利用P450基因N-Z1为筛选标记、啶嘧磺隆为筛选剂的玉米遗传转化方法技术

本发明专利技术提供一种利用P450基因N‑Z1为筛选标记、啶嘧磺隆为筛选剂的玉米遗传转化方法，将含有细胞色素P450基因N‑Z1的转化载体转化农杆菌，再用农杆菌菌液侵染玉米幼胚，以啶嘧磺隆为筛选剂，筛选阳性转化体。本发明专利技术首次提出在玉米转化过程中将植物来源的抗啶嘧磺隆基因N‑Z1作为筛选标记、啶嘧磺隆作为筛选剂加入筛选培养基和生根培养基中，成功进行玉米遗传转化，转化效率达到4.4％，转化效率和以草甘膦为筛选剂的转化效率相当，是一种安全高效的玉米转化筛选体系。

【技术实现步骤摘要】

(一)本专利技术属于生物工程，具体涉及一种利用细胞色素p450基因n-z1为筛选标记、啶嘧磺隆为筛选剂的玉米遗传转化方法。

技术介绍

0、(二)
技术介绍

1、玉米(zea mays l.)是一种重要的粮食作物、饲料作物和经济作物，是世界上很多地区的主要食物来源。从近几年玉米行业发展趋势来看，2016-2030年中国玉米产量的增长速度会有所下降，而玉米总消费量的增长速度将会明显超出产量的增长速度，国内供需缺口将会进一步扩大。若在保持种植面积不变的情况下，玉米生产方式的不断优化升级才能应对玉米供需缺口不断扩大的趋势。近100年来，玉米育种工作以自然种的杂交选育为主，虽然获得了一些优质的玉米品种，但是其育种工作量大、周期长、育种效率低。同时，种质资源匮乏、部分材料间杂交不亲和、生物间的生殖隔离等因素的存在，造成当前玉米品种同质化严重，影响了当代玉米育种工作的发展。以分子遗传学为基础的现代生物技术的发展与应用，尤其是转基因技术的应用，成功克服了远缘杂交不亲和的困难，将优良的基因导入到受体物种中，实现了育种性状的定向改变，有效地打破了物种间生殖隔离的障碍本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种利用P450基因N-Z1为筛选标记、啶嘧磺隆为筛选剂的玉米遗传转化方法，其特征在于，所述方法为：将含有P450基因N-Z1的转化载体转化农杆菌，再用农杆菌菌液侵染玉米幼胚，以啶嘧磺隆为筛选剂，筛选阳性转化体。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述P450基因N-Z1核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，含有P450基因N-Z1转化载体按如下方法构建：利用限制性内切酶Xho I将原始pCambia1300载体的hygromycin基因去除，转入表达N-Z1蛋白表达框和表达G10 EPSPS蛋白表达框，构建转化...

【技术特征摘要】

1.一种利用p450基因n-z1为筛选标记、啶嘧磺隆为筛选剂的玉米遗传转化方法，其特征在于，所述方法为：将含有p450基因n-z1的转化载体转化农杆菌，再用农杆菌菌液侵染玉米幼胚，以啶嘧磺隆为筛选剂，筛选阳性转化体。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述p450基因n-z1核苷酸序列如seq idno.1所示。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，含有p450基因n-z1转化载体按如下方法构建：利用限制性内切酶xho i将原始pcambia1300载体的hygromycin基因去除，转入表达n-z1蛋白表达框和表达g10 epsps蛋白表达框，构建转化载体png。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，表达n-z1蛋白表达框是将来源于水稻的actin1启动子、n-z1基因和终止子功能性连接，人工合成pactin1-n-z1-t35s片段；所述actin1启动子核苷酸序列如seq id no.2所示；所述终止子核苷酸序列如seq id no.3所示。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，表达g10 epsps蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：于小星，林海燕，赵宇，沈志成，
申请(专利权)人：浙江大学中原研究院，
类型：发明
国别省市：