【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及兽用生物制品，特别是涉及一种鸡滑液囊支原体活疫苗菌株、活疫苗及其制备方法。
技术介绍
1、鸡滑液囊支原体(mycoplasma synoviae，ms)引起以关节渗出性的滑液囊膜炎及腱鞘滑膜炎为主要特征的传染病。造成雏鸡的弱雏率升高，蛋鸡的产蛋率、肉鸡的体重及饲料转化率均下降，使用药物治疗时，易产生耐药性，效果也不理想。鸡滑液囊支原体与鸡毒支原体常常混合感染，还常与其它细菌或病毒混合感染，致使鸡群饲料利用率和产蛋率低下，加之昂贵的药物治疗费用，使支原体病原成为制约养鸡业快速发展的瓶颈。防治支原体病主要采用药物治疗和免疫接种，临床实践证明ms极易产生耐药性，抗生素治疗不能清除鸡群的支原体感染；因此免疫接种疫苗是控制该病更为有效的措施。
2、临床常用的鸡支原体疫苗主要分为灭活疫苗和弱毒疫苗两种，灭活疫苗虽然能够降低鸡支原体的垂直传播，减轻感染症状，但是却不能彻底清除鸡体内的野毒和阻止野毒入侵。弱毒疫苗可使机体产生局部粘膜免疫，应用较为广泛。目前已上市多种鸡毒支原体活疫苗，如f-36株、ts-11株、6/85株，而鸡滑液囊支原体活疫苗仅有进口自澳大利亚的ms-h株在售。
3、近年来国内鸡群鸡滑液囊支原体感染情况呈现普遍性，且危害性远超鸡毒支原体。国内对于鸡滑液囊支原体疫苗的研究多集中在灭活疫苗的开发上。因此，获得一种安全性好、免疫原性强的鸡滑液囊支原体弱毒活疫苗菌株、成功建立ms动物感染模型以及研制鸡滑液囊支原体活疫苗，对于有效预防和控制支原体病十分必要。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种鸡滑液囊支原体活疫苗菌株、活疫苗及其制备方法，以解决上述现有技术存在的问题，本专利技术中的鸡滑液囊支原体rpmsa1301株为专利技术人自行分离、筛选的流行菌株，通过人工驯化致弱获得，具有良好的免疫原性，使用安全，遗传性能稳定。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
3、一种鸡滑液囊支原体活疫苗菌株rpmsa1301，所述鸡滑液囊支原体活疫苗菌株rpmsa1301的保藏编号为cctcc m 20232235。
4、本专利技术还提供所述的鸡滑液囊支原体活疫苗菌株rpmsa1301在制备鸡滑液囊支原体疫苗中的应用。
5、本专利技术还提供一种鸡滑液囊支原体活疫苗，有效成分包括权利要求1所述的鸡滑液囊支原体活疫苗菌株rpmsa1301。
6、一种鸡滑液囊支原体活疫苗的制备方法，包括以下步骤：
7、s1.将权利要求1所述的鸡滑液囊支原体活疫苗菌株rpmsa1301活化后进行传代培养和发酵培养，获得发酵菌液；
8、在所述传代培养的过程中加入补料1，在所述发酵培养的过程中加入补料2；
9、所述补料1的组分按质量体积百分含量计，包括明胶1～5％、烟酰胺1～3％、精氨酸1～2％、葡萄糖5～10％和丙酮酸钠0.1～0.5％；
10、所述补料2的组分按质量体积百分含量计，包括氢氧化钠2～4％、peg600010～20％、烟酰胺1～3％和dmem 10～20％；
11、s2.对步骤s1获得的发酵菌液进行抗原含量定量检测，检测方法为核酸定量法或蛋白定量法，根据检测结果稀释所述发酵菌液；
12、s3.向步骤s2稀释后的菌液中加入耐热冻干保护剂，冻干，制备成所述鸡滑液囊支原体活疫苗；
13、所述耐热冻干保护剂的组分包括质量体积百分比为2～4％的卡波姆、质量体积百分比为1～4％的聚乙烯吡咯烷酮、质量体积百分比为2～8％的海藻糖、质量体积百分比为4～12％的酪蛋白水解物、质量体积百分比为0.1～0.2％的l-精氨酸和体积浓度为4～8％的乙二醇。
14、进一步地，在步骤s1中，在所述传代培养过程中，ph降至6.9时，加入所述补料1，加入量为总培养体积的0.1～0.5％。
15、进一步地，在步骤s1中，在所述发酵培养过程中，ph降至6.7时，加入所述补料2，继续培养10～20h后，第二次加入所述补料2，再培养10～20h后，第三次加入所述补料2；补料2在发酵培养过程中三次的加入量均为总培养体积的0.1～0.5％。
16、进一步地，在步骤s1中，所述传代培养的条件为37℃恒温培养；所述发酵培养的条件为0.04mpa，转速100r/min，37℃恒温培养。
17、进一步地，在步骤s2中，核酸定量法检测鸡滑液囊支原体菌液抗原含量，优选荧光定量pcr法；先高速离心或膜过滤对抗原进行10～50倍浓缩，再定量检测，上下游引物和探针分别如seq id no.1、seq id no.2和seq id no.3所示；根据检测结果稀释浓缩菌液，使鸡滑液囊支原体抗原含量为(0.5～1.5)×107.0拷贝数/羽份。
18、进一步地，在步骤s2中，蛋白定量法检测鸡滑液囊支原体菌液抗原含量，先高速离心或膜过滤法对抗原进行10～50倍浓缩，再定量检测；根据检测结果稀释浓缩菌液，使鸡滑液囊支原体抗原含量为200～500μg/羽份。
19、进一步地，在步骤s3中，所述菌液与所述耐热冻干保护剂的体积比为1：1。
20、本专利技术公开了以下技术效果：
21、本专利技术中的鸡滑液囊支原体rpmsa1301株为专利技术人自行分离、筛选的流行菌株，通过人工驯化致弱获得，具有良好的免疫原性，使用安全，遗传性能稳定。
22、本专利技术在培养鸡滑液囊支原体过程中，通过适时添加两种营养液(补料1和补料2)，提高ms发酵培养滴度至1010.0ccu/ml以上，高效的培养工艺有利于提升鸡滑液囊支原体疫苗免疫效果。
23、鸡滑液囊支原体菌液抗原含量定量检测方法为核酸定量法或蛋白定量法，先高速离心或膜过滤法对抗原进行10～50倍浓缩，再定量检测，根据检测结果稀释浓缩菌液；在配苗前对抗原进行准确定量，弥补了细菌类活疫苗仅能通过追检ccu的方法定量抗原的缺陷，有利于提升疫苗批间稳定性。
24、本专利技术鸡滑液囊支原体与优选保护剂以最适配比冻干，形成一个个蜗居，给支原体提供良好存储，疫苗稳定性好，实现在2℃～8℃下长期保存和运输，另一方面保护剂具有协同免疫和抵抗外界不良环境的作用，疫苗可用于滴鼻、点眼、饮水或喷雾免疫，甚至可以进行拌料免疫，使用更加便捷。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种鸡滑液囊支原体活疫苗菌株RPMSA1301，其特征在于，所述鸡滑液囊支原体活疫苗菌株RPMSA1301的保藏编号为CCTCC M 20232235。
2.如权利要求1所述的鸡滑液囊支原体活疫苗菌株RPMSA1301在制备鸡滑液囊支原体疫苗中的应用。
3.一种鸡滑液囊支原体活疫苗，其特征在于，有效成分包括权利要求1所述的鸡滑液囊支原体活疫苗菌株RPMSA1301。
4.一种鸡滑液囊支原体活疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在步骤S1中，在所述传代培养过程中，pH降至6.9时，加入所述补料1，加入量为总培养体积的0.1～0.5％。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在步骤S1中，在所述发酵培养过程中，pH降至6.7时，加入所述补料2，继续培养10～20h后，第二次加入所述补料2，再培养10～20h后，第三次加入所述补料2；补料2在发酵培养过程中三次的加入量均为总培养体积的0.1～0.5％。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在
8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在步骤S2中，核酸定量法检测鸡滑液囊支原体菌液抗原含量时，采用荧光定量PCR法；先高速离心或膜过滤对抗原进行10～50倍浓缩，再定量检测，上下游引物和探针分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；根据检测结果稀释浓缩菌液，使鸡滑液囊支原体抗原含量为(0.5～1.5)×107.0拷贝数/羽份。
9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在步骤S2中，蛋白定量法检测鸡滑液囊支原体菌液抗原含量，先高速离心或膜过滤法对抗原进行10～50倍浓缩，再定量检测；根据检测结果稀释浓缩菌液，使鸡滑液囊支原体抗原含量为200～500μg/羽份。
10.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在步骤S3中，所述菌液与所述耐热冻干保护剂的体积比为1：1。
...【技术特征摘要】
1.一种鸡滑液囊支原体活疫苗菌株rpmsa1301，其特征在于，所述鸡滑液囊支原体活疫苗菌株rpmsa1301的保藏编号为cctcc m 20232235。
2.如权利要求1所述的鸡滑液囊支原体活疫苗菌株rpmsa1301在制备鸡滑液囊支原体疫苗中的应用。
3.一种鸡滑液囊支原体活疫苗，其特征在于，有效成分包括权利要求1所述的鸡滑液囊支原体活疫苗菌株rpmsa1301。
4.一种鸡滑液囊支原体活疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在步骤s1中，在所述传代培养过程中，ph降至6.9时，加入所述补料1，加入量为总培养体积的0.1～0.5％。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，在步骤s1中，在所述发酵培养过程中，ph降至6.7时，加入所述补料2，继续培养10～20h后，第二次加入所述补料2，再培养10～20h后，第三次加入所述补料2；补料2在发酵培养过程中三次的加入量均为总培养体积的0.1～0.5％。
<...【专利技术属性】
技术研发人员：郑朝朝，王承玉，焦玉兰，何平有，郁宏伟，尤永君，柳珊，刘思桐，
申请(专利权)人：瑞普保定生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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