肿瘤组织的绘图方法技术

本发明专利技术涉及肿瘤组织的绘图方法，其特征在于，ａ）使肿瘤组织与单克隆抗体、单克隆抗体的抗原结合片段、重组结合蛋白、适体或其他分子接触，所述的单克隆抗体、单克隆抗体的抗原结合片段、重组结合蛋白、适体或其他分子识别或结合至少一种新表位，该新表位已经由肿瘤组织周围的蛋白通过肿瘤特异性蛋白酶的蛋白水解分解而生成，ｂ）用成像方法显示由新表位与单克隆抗体、单克隆抗体的抗原结合片段、重组结合蛋白、适体或其他分子形成的复合物，以及，本发明专利技术涉及通过肿瘤特异性蛋白酶对肿瘤组织周围的蛋白进行蛋白水解分解而生成的新表位，还涉及用于通过肿瘤特异性蛋白酶生成新表位的蛋白或肽。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及肿瘤组织的绘图(Abbildimg)方法。此外，本专利技术还涉及新表位，其由 肿瘤组织周围的蛋白通过肿瘤特异性蛋白酶的蛋白水解分解而生成。此外，本专利技术还涉及 用于通过肿瘤特异性蛋白酶生成新表位的蛋白或肽。转移期的癌症通常具有不良的预后，且经常是有生命威胁的。导致形成转移的病 理代谢过程，特征在于两个关键的步骤冲破基膜，从而转移的细胞能从原发性肿瘤转移 至其他的组织，以及引起肿瘤血管发生(参见例如Hanahan，D. and Weinberg, R. A. =The Hallmarks of cancer. CelllOO，57-70 (2000))。这两个步骤均是基于组织的细胞组分和周 围基质之间的复杂相互作用的失调。目前公认的是，蛋白酶，例如基质金属蛋白酶(MMP)， 特别是由转移的肿瘤细胞分泌的基质金属蛋白酶，作用于多聚的和非纤维状的基质组分的 蛋白水解，这对于转移过程是重要的(参见例如McCawly，L.J.，Matrisian，L. Μ. =Matrix metalloproteases :They' re not justfor matrix anymore. Curr. Opin. Cell Biol 13, 534-540(2001))ο肿瘤产生的多种蛋白酶的病理学机能和特异性表达已经得到很好的描述。因此对 于新的化疗法这是有吸引力的潜在目标(“药物靶标”)。此外，肿瘤蛋白酶对于体内检测 和原发性肿瘤及转移肿瘤的分子成像(“moleculare imaging")是有吸引力的目标(参见 例如 McEntyre，J. 0. undMatrisian L. Μ. :Molecular imaging of proteolytic activity in cancer. Journal ofCellular Biochemistry 90, S.1087-1097(2003))。为了通过成像技术检测体内肿瘤蛋白酶的活性，已研制出新型的造影剂，即所谓 的智能造影剂(Smart Contrast Agent)，其为肽和荧光团的缀合物(参见例如Kumar，S. und Richards—Kortum, R. Optical molecularimaging agents for cancer diagnostics and therapeutics. Nanomedicinel,23-30(2006))。这些物质是肿瘤蛋白酶的底物，并且通过 蛋白水解分解从不活泼状态(“淬灭状态”)转化至发荧光状态(参见例如Weisleder， R. undNtziachristos, V. Shedding light onto live molecular targets. NatureMed. 9, 123-128(2003))。这个方法的优势是蛋白酶的各底物的接近性好、蛋白酶的表达的肿瘤特 异性以及如下事实多种底物分子通过单个蛋白酶分子分解的随时间的信号得以增强。然 而这个方法的主要问题如下，该方法是基于荧光检测的，因此和成像技术(例如非常灵敏 的和在临床实践中经常使用的MRI、PET和SPECT)是不兼容的。此外，该方法因为上述问题 在临床实践中不值得被采用。其他的方法基于肿瘤特异性金属蛋白酶的放射性标记抑制剂 的应用。虽然这种抑制剂的结合能通过在临床上使用的成像技术如PET进行跟踪，但是测 量到的信号是微弱的，因为单个酶分子只能结合单个抑制剂分子(参见例如WP LI und CJ Anderson Imaging Matrix Metalloproteinase expression in tumors. Q J Nucl Med47, 201-208(2003))。另外，在肿瘤显示中应用单克隆抗体(mAks)作为高特异性试剂的基础是普遍 接受的(参见例如 Stipsanelli, E. und Valsamaki, P. :01d and newtrends in breast cancer imaging and therapeutic approach· Hell· J· Nucl· med· 8，103—108(2005))。 $ 这些方法中，对肿瘤产生的目标分子呈特异性的mAks —般与放射性核素缀合。放射性核素-mAk-缀合物在施用给病人之后富集在潜在的肿瘤组织中，因此例如可以通过PET或 SPECT可见。这个方法的主要问题是大多数肿瘤抗原的浓度低，这经常导致检测非常困难。 此外，大多数的肿瘤特异性抗原是细胞内蛋白，其通过放射性核素-mAk-缀合物是难接近 的。这里的一种特例是人抗体C0U-1，其结合经加工的细胞内细胞角蛋白8/18(参见例如 Ditzel H. J. et al. :Cancer-associatedcleavage of Cytokeratin 8/18 heterotypic complexes exposes a neoepitope inhuman adenocarcinomase. J. Biol. Chem. 277， 21712-21722(2002))。这个抗体已成功地用于各种腺癌如结肠癌的免疫闪烁成像术中。负 责加工细胞内细胞角蛋白的蛋白酶是未知的，但是推测该蛋白酶仅在细胞凋亡的癌细胞中 是活性的。然而细胞角蛋白8/18的表达局限于上皮细胞，因此C0U-1仅可以用于检测腺癌。 除了现今主要用作人源化变体的单克隆抗体之外，适合这个方法的还有其他特异性结合肿 瘤抗原的分子，例如结合蛋白或适体。因此，存在对可靠并灵敏地显示转移性肿瘤组织的方法的需求。尤其是该方法应 该是易实施的，并适合作为一般医疗诊所中的常规方法。此外，该方法应该适合显示尽可能 多的肿瘤类型。该方法还应该实现对转移可能性或肿瘤转移的扩散的说明(Aussage)。此 外，该方法应该通过检查癌症的种类、癌症的阶段和癌症转移的可能性及癌症的扩散实现 可靠的诊断。出人意料地发现，肿瘤诊断和成像技术的组合实现了高特异性地、灵敏和可信地 显示肿瘤组织，特别是转移性肿瘤组织，在该肿瘤诊断中，由肿瘤组织周围的蛋白通过肿瘤 特异性蛋白酶的蛋白水解分解而生成的一种或多种新表位通过特异性结合该新表位的分 子得以识别和结合。因此，本专利技术涉及，其特征在于，a)使肿瘤组织与单克隆抗 体、单克隆抗体的抗原结合片段、重组结合蛋白、适体或其他分子接触，所述的单克隆抗体、 单克隆抗体的抗原结合片段、重组结合蛋白、适体或其他分子识别或结合至少一种新表位， 所述新表位已经由肿瘤组织周围的蛋白通过肿瘤特异性蛋白酶的蛋白水解分解而生成，b) 用成像方法显示由新表位和单克隆抗体、单克隆抗体的抗原结合片段、重组结合蛋白、适体 或其他分子形成的复合物。本专利技术的主题进一步涉及，其特征在于，对与结合或识别至 少一种新表位的单克隆抗体、单克隆抗体的抗原结合片段、重组结合蛋白、适体或其他分子 接触的肿瘤组织使用成像方法，该新表位已经由肿瘤组织周围的蛋白通过肿瘤特异性蛋白 酶的蛋白水解分解而生成。其中该肿瘤组织可以是在体内或在体外。该方法之前的使肿瘤 组织接触特异性结合待检测新表位的单克隆抗体、单克隆抗体的抗原结合片段、重组结合 蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
肿瘤组织的绘图方法，其特征在于：ａ）使肿瘤组织与单克隆抗体、单克隆抗体的抗原结合片段、重组结合蛋白、适体或其他分子接触，所述的单克隆抗体、单克隆抗体的抗原结合片段、重组结合蛋白、适体或其他分子识别或结合至少一种新表位，所述新表位已经由肿瘤组织周围的蛋白通过肿瘤特异性蛋白酶的蛋白水解分解而生成；ｂ）用成像方法显示由新表位与单克隆抗体、单克隆抗体的抗原结合片段、重组结合蛋白、适体或其他分子形成的复合物。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿恩亨格勒，安德烈亚斯卡佩尔，
申请(专利权)人：西门子公司，西门子保健诊断产品有限责任公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]