得重组菌，诱导表达SlyD-SsPDC蛋白。

2.如权利要求1所述的一种提高丙酮酸脱羧酶SsPDC在大肠杆菌中可溶性表达的方法，其特征在于，所述聚集抗性蛋白SlyD融合标签的基因核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。>

3.如权利要...

【技术特征摘要】

1.一种提高丙酮酸脱羧酶sspdc在大肠杆菌中可溶性表达的方法，其特征在于，以聚集抗性蛋白slyd为融合标签，以大肠杆菌基因组为模板扩增slyd基因片段，以同源重组的方式连接至pet28a-sspdc上，构成slyd-sspdc重组质粒，此重组质粒即为pet28a-slyd-sspdc原核表达载体，将该原核表达载体导入大肠杆菌表达系统中得重组菌，诱导表达slyd-sspdc蛋白。

2.如权利要求1所述的一种提高丙酮酸脱羧酶sspdc在大肠杆菌中可溶性表达的方法，其特征在于，所述聚集抗性蛋白slyd融合标签的基因核苷酸序列如seq.id.no.1所示。

3.如权利要求1所述的一种提高丙酮酸脱羧酶sspdc在大肠杆菌中可溶性表达的方法，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏浩，张同，马志鑫，周梓萱，刘悦欣，张豪杰，高秀珍，马钦元，
申请(专利权)人：山东理工大学，
类型：发明
国别省市：