【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及检测领域，特别涉及一种杧果中六种花色苷uplc-ms/ms测定方法。
技术介绍
1、花青素是类黄酮中颜色最为丰富的一种水溶性色素，是使植物花、茎、叶子、果实呈现红、蓝、紫等多种色彩的重要物质。植物果实中常见的花青素主要有六大类，分为矢车菊色素(cyanidin)、飞燕草色素(delphinidin)、天竺葵色素(pelargonidin)、锦葵花色素(malvidin)、芍药色素(peonidin)和矮牵牛色素(petunidin)(陈孟强，2017)，但在结构上，锦葵花色素、芍药色素和矮牵牛色素均是由矢车菊素与飞燕草素衍生的。花青素基本结构为c6-c3-c6(图1)，由于所取代的基团和取代的位置不同，花青素的种类也会不同。由于在自然界中游离的花青素因理化性质极不稳定，通常会与糖苷结合形成稳定的花色苷存在于液泡。目前，自然界中已知的花色苷700余种，但基本是由常见的6类花青素与不同糖苷结合并衍生得来的。大量研究表明，游离的花青素或花色苷均具有抗氧化、抗癌等生理功能，因此花色苷的分离提取受到广泛关注。
2、目前，在蓝莓、黑果枸杞、苹果等富含花色苷的植物资源开发利用方面已经开展较多研究，但对于杧果果皮中花色苷的开发利用关注较少。建立有效的分析测定方法是对花色苷进行开发利用的基础，大多植物现有的花色苷测定方法主要为紫外-可见风光光度法与液相色谱法两类，其中紫外-可见分光光度计只能测定花色苷的总含量，对其花色苷的组分无法测定，而液相色谱法则可通过各种花色苷组分进行测定。超高效液相色谱(uplc)是在传统液相色谱
技术实现思路
1、鉴于此，本专利技术提出一种杧果中六种花色苷uplc-ms/ms测定方法。
2、本专利技术旨在从色谱分析条件进行研究，进而建立杧果中6种常见花色苷的uplc分析测定方法，并进一步应用所建立的方法对红皮‘贵妃’杧与绿皮‘椰香’杧进行花色苷含量和组成的分析，为杧果的资源综合开发利用提供依据。
3、本专利技术的技术方案是这样实现的：一种杧果中六种花色苷uplc-ms/ms测定方法，采用超高效液相色谱质谱联用测定，包括以下条件：
4、(1)超高效液相色谱条件：流动相a为0.8～1.2％v/v甲酸水，流动相b为体积比为6.5～7.5：2.5～3.5的甲醇-乙腈溶液；流动相b在梯度洗脱过程中体积百分比变化为：10％～15％运行10～15min；15％～23％运行10～15min；23％～75％运行1～1.5min；
5、(2)质谱条件：离子源：电喷雾离子源；工作模式：正离子检测模式；扫描方式：多反应监测模式。
6、进一步的，流动相b在梯度洗脱过程中体积百分比变化为：0～10min，10％～15％b；10～20min，15％～23％ b；21～22min，23％～75％ b；或者，0～15min，10％～15％ b；15～30min，15％～23％ b；30～31.5min，23％～75％ b；31.5～32min，75％～10％ b。
7、进一步的，超高效液相色谱条件还包括：使用waters色谱柱，色谱柱规格为(2.0～2.2)mm×(140～160)mm，色谱柱填料粒径为4～6μm；柱温38～42℃；流速0.4～0.6ml/min；进样量8～12μl。
8、进一步的，超高效液相色谱条件中，流动相a为1％v/v甲酸水，流动相b为体积比为7∶3的甲醇-乙腈溶液；waters色谱柱的规格为2.1mm×150mm，色谱柱填料粒径为5μm；柱温40℃；流速0.6ml/min；进样量10μl。
9、进一步的，超高效液相色谱条件中，标准品溶液制备包括以下步骤：精密称取标准品飞燕草素3-o-葡萄糖苷、飞燕草素3-o-半乳糖苷、锦葵色素-3-o-半乳糖苷、锦葵色素-3-o-葡萄糖苷、矢车菊素-3-o-葡萄糖苷、矢车菊素-3-o-半乳糖苷，分别用0.08～0.12％v/v甲酸水配制成490～510μg/ml的标准品储备液。
10、进一步的，超高效液相色谱条件中，样品溶液制备包括以下步骤：称取杧果果皮样品粉末，加入由甲醇、水和甲酸混合的提取溶剂，避光提取，离心，上清液减压浓缩，浓缩液用甲酸水溶解后过滤，即得样品溶液。
11、进一步的，超高效液相色谱条件中，
12、所述杧果果皮样品粉末和提取溶剂的质量体积比g/ml为1：10～12；
13、所述提取溶剂由甲醇、水和甲酸按照体积比86～90：8～12：1.8～2.2混合制得；
14、所述离心是4500～5500r/min离心8～12min；
15、提取、离心操作均在3～5℃温度下进行；
16、所述甲酸水为0.08～0.12％v/v甲酸水。
17、进一步的，质谱条件中：
18、电喷雾离子源；正离子检测模式；多反应监测模式；分段采集；离子源温度140～160℃；脱溶剂气温度480～520℃；脱溶剂气流量750～850l/h；锥孔气流速45～55l/h；碰撞气流速0.12～0.14ml/min，所述碰撞气为高纯氩气。
19、进一步的，所述多反应监测的条件：
20、
21、进一步的，离子源温度150℃；脱溶剂气温度500℃；脱溶剂气流量800l/h；锥孔气流速50l/h；碰撞气流速0.13ml/min。
22、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
23、本专利技术方法操作便捷，灵敏度高，重复性好，花色苷类物质的检测覆盖面广，能够检测到含量较低的花色苷类物质，可为芒果中花色苷类成分进行快速鉴定及含量测定分析。
24、采用本专利技术所建立的方法，对不同色泽杧果果皮进行测定表明，杧果中主要花色苷为矢车菊素，且在红皮杧果中含量较高。本专利技术所建立的方法可较好地用于杧果花色苷的测定，为杧果资源的综合开发利用提供依据。
25、本专利技术建立杧果中6种常见花色苷的uplc分析测定方法，进一步应用所建立的方法对红皮‘贵妃’杧与绿皮‘椰香’杧进行花色苷含量和组成的分析，为杧果的资源综合开发利用提供依据。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种杧果中六种花色苷UPLC-MS/MS测定方法，其特征在于，采用超高效液相色谱质谱联用测定，包括以下条件：
2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，流动相B在梯度洗脱过程中体积百分比变化为：0～10min，10％～15％B；10～20min，15％～23％B；21～22min，23％～75％B；或者，0～15min，10％～15％B；15～30min，15％～23％B；30～31.5min，23％～75％B；31.5～32min，75％～10％B。
3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，超高效液相色谱条件还包括：使用Waters色谱柱，色谱柱规格为(2.0～2.2)mm×(140～160)mm，色谱柱填料粒径为4～6μm；柱温38～42℃；流速0.4～0.6mL/min；进样量8～12μL。
4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，超高效液相色谱条件中，流动相A为1％v/v甲酸水，流动相B为体积比为7∶3的甲醇-乙腈溶液；Waters色谱柱的规格为2.1mm×150mm，色谱柱填料粒径为5μm；柱温40℃；流速0.6m
5.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，超高效液相色谱条件中，标准品溶液制备包括以下步骤：精密称取标准品飞燕草素3-O-葡萄糖苷、飞燕草素3-O-半乳糖苷、锦葵色素-3-O-半乳糖苷、锦葵色素-3-O-葡萄糖苷、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、矢车菊素-3-O-半乳糖苷，分别用0.08～0.12％v/v甲酸水配制成490～510μg/mL的标准品储备液；将配置好的标准品储备液，用0.08～0.12％v/v甲酸水稀释成1～500ng/mL的标准溶液。
6.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，超高效液相色谱条件中，样品溶液制备包括以下步骤：称取杧果果皮样品粉末，加入由甲醇、水和甲酸混合的提取溶剂，避光提取，离心，上清液减压浓缩，浓缩液用甲酸水溶解后过滤，即得样品溶液。
7.根据权利要求6所述的测定方法，其特征在于，超高效液相色谱条件中，
8.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，质谱条件中：
9.根据权利要求8所述的测定方法，其特征在于，所述多反应监测的条件：
10.根据权利要求8所述的测定方法，其特征在于，
...【技术特征摘要】
1.一种杧果中六种花色苷uplc-ms/ms测定方法，其特征在于，采用超高效液相色谱质谱联用测定，包括以下条件：
2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，流动相b在梯度洗脱过程中体积百分比变化为：0～10min，10％～15％b；10～20min，15％～23％b；21～22min，23％～75％b；或者，0～15min，10％～15％b；15～30min，15％～23％b；30～31.5min，23％～75％b；31.5～32min，75％～10％b。
3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，超高效液相色谱条件还包括：使用waters色谱柱，色谱柱规格为(2.0～2.2)mm×(140～160)mm，色谱柱填料粒径为4～6μm；柱温38～42℃；流速0.4～0.6ml/min；进样量8～12μl。
4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，超高效液相色谱条件中，流动相a为1％v/v甲酸水，流动相b为体积比为7∶3的甲醇-乙腈溶液；waters色谱柱的规格为2.1mm×150mm，色谱柱填料粒径为5μm；柱温40℃；流速0.6ml/min；进样量1...
【专利技术属性】
技术研发人员：党志国，冯焕德，郑燕萍，朱敏，陈华蕊，雷新涛，陈业渊，高爱平，黄建峰，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。