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用于人抗凝相关药物的基因位点检测的引物组、试剂及其方法技术

技术编号:40361000 阅读:7 留言:0更新日期:2024-02-09 14:48
本发明专利技术公开了一种用于人抗凝相关药物的基因位点检测的引物组、试剂及其应用,旨在提供一种具有中高通量,成本低,检测速度快,操作简便的检测方法,该方法包括引物组合1‑引物组合18中的一种或多种的组合,涉及生物检查技术领域。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术公开了一种引物组、试剂,具体地说,是一种指导人抗凝用药的引物组、试剂,涉及生物。


技术介绍

1、心脑血管疾病具有“四高一多”即“发病率高、致残率高、死亡率高、复发率高,并发症多”的特点。

2、传统医疗模式是“试误法”“千人一药”“万人一量”的经验用药模式,但药物疗效和不良反应呈个体化差异。相同的病症、相同的治疗药物、相同的剂量,有的人有效且无毒性、有的人无毒且无效、有的人有效但有毒,有的人无效且有毒。影响药物反应个体差异的原因有:性别、年龄、体重、身高、环境因素、病程、器官功能、并发症、遗传因素等,其中遗传因素是主要原因。遗传因素导致的个体间药物代谢与效应差异平均高达60%-95%。随着人类基因组学计划的完成,后基因组学的深入研究,药物基因组学迅速发展起来。

3、大量的临床数据也显示神经科开展个体化药物基因检测的必要性,药物基因组学的检测的常用方法有一代测序、二代测序、荧光定量pcr技术和飞行时间质谱检测技术。

4、一代测序,也称sanger法测序,主要基于桑格专利技术的双脱氧链终止法和pcr反应。缺点测序通量低,一个反应只能得到一条序列;成本略高,虽然单个反应价格低廉,但获得大量序列的成本很高;灵敏度较低,仅20%。

5、二代测序,特点是检测通量大,检测价格昂贵,操作繁琐,可检测未知的基因突变,生信分析复杂,目前主要适用于多基因位点的突变检测,在临床上主要用于肿瘤靶向用药基因突变检测,肿瘤易感性基因突变检测等。药物基因检测一般检测20-40个已知基因位点,如果二代测序技术用于药物基因检测样本,时间和人力成本会大大增加。

6、荧光定量pcr技术,检测通量低,检测基因位点一般在4-6个,若要检测多个位点,探针成本高,且具有一定的局限性。

7、上述方法均存在经济效益低,操作繁琐,灵敏度低,检测通量过大或者太低的问题。

8、因此,开发一种具有中高通量,成本低,检测速度快,操作简便,并且不需要复杂的生信分析的特点的检测方法显得尤为必要。


技术实现思路

1、本专利技术的第一个目的在于提供一种用于人抗凝相关药物的基因位点检测的引物组,该引物具有高特异性、高灵敏性的特点,满足对目标位点特异性扩增和单碱基延伸的要求。

2、本专利技术的第二个目的是一种用于人抗凝相关药物的基因位点检测的试剂盒,该试剂盒具有使用方便、检测位点多、成本低的优点,满足对抗凝相关药物多基因多位点检测的要求。

3、本专利技术的第三个目的是一种用于人抗凝相关药物的基因位点检测的方法,该检测方法具有中高通量,成本低,检测速度快,操作简便。

4、为此,本专利技术提供的第一个技术方案是这样的:

5、一种用于人抗凝相关药物的基因位点检测的引物组,包括引物组合1-引物组合18中的一种或多种的组合;

6、其中,引物组合1包括:seqidno.1-2所示的扩增引物和seqidno.37所示的延伸引物;

7、引物组合2包括:seqidno.3-4所示的扩增引物和seqidno.38所示的延伸引物;

8、引物组合3包括:seqidno.5-6所示的扩增引物和seqidno.39所示的延伸引物;

9、引物组合4包括:seqidno.7-8所示的扩增引物和seqidno.40所示的延伸引物;

10、引物组合5包括:seqidno.9-10所示的扩增引物和seqidno.41所示的延伸引物;

11、引物组合6包括:seqidno.11-12所示的扩增引物和seqidno.42所示的延伸引物;

12、引物组合7包括:seqidno.13-14所示的扩增引物和seqidno.43所示的延伸引物;

13、引物组合8包括:seqidno.15-16所示的扩增引物和seqidno.44所示的延伸引物;

14、引物组合9包括:seqidno.17-18所示的扩增引物和seqidno.45所示的延伸引物;

15、引物组合10包括:seqidno.19-20所示的扩增引物和seqidno.46所示的延伸引物;

16、引物组合11包括:seqidno.21-22所示的扩增引物和seqidno.47所示的延伸引物;

17、引物组合12包括:seqidno.23-24所示的扩增引物和seqidno.48所示的延伸引物;

18、引物组合13包括:seqidno.25-26所示的扩增引物和seqidno.49所示的延伸引物;

19、引物组合14包括:seqidno.27-28所示的扩增引物和seqidno.50所示的延伸引物;

20、引物组合15包括:seqidno.29-30所示的扩增引物和seqidno.51所示的延伸引物;

21、引物组合16包括:seqidno.31-32所示的扩增引物和seqidno.52所示的延伸引物;

22、引物组合17包括:seqidno.33-34所示的扩增引物和seqidno.53所示的延伸引物;

23、引物组合18包括:seqidno.35-36所示的扩增引物和seqidno.54所示的延伸引物。

24、其中,上述的引物组合1-18所检测的基因的扩增引物以及相应的snp位点信息见下表1。

25、表1

26、

27、

28、

29、其中,上述的引物组合1-18所检测的基因的延伸引物序列以及相应的snp位点信息见下表2。

30、表2

31、 seq id no. 检测位点 延伸引物序列(5’-3’) 37 rs730012 accttatctgtccc 38 rs6065 agcttgggttgggc 39 rs12248560 tcttctgtctcaaag 40 rs12041331 cagagagtaaggtga 41 rs1057910 cagaggtccaaga本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.用于人抗凝相关药物的基因位点检测的引物组,其特征在于,包括引物组合1-引物组合18中的一种或多种的组合;

2.根据权利要求1所述的用于人抗凝相关药物的基因位点检测的引物组,其特征在于,所述的人抗凝相关药物包括氯吡格雷、普拉格雷、华法林、醋硝香豆素、苯丙香豆素、阿司匹林、阿哌沙班、西洛他唑、达比加群、利伐沙班、多沙班、替格瑞洛中的一种或者多种。

3.一种用于人抗凝相关药物的基因位点检测的试剂盒,其特征在于,包括权利要求1所述的引物组。

4.一种用于人抗凝相关药物的基因位点检测的方法,其特征在于,依次包括如下步骤:

5.根据权利要求4所述的用于人抗凝相关药物的基因位点检测的方法,其特征在于,在步骤(1)中,PCR扩增的采用的试剂及其用量如下:

6.根据权利要求4所述的用于人抗凝相关药物的基因位点检测的方法,其特征在于,SAP反应采用的SAP酶混合液包括下述组分及其含量:超纯水1.53μL;SAP缓冲液0.17μL;SAP酶0.3μL;反应程序如下:37℃,40分钟;然后升温85℃,5分钟,后冷却4℃∞。

7.根据权利要求4所述的用于人抗凝相关药物的基因位点检测的方法,其特征在于,延伸反应采用的试剂及其用量如下:

8.根据权利要求7所述的用于人抗凝相关药物的基因位点检测的方法,其特征在于,52℃:5s,52℃:5s,52℃:5s,52℃:5s,52℃:5s是在52℃:5s,80℃:5s,重复5个循环。

9.根据权利要求6所述的用于人抗凝相关药物的基因位点检测的方法,其特征在于,飞行时间质谱检测程序为:

...

【技术特征摘要】

1.用于人抗凝相关药物的基因位点检测的引物组,其特征在于,包括引物组合1-引物组合18中的一种或多种的组合;

2.根据权利要求1所述的用于人抗凝相关药物的基因位点检测的引物组,其特征在于,所述的人抗凝相关药物包括氯吡格雷、普拉格雷、华法林、醋硝香豆素、苯丙香豆素、阿司匹林、阿哌沙班、西洛他唑、达比加群、利伐沙班、多沙班、替格瑞洛中的一种或者多种。

3.一种用于人抗凝相关药物的基因位点检测的试剂盒,其特征在于,包括权利要求1所述的引物组。

4.一种用于人抗凝相关药物的基因位点检测的方法,其特征在于,依次包括如下步骤:

5.根据权利要求4所述的用于人抗凝相关药物的基因位点检测的方法,其特征在于,在步骤(1)中,pcr扩增的采用的试剂及其用量如下:

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【专利技术属性】
技术研发人员:凌大为曾翠冰
申请(专利权)人:瑞因生物科技广州有限公司
类型:发明
国别省市:

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