【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，尤其涉及一种靶向修饰黑磷量子点纳米粒子及其制备方法与应用。
技术介绍
1、渔用多聚物纳米疫苗佐剂海藻酸钠微粒（alginate microparticles, amps）是一种从褐藻中提取的线性多糖，由于amps作为药物传递基质的效率，已在生物制药行业中的有所应用。壳聚糖（chitosan），价格低廉、具有生物相容性和可生物降解性，已广泛应用于生物技术和生物医学领域，作为免疫刺激剂和生物补救剂可以预防尼罗罗非鱼感染嗜水气单胞菌。plga具备生物降解性，延长药物循环、增强稳定性，可制备成亚微米大小，有助于逃避网状内皮系统；没有抗原的情况下，plga可以通过刺激细胞因子、免疫细胞和共刺激分子来激活树突状细胞，使用plga包裹的无乳链球菌表面蛋白sip的纳米疫苗sip@plga在尼罗罗非鱼抗无乳链球菌感染的研究中有较好的保护作用。碳纳米管本身是相对惰性、无毒、非免疫原性的，理想的化学和物理特性，被用作疫苗开发的佐剂，主要作为潜在的疫苗传递载体进行开发。
2、聚合物纳米颗粒（nanoparticals, nps）或微型纳米颗粒（microparticals, mps）可以捕获或封装疫苗抗原并将其传递到靶点，其生物降解速度较慢，荷载的抗原在动物体内的释放速度缓慢，增加药物循环。天然聚合物纳米或微米颗粒（如壳聚糖、海藻酸盐、葡聚糖和菊粉）比合成聚合物（如聚乙醇酸（plga）、聚乳酸（pla）具有更好的生物相容性，聚合物纳米颗粒或微型纳米颗粒因其生物相容性、无毒、生物降解性和易于修饰成所需的形状和大小而作为疫苗
3、为了达到所需的行动位点，nps必须克服各种生物障碍，nps应与机体的驻留细胞和循环细胞以及粘膜屏障相互作用，以实现渗透。同时，其诱导的免疫反应受到颗粒降解和释放靶抗原的速度的影响，但是也会因为代谢缓慢在机体内累积、聚集进而堵塞机体循环等。壳聚糖、plga、脂质体、碳纳米管等有机纳米颗粒已被广泛用于制备纳米疫苗，这些系统具有低毒性、良好的生物分布和降解性等优点。然而，它们对抗原在化学和热上具有较差的稳定性，通常由于体内的ph值和温度而发生结构变化，它们的生物相互作用取决于颗粒的大小、形状和表面化学性质，合成具有明确形状和大小的纳米颗粒仍然是一个重要的挑战。碳纳米管因其结构特性在渔用疫苗特别是浸泡免疫疫苗的研究中具有突出的优势，但是其生物降解性和安全排泄仍然需要进一步探究。
4、因此，开发和利用颗粒小、毒性低或无毒、生物相容性好、可生物降解和可被安全排泄的新型纳米材料，作为疫苗抗原递送载体和佐剂，以减少疫苗剂量，减缓副作用，允许组织、细胞特异性靶向，增加抗原递送效率和免疫保护，对渔用疫苗的研制和应用具有重要意义。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种靶向修饰黑磷量子点纳米粒子及其制备方法与应用。
2、为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：
3、第一方面，本专利技术提供了一种靶向修饰黑磷量子点纳米粒子，其结构式如下：
4、，其中，ag为抗原接枝基团，bpqd-p为黑磷量子点。
5、第二方面，本专利技术提供了一种如第一方面所述靶向修饰黑磷量子点纳米粒子的制备方法，包括如下步骤：
6、s1、将黑磷量子点、叠氮苯甲酸和有机溶剂混合后进行搅拌反应，经离心、洗涤、干燥得到羧基化修饰的黑磷量子点；
7、s2、将抗原、催化剂、所述羧基化修饰的黑磷量子点及水混合后进行搅拌反应，经干燥得到所述靶向修饰黑磷量子点纳米粒子。
8、作为本专利技术的优选实施方式，步骤s1中有机溶剂为己烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、三氯甲烷、二氯甲烷中的至少一种。
9、作为本专利技术的优选实施方式，步骤s1中叠氮苯甲酸与黑磷量子点的质量比为（3~4）：1。
10、作为本专利技术的优选实施方式，步骤s1中搅拌反应的条件为：保护气氛为惰性气体，搅拌转速为100~600rpm，搅拌时间为36~60h，温度为130~150℃。
11、作为本专利技术的优选实施方式，步骤s2中催化剂与羧基化修饰的黑磷量子点的质量比为（0.1~0.3）：1，抗原与羧基化修饰的黑磷量子点的质量比（0.5~2）：1。
12、作为本专利技术的优选实施方式，步骤s2中搅拌反应的条件为：温度0~5℃，搅拌转速为200~800rpm，时间为36~60h。
13、作为本专利技术的优选实施方式，步骤s2中的抗原包括sip抗原、cps抗原、fbsa抗原、pili抗原、β-h/c抗原、hvga抗原中的至少一种。
14、作为本专利技术的优选实施方式，步骤s2中的催化剂包括n,n-二甲基氨甲基三甲基甲基亚硝胺盐酸盐、1-（3-二甲胺基丙基）-3-乙基碳二亚胺（edci）中的至少一种。
15、作为本专利技术的优选实施方式，步骤s2中的抗原为sip抗原和cps抗原共价结合复合物；所述sip抗原和cps抗原共价结合复合物的制备方法包括如下步骤：将sip抗原、cps抗原、有机溶剂和催化剂混合后进行搅拌反应20~40min，然后加入活化剂，继续搅拌反应36~60h，经透析、冷冻干燥后得到sip抗原和cps抗原共价结合复合物。
16、进一步的，所述搅拌反应的温度为0~5℃，搅拌转速为100~300rpm。
17、进一步的，所述催化剂为4-n,n-二甲基吡啶（dmap），所述活化剂为二环己基碳二亚胺中的至少一种。
18、进一步的，所述sip抗原和cps抗原的质量比为1：1；所述活化剂的添加量为所述sip抗原和cps抗原的总质量的10~30倍；所述催化剂的添加量为所述sip抗原和cps抗原的总质量的1~3倍。
19、第三方面，本专利技术提供的一种如第一方面所述靶向修饰黑磷量子点纳米粒子在制备纳米疫苗中的应用。
20、第四方面，本专利技术提供了一种自组装纳米疫苗，包括如第一方面所述的靶向修饰黑磷量子点纳米粒子及仿生囊泡，所述靶向修饰黑磷量子点纳米粒子被包裹于所述仿生囊泡的内部。
21、作为本专利技术的优选实施方式，所述仿生囊泡为具有双层膜，所述仿生囊泡为磷脂酰乙醇胺囊泡或甘露糖共价接枝磷脂酰乙醇胺囊泡。
22、进一步的，所述甘露糖共价接枝磷脂酰乙醇胺囊泡中甘露糖共价接枝磷脂酰乙醇胺的制备方法包括如下步骤：将甘露糖、催化剂、有机溶剂和磷脂酰乙醇胺混合后进行搅拌反应，经透析冷冻干燥后获得甘露糖共价接枝磷脂酰乙醇胺。
23、更进一步的，所述甘露糖与磷脂酰乙醇胺的摩尔比为（0.5~5）：100；所述催化剂的添加量为甘露糖质量的1~5%。
24、更进一步的，所述催化剂包括硼氢化钠、三乙酰氧基硼化氢钠、氰基硼氢化钠、醋酸硼氢化钠中的至少一种。
25、第五方面，本专利技术提供的一种如第四方面所述纳米疫苗在制备免疫药物中的应用。
26、所述免疫药物为鱼类抗无乳链球菌的免疫药物，所述鱼类为淡水鱼，所述淡水本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种靶向修饰黑磷量子点纳米粒子，其特征在于，其结构式如下：
2.一种如权利要求1所述靶向修饰黑磷量子点纳米粒子的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.如权利要求2所述靶向修饰黑磷量子点纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤S1中黑磷量子点与叠氮苯甲酸的质量比为（3~4）：1。
4.如权利要求2所述靶向修饰黑磷量子点纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤S2中的抗原包括Sip抗原、CPS抗原、FbsA抗原、Pili抗原、β-H/C抗原、HvgA抗原中的至少一种。
5.如权利要求2所述靶向修饰黑磷量子点纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤S2中的抗原与羧基化修饰的黑磷量子点的质量比（0.5~2）：1。
6.一种如权利要求1所述靶向修饰黑磷量子点纳米粒子在制备纳米疫苗中的应用。
7.一种自组装纳米疫苗，其特征在于，包括如权利要求1所述的靶向修饰黑磷量子点纳米粒子及仿生囊泡，所述靶向修饰黑磷量子点纳米粒子容置于所述仿生囊泡的内部。
8.如权利要求7所述自组装纳米疫苗，其特征在于，所述仿生囊泡为具有双层
9.如权利要求8所述自组装纳米疫苗，其特征在于，所述甘露糖共价接枝磷脂酰乙醇胺囊泡中甘露糖共价接枝磷脂酰乙醇胺的制备方法包括如下步骤：将甘露糖、催化剂、有机溶剂和磷脂酰乙醇胺混合后进行搅拌反应，经透析冷冻干燥后获得甘露糖共价接枝磷脂酰乙醇胺。
10.一种如权利要求7所述的自组装纳米疫苗在制备免疫药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种靶向修饰黑磷量子点纳米粒子，其特征在于，其结构式如下：
2.一种如权利要求1所述靶向修饰黑磷量子点纳米粒子的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.如权利要求2所述靶向修饰黑磷量子点纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤s1中黑磷量子点与叠氮苯甲酸的质量比为（3~4）：1。
4.如权利要求2所述靶向修饰黑磷量子点纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤s2中的抗原包括sip抗原、cps抗原、fbsa抗原、pili抗原、β-h/c抗原、hvga抗原中的至少一种。
5.如权利要求2所述靶向修饰黑磷量子点纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤s2中的抗原与羧基化修饰的黑磷量子点的质量比（0.5~2）：1。
6.一种如权利要求1所述靶向修...
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