【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及外泌体提取分离技术，具体涉及一种egf间充质干细胞外泌体的纯化方法及其装置。
技术介绍
1、公开号为cn114134109b的中国专利技术专利中，公开了egf间充质干细胞外泌体的纯化方法，通过将含有egf间充质干细胞外泌体的细胞培养液离心、切向流超滤系统过滤浓缩、阴离子交换层析柱分离纯化、肝素亲和层析柱分离纯化得到高纯度的egf间充质干细胞外泌体；
2、使用层析柱分离纯化时需要保持一定的上样速度和洗脱流速，维持一定的上样速度和洗脱流速能够保证所需物质在层析柱洗脱过程中，集中出现在收集的试管中，如果上样速度和洗脱流速频繁的变化或出现较大差异，易导致一些杂质相与所需物质分离时的速度差异较小，影响外泌体的纯度；
3、目前，该纯化的过程主要依赖人工进行，尤其是实验时进行小批量的生产或实验的过程中，层析柱的使用过程往往都是通过人工手动操作，使用人员需要一遍保持层析柱顶部的上样和送入一定压力的气体，洗脱时，层析柱的顶部通过密封头密封，密封头通过导管联通上样的液体，通过另一导管连通充气球阀，充气球阀需要通过人工手动不断按压，使用人员可以直观看到并判断液体的从出口流出的大致流速，从而通过充气球阀的挤压力度和频率对流速进行调节，使用人员还需要操作试管的更换，以在试管接满时更换下一个空试管，此时对于使用人员来说，单手的操作往往难以完成，一般是关闭层析柱下方的阀门，停止向层析柱内送气，完成试管的更换后，再重新打开阀门和进行送气，这导致了上样速度和洗脱流速的变化，从而影响外泌体的纯度。
1、本专利技术的目的是提供一种egf间充质干细胞外泌体的纯化方法及其装置，以解决现有技术中的上述不足之处。
2、为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种外泌体的纯化装置，包括层析柱和用于固定层析柱的支撑装置，层析柱的顶部和底部分别开设有第一开口和第二开口，第二开口上设置有第一阀门，支撑装置包括支撑平台和支撑架，支撑平台顶部设置有试管架，外泌体的纯化装置还包括：
3、容器，所述容器顶部和底部分别开设有第三开口和第四开口，所述第三开口的内表面与第二开口外表面能够完全配合并密封，所述容器顶部设置有出气管，所述出气管与容器内部空间相连通，所述出气管上设置有第二阀门，第四开口上设置有第三阀门；
4、开关装置，开关装置与第二阀门和第三阀门均相连接，所述开关装置用于控制第二阀门和第三阀门的打开或关闭，且当第二阀门处于打开状态时第三阀门处于关闭状态或第二阀门处于关闭状态时第三阀门处于开启状态；
5、固定机构，其用于固定夹持容器，且固定机构与支撑架活动连接，所述固定机构能够沿支撑架表面移动。
6、进一步地，所述开关装置包括第一齿轮和第二齿轮，第一阀门与第二阀门位于容器的同一侧且位于同一竖直平面，第一齿轮和第二齿轮一侧分别固定安装有第一转杆和第二转杆，第一转杆和第二转杆分别与第二阀门和第三阀门的阀杆一端固定连接。
7、进一步地，所述开关装置还包括齿条，所述齿条一侧滑动连接有第一轨道，所述第一轨道沿竖直方向设置，且齿条一侧与第一齿轮和第二齿轮均啮合连接，齿条能够在竖直方向进行移动带动第一齿轮和第二齿轮转动。
8、进一步地，所述固定机构包括支架，所述支架一侧固定安装有夹具，所述夹具用于夹紧容器的外表面，所述支架的顶部和底部均固定连接有第一滑套，所述第一滑套与支撑架表面滑动连接，所述第一滑套上设置有第一限位件，所述第一限位件用于限制第一滑台在支撑架表面滑动，所述第一轨道固定安装在支架一侧，所述第一转杆和第二转杆均贯穿支架并分别与支架内壁转动连接。
9、进一步地，所述支撑平台顶部安装有切换机构，所述切换机构包括第一平台和第二平台，所述第一平台顶部固定安装有至少两个试管架，所述第一平台底部与第二平台顶部滑动连接，第一平台能够沿水平方向移动，第二平台能够沿竖直方向移动，所述切换机构可与齿条端相连接。
10、进一步地，所述支撑平台顶部固定连接有四个导杆，所述导杆沿竖直方向设置，四个导杆表面与第二平台内壁滑动连接，所述导杆表面套设有弹簧，所述导杆顶部固定连接有限位环，所述第一平台顶部的一侧固定安装有把手。
11、进一步地，所述齿条一端固定连接有手动推杆。
12、进一步地，所述齿条底部滑动连接有套杆，套杆一端与第二平台一侧固定连接，套杆一侧设置有第二限位件，第二限位件用于限制齿条在套杆内壁的滑动。
13、进一步地，所述第二限位件为第二锁紧螺栓，所述第二锁紧螺栓一端贯穿套杆并与套杆内壁螺纹连接。
14、一种egf间充质干细胞外泌体的纯化方法，具体包括以下步骤：
15、s101、将含有egf间充质干细胞外泌体的细胞培养液离心处理，得到第一上清液。
16、s102、将第一上清液用切向流超滤系统过滤浓缩，得到第一浓缩液；
17、s103、将第一浓缩液置入阴离子交换层析柱中，并使用权利要求1-9任一所述的纯化装置中进行分离纯化，收集第一洗脱峰溶液；
18、s104、将第一洗脱峰溶液用肝素亲和层析柱分离纯化，收集第二洗脱峰溶液，得到egf间充质干细胞外泌体。
19、与现有技术相比，本专利技术提供的一种egf间充质干细胞外泌体的纯化方法及其装置，具有以下有益效果：
20、1、该egf间充质干细胞外泌体的纯化方法及其装置，通过设置容器，在第四开口关闭时，第三开口的打开能够使层析柱内部在正压环境下，洗脱峰溶液能够继续以一定流速从层析柱的第二开口流出，避免在更换试管的过程中需要关闭第二开口引起的前后流速变化，导致洗脱峰溶液收集所需物质出现滞后现象，从而与杂质相混合，影响最终egf间充质干细胞外泌体的纯度。
21、2、该egf间充质干细胞外泌体的纯化方法及其装置，第三开口和第四开口的打开和关闭状态的切换给试管的更换提供了工作时间，避免试管在更换时，液体的持续流动导致液体在下落至试管顶部时溅射到外部，通过该装置，使用人员可以便捷的完成层析柱操作，即使单手操作也能独立完成，且效率更高，降低了直接手动操作的误差及不稳定性。
22、3、该egf间充质干细胞外泌体的纯化方法及其装置，当需要更换试管时，使用人员可以单手按压把手，使第一平台和第二平台同步向下移动，当第二平台向下移动时，位于第四开口正下方的试管逐渐向下移动，试管的顶部脱离第四开口，然后使用人员水平移动把手，使第一平台水平移动，使相邻与该试管的另一个试管移动至第四开口的正下方，然后缓慢松开把手，弹簧的复位使得第二平台上升，并使第四开口进入新的空试管中，实现试管的便捷更换的同时，使试管能够套设在第四开口表面，在收集第四开口流下的液体时，避免液体的泄漏。
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1.一种外泌体的纯化装置，包括层析柱(1)和用于固定层析柱(1)的支撑装置(2)，层析柱(1)的顶部和底部分别开设有第一开口(11)和第二开口(12)，第二开口(12)上设置有第一阀门(13)，支撑装置(2)包括支撑平台(21)和支撑架(22)，支撑平台(21)顶部设置有试管架(7)，其特征在于，所述外泌体的纯化装置还包括：
2.根据权利要求1所述的一种外泌体的纯化装置，其特征在于，所述开关装置(4)包括第一齿轮(41)和第二齿轮(42)，第一阀门(13)与第二阀门(34)位于容器(3)的同一侧且位于同一竖直平面，第一齿轮(41)和第二齿轮(42)一侧分别固定安装有第一转杆(43)和第二转杆(44)，第一转杆(43)和第二转杆(44)分别与第二阀门(34)和第三阀门(35)的阀杆一端固定连接。
3.根据权利要求2所述的一种外泌体的纯化装置，其特征在于，所述开关装置(4)还包括齿条(45)，所述齿条(45)一侧滑动连接有第一轨道(46)，所述第一轨道(46)沿竖直方向设置，且齿条(45)一侧与第一齿轮(41)和第二齿轮(42)均啮合连接，齿条(45)能够在竖
4.根据权利要求3所述的一种外泌体的纯化装置，其特征在于，所述固定机构(5)包括支架(51)，所述支架(51)一侧固定安装有夹具(52)，所述夹具(52)用于夹紧容器(3)的外表面，所述支架(51)的顶部和底部均固定连接有第一滑套(53)，所述第一滑套(53)与支撑架(22)表面滑动连接，所述第一滑套(53)上设置有第一限位件(54)，所述第一限位件(54)用于限制第一滑台在支撑架(22)表面滑动，所述第一轨道(46)固定安装在支架(51)一侧，所述第一转杆(43)和第二转杆(44)均贯穿支架(51)并分别与支架(51)内壁转动连接。
5.根据权利要求3所述的一种外泌体的纯化装置，其特征在于，所述支撑平台(21)顶部安装有切换机构(6)，所述切换机构(6)包括第一平台(61)和第二平台(62)，所述第一平台(61)顶部固定安装有至少两个试管架(7)，所述第一平台(61)底部与第二平台(62)顶部滑动连接，第一平台(61)能够沿水平方向移动，第二平台(62)能够沿竖直方向移动，所述切换机构(6)可与齿条(45)端相连接。
6.根据权利要求5所述的一种外泌体的纯化装置，其特征在于，所述支撑平台(21)顶部固定连接有四个导杆(63)，所述导杆(63)沿竖直方向设置，四个导杆(63)表面与第二平台(62)内壁滑动连接，所述导杆(63)表面套设有弹簧(64)，所述导杆(63)顶部固定连接有限位环，所述第一平台(61)顶部的一侧固定安装有把手(65)。
7.根据权利要求3所述的一种外泌体的纯化装置，其特征在于，所述齿条(45)一端固定连接有手动推杆(8)。
8.根据权利要求5所述的一种外泌体的纯化装置，其特征在于，所述齿条(45)底部滑动连接有套杆(9)，套杆(9)一端与第二平台(62)一侧固定连接，套杆(9)一侧设置有第二限位件(10)，第二限位件(10)用于限制齿条(45)在套杆(9)内壁的滑动。
9.根据权利要求8所述的一种外泌体的纯化装置，其特征在于，所述第二限位件(10)为第二锁紧螺栓，所述第二锁紧螺栓一端贯穿套杆(9)并与套杆(9)内壁螺纹连接。
10.一种EGF间充质干细胞外泌体的纯化方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种外泌体的纯化装置，包括层析柱(1)和用于固定层析柱(1)的支撑装置(2)，层析柱(1)的顶部和底部分别开设有第一开口(11)和第二开口(12)，第二开口(12)上设置有第一阀门(13)，支撑装置(2)包括支撑平台(21)和支撑架(22)，支撑平台(21)顶部设置有试管架(7)，其特征在于，所述外泌体的纯化装置还包括：
2.根据权利要求1所述的一种外泌体的纯化装置，其特征在于，所述开关装置(4)包括第一齿轮(41)和第二齿轮(42)，第一阀门(13)与第二阀门(34)位于容器(3)的同一侧且位于同一竖直平面，第一齿轮(41)和第二齿轮(42)一侧分别固定安装有第一转杆(43)和第二转杆(44)，第一转杆(43)和第二转杆(44)分别与第二阀门(34)和第三阀门(35)的阀杆一端固定连接。
3.根据权利要求2所述的一种外泌体的纯化装置，其特征在于，所述开关装置(4)还包括齿条(45)，所述齿条(45)一侧滑动连接有第一轨道(46)，所述第一轨道(46)沿竖直方向设置，且齿条(45)一侧与第一齿轮(41)和第二齿轮(42)均啮合连接，齿条(45)能够在竖直方向进行移动带动第一齿轮(41)和第二齿轮(42)转动。
4.根据权利要求3所述的一种外泌体的纯化装置，其特征在于，所述固定机构(5)包括支架(51)，所述支架(51)一侧固定安装有夹具(52)，所述夹具(52)用于夹紧容器(3)的外表面，所述支架(51)的顶部和底部均固定连接有第一滑套(53)，所述第一滑套(53)与支撑架(22)表面滑动连接，所述第一滑套(53)上设置有第一限位件(54)，所述第一限位件(54)用于限制第一滑台在支撑架(22)表面滑动，所述第一轨道(46)固定安装...
【专利技术属性】
技术研发人员：郎丽敏，胡奕奕，刘淑芳，段承钰，任泰林，李思进，武志芳，
申请(专利权)人：山西医科大学，
类型：发明
国别省市：
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