【技术实现步骤摘要】
本申请属于生物检测，尤其涉及一种用于检测b族链球菌的引物和探针及其试剂盒与检测方法。
技术介绍
1、b族链球菌(group b streptococcus，gbs)又名无乳链球菌。20世纪60年代以来，gbs造成成人和新生儿感染的报告越来越多，侵袭性gbs疾病的发病率持续增加，gbs已经成为感染成人和新生儿的一种重要病原菌。
2、目前，国内对gbs的产前检测主要有细菌培养法、免疫学方法以及分子生物学方法。细菌培养法是gbs实验室诊断的常规方法，是检测gbs的金标准，具体过程为：围产期孕妇阴道/直肠拭子筛查gbs的方法主要为阴道/直肠拭子经链球菌增菌肉汤增菌18～24小时后转种血琼脂平板培养，然后挑选可疑菌落进行生化鉴定或质谱鉴定，但是细菌培养法存在耗时长、灵敏度低、影响因素多等缺点。免疫学方法有乳胶凝集法和胶体金免疫层析法，然而，该类方法存在敏感度不足的问题，多数试剂达不到美国cdc指南推荐的90％敏感性阈值。并且，有研究显示假豕链球菌可与gbs抗血清发生交叉反应，导致假阳性。
技术实现思路
1、本申请的目的在于提供一种用于检测b族链球菌的引物和探针及其试剂盒与检测方法，旨在解决现有b族链球菌检测的特异性和灵敏度低，导致检测效果不理想的技术问题。
2、为实现上述申请目的，本申请采用的技术方案如下：
3、第一方面，本申请提供一种用于检测b族链球菌的引物和探针，该引物和探针包括：
4、第一上游引物cfb-f，核苷酸序列如seq id no
5、第一下游引物cfb-r，核苷酸序列如seq id no.2所示；
6、第一探针cfb-p，核苷酸序列如seq id no.3所示；
7、第二上游引物groel-f，核苷酸序列如seq id no.4所示；
8、第二下游引物groel-r，核苷酸序列如seq id no.5所示；
9、第二探针groel-p，核苷酸序列如seq id no.6所示。
10、第二方面，本申请提供如上文所述的引物和探针在制备用于检测b族链球菌的产品中的应用。
11、第三方面，本申请提供一种用于检测b族链球菌的试剂盒，该试剂盒含有本申请引物和探针。
12、第四方面，本申请提供一种非诊断目的的b族链球菌的检测方法，该检测方法包括以下步骤：
13、提取样品的dna；
14、以该dna为模板，使用本申请第一方面的引物和探针或本申请第二方面的试剂盒进行荧光定量pcr扩增；
15、根据荧光定量pcr扩增的结果分析该样品是否含有b族链球菌。
16、本申请第一方面提供的用于检测b族链球菌的引物和探针，包括针对位于保守序列中cfb基因设计的第一上游引物、第一下游引物以及第一探针，以及针对作为管家基因groel设计的第二上游引物、第二下游引物以及第二探针，用于检测样本中的b族链球菌，具有快速准确、特异性好、灵敏度高的特点，且检测限达到500copies/ml。
17、本申请第二方面提供的应用，是基于该探针和引物对b族链球菌的检测具有快速准确、特异性好、灵敏度高的特性，由此，该探针和引物可用于快速鉴定检测b族链球菌的产品中，能够保证检测结果的准确性，避免漏检的出现，对于b族链球菌的普查和预防具有重要的意义。
18、本专利技术第三方面提供的用于检测b族链球菌的试剂盒，由于含有上文所述的引物和探针，该引物和探针对b族链球菌的检测准确度高、特异性强、灵敏高，可以克服现有b族链球菌诊断中存在的局限性，用上述引物和探针进行双重荧光pcr可以实现对b族链球菌灵敏、特异地检测，高效判断是否存在b族链球菌感染，以供临床研究使用，可用于b族链球菌的普查和预防，为临床医生快速准确掌握患者病情，及时采取更具个体化更精准的治疗方案提供科学依据。
19、本申请第四方面提供的非诊断目的的b族链球菌的检测方法，利用用于检测b族链球菌的试剂盒，采用双重荧光pcr的方法对b族链球菌进行检测。由于试剂盒含有本申请第一方面提供的引物和探针，保证该方法具有灵敏度高、准确度高、特异性强、成本较低的特性，有利于进行广泛使用。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种用于检测B族链球菌的引物和探针，其特征在于，所述引物和探针包括：
2.如权利要求1所述的用于检测B族链球菌的引物和探针，其特征在于，所述第一探针的上游和下游分别结合有第一荧光基团和第一淬灭基团，所述第二探针的上游和下游分别结合有第二荧光基团和第二淬灭基团，且所述第一荧光基团与所述第二荧光基团不同，所述第一淬灭基团与所述第二淬灭基团不同。
3.如权利要求2所述的用于检测B族链球菌的引物和探针，其特征在于，所述第一荧光基团和所述第二荧光基团分别独立地选自AMCA、Pacific Blue、Atto 425、BODIPY FL、FAM、Alexa Fluor 488、TET、JOE、Yakima Yellow、VIC、HEX、Quasar 570、Cy3、NED、TAMRA、ROX、Aqua Phluor593、Texas Red、Atto 590、Cy5、Quasar 670以及Cy5.5中的任一种。
4.如权利要求2所述的用于检测B族链球菌的引物和探针，其特征在于，所述第一淬灭基团和所述第二淬灭基团分别独立地选自BHQ1、BHQ2、BHQ
5.如权利要求1～4任一项所述的引物和探针在制备用于检测B族链球菌的产品中的应用。
6.一种用于检测B族链球菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求1～4任一项所述的引物和探针。
7.如权利要求6所述的用于检测B族链球菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR反应试剂、无酶水和模板DNA。
8.如权利要求7所述的用于检测B族链球菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的反应体系包括：
9.如权利要求6～8任一项所述的用于检测B族链球菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的扩增程序如下：
10.一种非诊断目的的B族链球菌的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种用于检测b族链球菌的引物和探针，其特征在于，所述引物和探针包括：
2.如权利要求1所述的用于检测b族链球菌的引物和探针，其特征在于，所述第一探针的上游和下游分别结合有第一荧光基团和第一淬灭基团，所述第二探针的上游和下游分别结合有第二荧光基团和第二淬灭基团，且所述第一荧光基团与所述第二荧光基团不同，所述第一淬灭基团与所述第二淬灭基团不同。
3.如权利要求2所述的用于检测b族链球菌的引物和探针，其特征在于，所述第一荧光基团和所述第二荧光基团分别独立地选自amca、pacific blue、atto 425、bodipy fl、fam、alexa fluor 488、tet、joe、yakima yellow、vic、hex、quasar 570、cy3、ned、tamra、rox、aqua phluor593、texas red、atto 590、cy5、quasar 670以及cy5.5中的任一种。
...【专利技术属性】
技术研发人员：周杰，杨书才，张莉，冯天元，张扬，张鲍虎，刘慧，徐康立，周雪清，
申请(专利权)人：深圳市坪山区人民医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。