甲醇脱氢酶突变体及其应用制造技术

本发明专利技术属于基因工程和酶工程技术领域，尤其是涉及一种甲醇脱氢酶突变体及其应用。甲醇脱氢酶突变体是以氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的甲醇脱氢酶为亲本，将亲本第40～47位和/或第68～73位突变和/或第184～185位突变。与现有技术相比，本发明专利技术所获得的不同辅酶依赖型的甲醇脱氢酶突变体，其能够以NADP<supgt;+</supgt;和/或NAD<supgt;+</supgt;为辅酶，高效催化甲醇氧化为甲醛。本发明专利技术丰富了甲醇代谢型工程菌构建的元件库，为多种高附加值产物合成菌株的构建提供备选“工具”，对于拓宽甲醇代谢型工程菌产物多样性具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程和酶工程，尤其是涉及一种甲醇脱氢酶突变体及其应用。

技术介绍

1、甲醇作为一种低碳原料，来源丰富、成本低廉，构建人工合成的甲基代谢模式是近年来合成生物学领域兴起的拓宽生物制造原料来源的一个新兴方向。nad+-依赖型甲醇脱氢酶是甲醇氧化为甲醛的首选催化元件，因为反应过程中生成的nadh可作为宿主菌合成代谢的还原力，同时实现nad+的再生，且该反应在有氧和无氧条件下均可进行。已有报道利用nad+-依赖型甲醇脱氢酶作为第一个催化元件成功构建甲基代谢型的c.glutamicum，e.coli等(guo et al.2022,bioresources and bioprocessing,9:62；gan etal.2023engineering microbiology,3:100081)。

2、nadh和nadph是细胞内两种重要的还原力，对于部分还原性产物的生成，nadph的含量至关重要，比如合成1mol赖氨酸需要4mol nadph。所以在合成生物学中，还原力nadph的生成往往是影响产物产量的重要因素之一。在以nad+-依赖本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种甲醇脱氢酶突变体，其特征在于，所述突变体选择如下的(a)～(g)中的任一种：

2.编码权利要求1所述甲醇脱氢酶突变体的基因。

3.编码权利要求2所述基因的重组载体。

4.根据权利要求3所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体为pET-21a(+)质粒。

5.表达权利要求1所述甲醇脱氢酶突变体，或携带权利要求2所述重组质粒的重组表达转化体。

6.根据权利要求5所述的重组表达转化体，其特征在于，制备重组表达转化体的宿主细胞为大肠杆菌。

7.甲醇脱氢酶突变体催化剂，其特征在于，所述甲醇脱氢酶突变体催化剂是以下形式中...

【技术特征摘要】

1.一种甲醇脱氢酶突变体，其特征在于，所述突变体选择如下的(a)～(g)中的任一种：

2.编码权利要求1所述甲醇脱氢酶突变体的基因。

3.编码权利要求2所述基因的重组载体。

4.根据权利要求3所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体为pet-21a(+)质粒。

5.表达权利要求1所述甲醇脱氢酶突变体，或携带权利要求2所述重组质粒的重组表达转化体。

6.根据权利要求5所述的重组表达转化体，其特征在于，制备重组表达转化体的宿主细胞为大肠杆菌。

7.甲醇脱氢酶突变体催化剂，其特征在于，所述甲醇脱氢酶突变体催化剂是以下形式中的任意一种：

【专利技术属性】
技术研发人员：孔旭东，马宝娣，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：