【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域。具体地，涉及一种测量拟胚体的尺寸和数量的方法。
技术介绍
1、胚胎干细胞(esc)和诱导多能干细胞(ipsc)的发育全能性为细胞与免疫治疗提供了有保证有前途的祖细胞来源。而模拟胚胎早期发生形成的3d组织拟胚体(embryoidbody，eb)的能力是所有多能干细胞包括胚胎干细胞和诱导多能干细胞所特有的，尤其是诱导多能干细胞，可以从各种类型的体细胞经过重编程得到，并和胚胎干细胞一样有自我更新和发育的多能性，为细胞来源提供了更广阔的前景。
2、目前胚胎干细胞和诱导的多能干细胞广泛临床使用的重大挑战之一是怎么样均匀地将干细胞分化引导到特定的谱系中。eb分化异质性的一个原因是由eb大小的变化引起的。对不同大小的小鼠eb的研究表明：1.100-300μm大小的eb球中细胞具有更高活力，增殖和分化潜力；2.不同大小的小鼠eb在其全基因表达谱中表现出较大的差异，直径为100μm的较小聚集体显示外胚层(hes1)标记表达增加，而直径为500μm的聚集体显示内胚层(afp)和中胚层(gata1，nkx2.5，foxf1)的表达增加)-相关标记。直径为300μm的中等大小的eb同样支持中胚层、外胚层和内胚层特异性标记表达。而在对不同尺寸的人eb的研究表明：eb尺寸的减小与gata6与pax6(内胚层与外胚层)比率的增加密切相关，因此可以认为胚胎干细胞和诱导多能干细胞的培养分化取决于eb球的大小，而eb球的大小是控制后期分化的一个关键因素。
3、目前拟胚体的尺寸和数量更多的是通过显微镜拍照后通过测量
4、因此，本领域需要开发一种高效、简单、适用于工业生产的测量拟胚体的大小和数量的方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种高效、简单、适用于工业生产的测量拟胚体的尺寸和数量的方法。
2、在本专利技术的第一方面，提供了一种拟胚体数量和大小的质控方法，包括步骤：
3、(s1)提供一拟胚体的培养液；
4、(s2)预取样所述的培养液，配置样品流；
5、(s3)通过微流成像(micro-fluid imaging)的方法，利用光学成像设备获取样品流的一系列图像，分析图像获得所述的培养液中拟胚体的数量和大小；和
6、(s4)对所述拟胚体的数量和大小进行质控检测，判断培养液中的拟胚体是否合格；其中，如果满足质控标准，则提示所述培养液中的拟胚体是合格的，而不满足质控标准则提示所述培养液中的拟胚体是不合格的；和
7、(s5)输出上一步骤的检测结果。
8、在另一优选例中，所述质控指标选自下组：
9、(1)拟胚体大小(直径d)：d为80-250微米(较佳地为100-200微米，更佳地为150±30微米)；
10、(2)拟胚体数量n：n为200-3000个/ml(较佳地为600-1000个/ml；更佳地为1200-1600个/ml)。
11、在另一优选例中，所述拟胚体来源于ipsc(优选为ip01细胞)时，所述质控指标包括：直径d为160-200um；数量n为600-1000个/ml。
12、在另一优选例中，所述拟胚体来源于ipsc(优选为ip05细胞)时，所述质控指标包括：直径d为140-180um；数量n为1200-1600个/ml。
13、在另一优选例中，步骤(s2)中，所述预取样包括：
14、(s2.1)平衡：加入v0a体积的pbs、培养基或等渗液(生理盐水)；
15、(s2.2)上样：加入v1体积的所述拟胚体的培养液；
16、(s2.3)洗脱：加入v0b体积的pbs、培养基或等渗液(生理盐水)；
17、其中，v0a、v1、v0b各自独立地满足：
18、100ul≤v0a≤300ul；
19、v0a+v0b≥500，较佳地≥600；
20、v0a+v1+v0b≥1000。
21、在另一优选例中，优选v1＝500ul或400ul。
22、在另一优选例中，所述样品流的流速为50-1000ul/min；较佳地100-1000μl/min；更佳地200-500μl/min；最佳地为200ul/min。
23、在另一优选例中，所述拟胚体的培养液是免稀释、直接检测的。
24、在另一优选例中，所述拟胚体来源于ipsc细胞或esc细胞。
25、在另一优选例中，步骤(s1)包括：将接种密度c0的ipsc细胞或esc细胞培养t0时间，获得所述拟胚体的培养液。
26、在另一优选例中，所述ipsc细胞或esc细胞的接种密度c0为104细胞/ml-107细胞/ml，较佳地，2×105细胞/ml-5×106细胞/ml，更佳地，4×105细胞/ml-2×106细胞/ml。
27、在另一优选例中，所述ipsc细胞或esc细胞的培养时间t0为24-96h；较佳地为24-72h，更佳地为24-48h。
28、在另一优选例中，所述方法检测所述拟胚体的培养液中≥80％，较佳地≥85％的拟胚体。
29、在另一优选例中，所述光学成像设备为微流成像颗粒分析系统。
30、在本专利技术的第二方面，提供了一种拟胚体的自动质控系统，包含以下元件：
31、(d1)预取样模块，所述模块用于拟胚体的培养液的预取样，并配置样品流；
32、(d2)样品流的微流成像模块，所述模块用于获得样品流中拟胚体的图像；
33、(d3)分析模块，所述模块用于分析拟胚体的图像并获得所述拟胚体的培养液中拟胚体的数量和大小；
34、(d4)质控模块，所述模块用于对所述拟胚体的数量和大小进行质控检测，判断培养液中的拟胚体是否合格；其中，如果满足质控标准，则提示所述培养液中的拟胚体是合格的，而不满足质控标准则提示所述培养液中的拟胚体是不合格的；和
35、(d5)输出模块，所述模块用于输出检测结果，所述结果包括培养液中的合格的拟胚体的相关信息。
36、在另一优选例中，所述输出模块输出经质控检测的培养液中的合格的拟胚体的相关信息。
37、应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种拟胚体数量和大小的质控方法，其特征在于，包括步骤：
2.如权利要求1所述的质控方法，其特征在于，所述质控指标选自下组：
3.如权利要求1所述的质控方法，其特征在于，步骤(S2)中，所述预取样包括：
4.如权利要求1所述的质控方法，其特征在于，所述样品流的流速为50-1000ul/min；较佳地100-1000μl/min；更佳地200-500μL/min；最佳地为200ul/min。
5.如权利要求1所述的质控方法，其特征在于，所述拟胚体的培养液是免稀释、直接检测的。
6.如权利要求1所述的质控方法，其特征在于，所述拟胚体来源于iPSC细胞或ESC细胞。
7.如权利要求1所述的质控方法，其特征在于，步骤(S1)包括：将接种密度c0的iPSC细胞或ESC细胞培养t0时间，获得所述拟胚体的培养液。
8.如权利要求7所述的质控方法，其特征在于，所述iPSC细胞或ESC细胞的接种密度c0为104细胞/mL-107细胞/mL，较佳地，2×105细胞/mL-5×106细胞/mL，更佳地，4×105细胞
9.如权利要求7所述的质控方法，其特征在于，所述iPSC细胞或ESC细胞的培养时间t0为24-96h；较佳地为24-72h，更佳地为24-48h。
10.一种拟胚体的自动质控系统，其特征在于，包含以下元件：
...【技术特征摘要】
1.一种拟胚体数量和大小的质控方法，其特征在于，包括步骤：
2.如权利要求1所述的质控方法，其特征在于，所述质控指标选自下组：
3.如权利要求1所述的质控方法，其特征在于，步骤(s2)中，所述预取样包括：
4.如权利要求1所述的质控方法，其特征在于，所述样品流的流速为50-1000ul/min；较佳地100-1000μl/min；更佳地200-500μl/min；最佳地为200ul/min。
5.如权利要求1所述的质控方法，其特征在于，所述拟胚体的培养液是免稀释、直接检测的。
6.如权利要求1所述的质控方法，其特征在于，所述拟胚体来源于ipsc细胞或esc细胞。...
【专利技术属性】
技术研发人员：宗鸿亮，卢建磊，徐廷婷，杨勇，王立群，
申请(专利权)人：星奕昂上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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