一种基于链置换反应的生物传感器及其在围绝经期惊恐障碍早期诊断中的应用制造技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，公开了一种基于链置换反应的生物传感器及其在围绝经期惊恐障碍早期诊断中的应用，该生物传感器包括发夹H1、发夹H2和单链RNA报告分子；发夹H1和发夹H2均具有茎环结构，发夹H1包被着10‑23DNAzyme，发夹H1的DNA序列如SEQ ID NO.1所示，发夹H2的DNA序列如SEQ ID NO.2所示。本发明专利技术构建了一种基于Toehold介导DNA链置换反应的核酸检测技术，在恒温条件下可实现检测样品中核酸的检测，可用于检测围绝经期不同生理病理状态患者所采集的血样中的特定micRNA分子，方法简便、条件宽松、检测结果灵敏度高、速度快，对于疾病的早期诊断及临床干预机制研究具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程，特别涉及一种基于链置换反应的生物传感器及其在围绝经期惊恐障碍早期诊断中的应用。

技术介绍

1、随着基因组学和分子病理学的发展,核酸被证实可作为一类有效的生物标志物应用于疾病的分子诊断。传统的核酸检测方法主要有southern杂交、northern杂交、基因芯片技术、实时荧光定量pcr(qt-qpcr)和高通量测序等。然而northern杂交技术耗时长、操作繁琐、样品需要量大且灵敏度低；基因芯片和高通量技术虽然有高通量的优势,但是样本需要预处理、灵敏度低且成本高；qpcr技术具有较高的灵敏度和实用性,但对引物的设计要求高且需要特殊的检测仪器。因此，开发一种用于核酸检测的灵敏度高、简单快速、检测限低的生物传感器，且能通过可视化观察获得与疾病发生发展相关的遗传信息，成为临床医学分子诊断的迫切需要。

2、dna分子具有高特异性和可预测的watson-crick碱基配，可通过恒温自组装动力学被用于构建不同的dna纳米结构与纳米器件。这种dna恒温自组装的基础是toehold介导的dna链替换反应(toehold-mediated 本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于链置换反应的生物传感器，其特征在于：所述生物传感器包括发夹H1、发夹H2和单链RNA报告分子；

2.根据权利要求1所述生物传感器，其特征在于：所述单链RNA报告分子的5’端标记荧光报告基团FAM，3’端标记荧光淬灭基团BHQ1，所述单链RNA报告分子的序列为5’FAM-CCAATArGrUTTACG-3’BHQ1，其中，rG为鸟嘌呤核苷酸，rU为尿嘧啶核苷酸。

3.根据权利要求1所述生物传感器，其特征在于：所述单链RNA报告分子的5’端标记荧光报告基团FAM，3’端标记生物素Biotin，所述单链RNA报告分子的序列为5’FAM-CCAATArGrUT...

【技术特征摘要】

1.一种基于链置换反应的生物传感器，其特征在于：所述生物传感器包括发夹h1、发夹h2和单链rna报告分子；

2.根据权利要求1所述生物传感器，其特征在于：所述单链rna报告分子的5’端标记荧光报告基团fam，3’端标记荧光淬灭基团bhq1，所述单链rna报告分子的序列为5’fam-ccaatargruttacg-3’bhq1，其中，rg为鸟嘌呤核苷酸，ru为尿嘧啶核苷酸。

3.根据权利要求1所述生物传感器，其特征在于：所述单链rna报告分子的5’端标记荧光报告基团fam，3’端标记生物素biotin，所述单链rna报告分子的序列为5’fam-ccaatargruttacg-3’biotin，其中，rg为鸟嘌呤核苷酸，ru为尿嘧啶核苷酸。

4.根据权利要求1所述生物传感器，其特征在于：所述发夹h1和h2的制备方法为：所述发夹h1和h2由化学合成并hplc纯化后，溶解于退火缓冲液制备成溶液，并置于95℃水浴箱中变性5分钟，然后以每秒下降0.1℃的速度将温度逐步降至25℃，形成稳定的催化型发夹结构。

5.根据权利要求1所述生物传感器，其特征在于：所述生物传感器还包括缓冲液，所述缓冲液为1×tae/mg2+缓冲液，包括：40mm tris-hcl，15mm mgcl2，20mm冰醋酸，20mm edta，ph 8.0，在1×tae/mg2+缓冲液中加入所述发夹h1、发夹h2和单链rna报告分子。

6.根据权利要求4所述生物传感器，其特征在于：...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈贵珍，许云祥，黄菊秀，
申请(专利权)人：深圳市宝安区中医院，
类型：发明
国别省市：