【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及核酸检测，具体涉及一种草莓白化相关病毒的检测方法及其应用。
技术介绍
1、草莓白化相关病毒(strawberry pallidosis-associated virus,spav)隶属长线形病毒科毛形病毒属，可引起草莓白化病，尤其是与草莓轻型黄边病毒和草莓斑驳病毒复合侵染后，会加重病毒病症状。spav具有双节段正单链rna基因组，其中，rna1和rna2分别长8067nt和7979nt。嫁接和昆虫介体温室白粉虱可传播spav。2017年，国内福建地区首次报道了病毒spav的存在，2018年河南地区草莓中也发现了病毒spav。可见，病毒spav在国内呈现扩张态势，威胁草莓的健康生长。
2、日本学者notomi在2000年提出了环介导等温扩增(loop-mediated isothermalamplification，lamp)技术，具有特异性强、操作简单及扩增高效等优点。基于lamp技术的逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermalamplification，rt-lamp)是在反应体系中加入逆转录酶实现对rna模板的一步扩增。该技术已被广泛应用到其它病毒的检测中，目前，尚未见rt-lamp技术检测spav的报道。病毒spav的检测手段主要为传统的rt-pcr方法、高通量测序以及基于pcr的改进方法。这些方法耗时久、仪器昂贵，通常无法通过裸眼直观判定。因此，开发操作简便、耗时短，且能够裸眼直观判定的检测方法十分必要。
【技术保护点】
1.一种草莓白化相关病毒的检测方法，其特征在于，所述检测方法以草莓白化相关病毒的外壳蛋白编码基因为靶标序列设计引物，利用所述引物进行逆转录环介导等温扩增鉴定草莓白化相关病毒。
2.如权利要求1所述的草莓白化相关病毒的检测方法，其特征在于，所述引物包括SPaV-F3引物、SPaV-B3引物、SPaV-FIP引物、SPaV-BIP引物和SPaV-LB引物，其具体序列如下：
3.如权利要求1所述的草莓白化相关病毒的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
4.如权利要求3所述的草莓白化相关病毒的检测方法，其特征在于，在步骤S3中，所述鉴定采用下述1)或2)所述的方法：
5.如权利要求1所述的草莓白化相关病毒的检测方法，其特征在于，所述逆转录环介导等温扩增采用的反应体系为2.5μL 10×Isothermal Amplification Buffer、6mmol/L Mg2+、1mmol/L dNTPs、1μmol/L SPaV-FIP和SPaV-BIP，0.1μmol/L SPaV-F3和SPaV-B3，0.3μmol/L SPa
6.如权利要求1所述的草莓白化相关病毒的检测方法，其特征在于，所述逆转录环介导等温扩增采用的反应程序为61℃40min，80℃20min。
7.如权利要求1所述的草莓白化相关病毒的检测方法在制备检测草莓白化相关病毒试剂盒中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种草莓白化相关病毒的检测方法，其特征在于，所述检测方法以草莓白化相关病毒的外壳蛋白编码基因为靶标序列设计引物，利用所述引物进行逆转录环介导等温扩增鉴定草莓白化相关病毒。
2.如权利要求1所述的草莓白化相关病毒的检测方法，其特征在于，所述引物包括spav-f3引物、spav-b3引物、spav-fip引物、spav-bip引物和spav-lb引物，其具体序列如下：
3.如权利要求1所述的草莓白化相关病毒的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
4.如权利要求3所述的草莓白化相关病毒的检测方法，其特征在于，在步骤s3中，所述鉴定采用下述1)或2)所述的方法：
5.如权利要求1所述的草莓白化相关病毒的检测方法，其特征在于，所述逆转录环介导等温扩增采用的反应体系为2.5μl 10×isothe...
【专利技术属性】
技术研发人员：韩永超，王涌，曾祥国，肖桂林，
申请(专利权)人：湖北省农业科学院经济作物研究所，
类型：发明
国别省市：
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