一种高产鼠李糖脂的基因工程菌、构建方法及其应用技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，公开了一种高产鼠李糖脂的基因工程菌、构建方法及应用。本发明专利技术提供的提高鼠李糖脂产量的基因工程菌rhlAB‑ΔalgD，通过在恶臭假单胞菌KT2440基因组中敲除algD基因使更多的葡萄糖‑6‑磷酸被重新分配到dDTP‑L‑鼠李糖的支路上，从而使鼠李糖脂的产量提高了16.8％；本发明专利技术提供的提高鼠李糖脂产量的基因工程菌rhlAB‑Δflag，通过在恶臭假单胞菌KT2440基因组中敲除flag基因簇使菌株的能量(ATP)和还原力(NADPH)过剩，从而使鼠李糖脂的产量提高了2倍；本发明专利技术提供的高产鼠李糖脂的基因工程菌rhlAB‑rmlBDAC‑Δflag，在突变株rhlAB‑Δflag的基础上异源过表达来自铜绿假单胞菌PAO1的rmlBDAC基因簇来增加dDTP‑L‑鼠李糖的供应，使得恶臭假单胞菌KT2440中的鼠李糖脂产量进一步提高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物和基因工程，涉及一种高产鼠李糖脂的基因工程菌、构建方法及其应用。

技术介绍

1、鼠李糖脂(rhamnolipids，rl)是铜绿假单胞菌以多种疏水性或亲水性碳源，在好氧条件下发酵生产，结构上主要由一个到两个亲水的鼠李糖元和一条至两条疏水的脂肪酸链拼接而成，在石油开采、环境污染修复、食品、造纸、医药等领域应用潜力大，具有化学表面活性剂所具有的物理化学特性，如去垢、乳化、去乳化、发泡和润湿等作用。与化学表面活性剂相比，鼠李糖脂具有以下优势：环境友好，无毒或低毒，可生物降解，活性高，并且可以在极端环境中保持活性。最重要的是具有环境友好性，易降解，不会对环境造成二次污染，是目前研究最广泛的生物表面活性剂之一。因此鼠李糖脂的特性优良、应用前景广阔。

2、铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa)具有高滴度合成鼠李糖脂的优越能力，但是它是一种条件致病菌，生物安全性较差。为了解决这一问题，被公认为“公认安全”的恶臭假单胞菌引起了研究人员对鼠李糖脂生物合成的关注。

3、恶臭假单胞菌kt2440(pseudomo本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种高产鼠李糖脂的基因工程菌，其特征在于，包括恶臭假单胞菌和导入恶臭假单胞菌满足自我复制的重组质粒；所述恶臭假单胞菌的基因组中敲除了algD基因、flag基因簇；所述重组质粒为以下之一：(1)包含铜绿假单胞菌PA01的rhlAB基因；(2)包含铜绿假单胞菌PA01的rhlAB和rmlBDAC基因；

2.如权利要求1所述的一种高产鼠李糖脂的基因工程菌，其特征在于：所述恶臭假单胞菌的株型为恶臭假单胞菌KT2440。

3.如权利要求1所述的一种高产鼠李糖脂的基因工程菌，其特征在于：所述重组质粒的原始表达载体为pBBRIMCS。

4.如权利要求1所述的一种...

【技术特征摘要】

1.一种高产鼠李糖脂的基因工程菌，其特征在于，包括恶臭假单胞菌和导入恶臭假单胞菌满足自我复制的重组质粒；所述恶臭假单胞菌的基因组中敲除了algd基因、flag基因簇；所述重组质粒为以下之一：(1)包含铜绿假单胞菌pa01的rhlab基因；(2)包含铜绿假单胞菌pa01的rhlab和rmlbdac基因；

2.如权利要求1所述的一种高产鼠李糖脂的基因工程菌，其特征在于：所述恶臭假单胞菌的株型为恶臭假单胞菌kt2440。

3.如权利要求1所述的一种高产鼠李糖脂的基因工程菌，其特征在于：所述重组质粒的原始表达载体为pbbrimcs。

4.如权利要求1所述的一种高产鼠李糖脂的基因工程菌，其特征在于：所述algd基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。

5.如权利要求1所述的一种高产鼠李糖脂的基因工程菌，其特征在于：所述flag基因簇的核苷酸序列是seq id no.2、seq id no.3、seq id no.4、seq id no.5、seq id no.6、seqid no.7、seq id no.8依次连接。

6.一种如权利要求1～5任意一项所述高产鼠李...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳志强，逄爱萍，王云，张博，黄良刚，周俊平，郑裕国，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：