【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物发酵，尤其是涉及一种制剂中酒石酸泰万菌素含量的鉴定方法。
技术介绍
1、酒石酸泰万菌素(c53h87no19)又称酒石酸乙酰异戊酰泰乐菌素，是新一代的大环内酯类药物，其特点是抗菌谱广、抗菌活性高、使用剂量小、在动物体内残留量低，细菌对它不易产生耐药性。被广泛应用于猪、鸡支原体病、猪回肠炎和慢性肺阻塞猪蓝耳病等的治疗。
2、含酒石酸泰万菌素的制剂出厂前需要对其酒石酸泰万菌素含量进行进一步鉴定。现有抗生物微生物检定法操作步骤复杂，实验过程中不确定因素较多，包括试验设计、稀释步骤、菌悬液浓度，样品加样量等，该方法操作步骤繁杂、影响因素较多，准确度和重复性与高效液相色谱法(hplc)等化学方法相比较差，近些年有逐渐被hplc等其他方法替代的趋势。但对由生物发酵制得的多组分抗生素，因其组分比较复杂，生物活性成分的比例不稳定，各组分的抗菌效力不同等因素，无法由理化方法替代。
3、因此，提供一种能够提高实验的准确度、减少实验误差、重复性好、检测结果准确率高、稳定性好、可快速准确的鉴定制剂中酒石酸泰万菌素标示量的方法是至关重要的。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术的目的是提供一种制剂中酒石酸泰万菌素含量的鉴定方法。本专利技术通过对菌苔生理盐水洗脱量、带菌培养基菌液添加量、标准品溶液与供试品溶液的加样量进行改进，能够得到清晰地抑菌圈，可使标准品溶液高浓度所致的抑菌圈直径稳定在18～22mm之间；本专利技术所得的实验结果有效，能准确地检测出酒石
2、本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
3、本专利技术提供一种制剂中酒石酸泰万菌素含量的鉴定方法，包括以下步骤：
4、(s1)分别制备高剂量制剂溶液、低剂量制剂溶液、高剂量酒石酸泰万菌素标准品溶液和低剂量酒石酸泰万菌素标准品溶液；
5、(s2)将传代后的藤黄微球菌的经生理盐水洗脱，得到菌悬液；然后将菌悬液加入培养基中，得到含菌培养基；
6、(s3)在平底双碟中由底层至顶层依次铺设纯培养基层、步骤(s2)制备得到的含菌培养基层，然后在含菌培养基层上方设置分别容纳步骤(s1)得到的高剂量制剂溶液、低剂量制剂溶液、高剂量酒石酸泰万菌素标准品溶液和低剂量酒石酸泰万菌素标准品溶液的牛津杯，后处理后培养；
7、(s4)步骤(s3)结束后，根据得到的抑菌圈大小鉴定制剂溶液中酒石酸泰万菌素的标定值是否准确。
8、在本专利技术的一个实施方式中，步骤(s1)中，高剂量制剂溶液与高剂量酒石酸泰万菌素标准品溶液的酒石酸泰万菌素的剂量相同；
9、低剂量制剂溶液与低剂量酒石酸泰万菌素标准品溶液的酒石酸泰万菌素的剂量相同。
10、在本专利技术的一个实施方式中，高剂量酒石酸泰万菌素标准品溶液中酒石酸泰万菌素的剂量为低剂量酒石酸泰万菌素标准品溶液中酒石酸泰万菌素的剂量的2倍。
11、在本专利技术的一个实施方式中，高剂量酒石酸泰万菌素标准品溶液中酒石酸泰万菌素的剂量为5iu/ml～10iu/ml。
12、在本专利技术的一个实施方式中，步骤(s2)中，传代后的藤黄微球菌为传代至2代的藤黄微球菌。
13、在本专利技术的一个实施方式中，生理盐水洗脱量为3ml～5ml。
14、在本专利技术的一个实施方式中，步骤(s2)中，所述培养基为抗生素检定培养基ⅱ号；
15、菌悬液与培养基的体积比为1.2～3：100。
16、在本专利技术的一个实施方式中，步骤(s3)中，牛津杯等距设置。
17、在本专利技术的一个实施方式中，步骤(s3)中，牛津杯中加样量为250μl～270μl。
18、在本专利技术的一个实施方式中，步骤(s3)中，培养过程中，温度为35℃～37℃，时间为16h～18h。
19、在本专利技术的一个实施方式中，步骤(s4)中，当高剂量制剂溶液的抑菌圈直径与高剂量酒石酸泰万菌素标准品溶液的抑菌圈直径的可信限率低于5％时，判定制剂中酒石酸泰万菌素的标示量准确；
20、否则，判定制剂中酒石酸泰万菌素的标示量不准确。
21、本专利技术通过对菌苔生理盐水洗脱量的控制，得到浓度相对稳定的菌悬液。带菌培养基中菌悬液添加量在0.3毫升以上就可以有清晰的抑菌圈，但抑菌圈不在实验所规定的18～22mm范围内；通过实验进一步发现，带菌培养基中菌悬液加入量在1.2～3ml，且牛津杯内加样量在250μl～270μl时，可使抑菌圈直径稳定在18～22mm之间。
22、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
23、(1)本专利技术通过确定菌苔生理盐水的洗脱量为3～5ml，将菌悬液浓度控制在一定范围内，保证由此浓度范围内的菌悬液配制成的带菌培养基在平板上能成片生长，避免单菌落的形成；
24、(2)本专利技术通过确定带菌培养基中菌悬液添加量为1.2～3ml，保证实验能得到清晰地抑菌圈，减少抑菌圈直径测量所带来的误差；
25、(3)本专利技术通过将标准品溶液与供试品溶液滴装量由牛津杯容积定量改为用微量移液器定量，加样量均低于牛津杯的上沿，使每个牛津杯内溶液的张力一致，可得到标准品溶液高浓度所致的抑菌圈直径在18～22mm范围内最佳。
26、(4)本专利技术将制作完成的双碟置于水平台上静置半小时，使样品溶液能够更均匀的分散，确保形成的抑菌圈为规则圆。
27、(5)本专利技术的一种制剂中酒石酸泰万菌素含量的鉴定方法改进试验中的不确定因素，提高实验的准确度，减少实验误差，重复性好，检测结果准确率高，稳定性好，可快速准确的鉴定酒石酸泰万菌素的含量，为相关兽药制剂的质量把控及高效利用提供理论依据。
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1.一种制剂中酒石酸泰万菌素含量的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种制剂中酒石酸泰万菌素含量的鉴定方法，其特征在于，步骤(S1)中，高剂量制剂溶液与高剂量酒石酸泰万菌素标准品溶液的酒石酸泰万菌素的剂量相同；
3.根据权利要求2所述的一种制剂中酒石酸泰万菌素含量的鉴定方法，其特征在于，高剂量酒石酸泰万菌素标准品溶液中酒石酸泰万菌素的剂量为低剂量酒石酸泰万菌素标准品溶液中酒石酸泰万菌素的剂量的2倍。
4.根据权利要求3所述的一种制剂中酒石酸泰万菌素含量的鉴定方法，其特征在于，高剂量酒石酸泰万菌素标准品溶液中酒石酸泰万菌素的剂量为5IU/mL～10IU/mL。
5.根据权利要求1所述的一种制剂中酒石酸泰万菌素含量的鉴定方法，其特征在于，步骤(S2)中，传代后的藤黄微球菌为传代至2代的藤黄微球菌。
6.根据权利要求5所述的一种制剂中酒石酸泰万菌素含量的鉴定方法，其特征在于，生理盐水洗脱量为3mL～5mL。
7.根据权利要求1所述的一种制剂中酒石酸泰万菌素含量的鉴定方法，其特征在于，步骤
8.根据权利要求1所述的一种制剂中酒石酸泰万菌素含量的鉴定方法，其特征在于，步骤(S3)中，牛津杯中加样量为250μL～270μL。
9.根据权利要求1所述的一种制剂中酒石酸泰万菌素含量的鉴定方法，其特征在于，步骤(S3)中，培养过程中，温度为35℃～37℃，时间为16h～18h。
10.根据权利要求1所述的一种制剂中酒石酸泰万菌素含量的鉴定方法，其特征在于，步骤(S4)中，当高剂量制剂溶液的抑菌圈直径与高剂量酒石酸泰万菌素标准品溶液的抑菌圈直径的可信限率低于5％时，判定制剂中酒石酸泰万菌素的标示量准确；
...【技术特征摘要】
1.一种制剂中酒石酸泰万菌素含量的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种制剂中酒石酸泰万菌素含量的鉴定方法，其特征在于，步骤(s1)中，高剂量制剂溶液与高剂量酒石酸泰万菌素标准品溶液的酒石酸泰万菌素的剂量相同；
3.根据权利要求2所述的一种制剂中酒石酸泰万菌素含量的鉴定方法，其特征在于，高剂量酒石酸泰万菌素标准品溶液中酒石酸泰万菌素的剂量为低剂量酒石酸泰万菌素标准品溶液中酒石酸泰万菌素的剂量的2倍。
4.根据权利要求3所述的一种制剂中酒石酸泰万菌素含量的鉴定方法，其特征在于，高剂量酒石酸泰万菌素标准品溶液中酒石酸泰万菌素的剂量为5iu/ml～10iu/ml。
5.根据权利要求1所述的一种制剂中酒石酸泰万菌素含量的鉴定方法，其特征在于，步骤(s2)中，传代后的藤黄微球菌为传代至2代的藤黄微球菌。
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【专利技术属性】
技术研发人员：郭琦，李远森，郑李玲，梁世仁，罗作明，吴有林，
申请(专利权)人：江西益昕葆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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