【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于结核病诊断领域，具体的涉及一种kncn蛋白在结核诊断试剂中的应用。
技术介绍
1、结核病是由细胞内细菌病原体结核分枝杆菌引起的慢性传染病。由于结核分枝杆菌其独特的致病特点及流行和传播方式，特别是近年来耐药结核分枝杆菌的产生以及与人类免疫缺陷症病毒(hiv)的交叉感染等原因导致结核病的流行再度呈现上升趋势。结核分枝杆菌是一种胞内感染菌，它是最成功的病原体之一，已经进化出适应宿主细胞和逃避免疫监视的各种策略。结核分枝杆菌经过呼吸道进入人体后，主要在巨噬细胞内寄生，并采用多种策略逃避宿主细胞的免疫杀伤作用，其可以在巨噬细胞内长期存活并缓慢增殖。当宿主免疫力低下时，休眠的结核分枝杆菌可以被重新活化，导致机体发展为活动性结核病。感染结核分枝杆菌后病原体能在宿主体内长期潜伏或造成持续性感染，为该疾病的治疗和预防造成了极大的障碍。此外，现阶段结核病的治疗难点还在于多重耐药性和广泛耐药性结核病。结核病新药的匮乏以及结核分枝杆菌相关基础研究的不足是耐药性结核病治愈率低下的主要原因。因此，迫切需要寻找新的药物靶点，开发新的抗结核病药物来治疗结核病。
2、根据世界卫生组织2022年发布的《全球结核病报告》，全球每年新发结核病例约有1000万人，全球每年因结核病死亡的病例数约为140万人。目前结核病诊断仍面临多种技术困境，主要有以下几个方面：1)结核菌生长缓慢，培养需要耗时长。2)检测技术不够灵敏，检测方法不够可靠。3)成本高和易受到环境影响。4)诊断复杂性高,难于及时准确诊断。
3、结核病抗原检测方法已经发展多年
4、kncn(kinocilin)蛋白是由124个氨基酸组成的一种人类蛋白质。它属于肌球蛋白超家族的一员，参与细胞内运输和分裂等生物过程。kncn蛋白能够通过与微管结合并进行转动活动来驱动细胞内运输。kncn蛋白在神经细胞中具有重要的作用，特别是在神经元轴突的生长和维持中。它能够将细胞器、rna和其他重要分子沿着微管轨道进行运输，确保神经细胞正常的生理功能。此外，kncn蛋白还参与细胞周期和细胞分裂过程，在有丝分裂中，它负责将染色体从一个细胞极向另一个移动，确保正常的染色体分离和细胞分裂。研究表明，kncn蛋白功能异常与一些疾病的发生和发展密切相关，如神经系统疾病和癌症。因此，调节kncn蛋白的活性将会对机体产生重要的影响，还可能在某些疾病的预防或治疗中发挥重要作用。调节kncn蛋白活性的一个重要途径可以依靠通过能够与kncn蛋白发生直接相互作用的蛋白质来实现。因此，能够与kncn蛋白发生直接相互作用的蛋白质，将具有重要的药用价值，可开发为某些疾病预防或治疗的蛋白或多肽药物。
技术实现思路
1、本专利技术利用kncn蛋白可以同时捕获结核患者标本中几种或十几种结核抗原的性能，通过重组kncn蛋白并表达纯化，以此来检测捕获结核抗原的能力。
2、第一方面，本专利技术提供一种kncn重组蛋白，所述kncn重组蛋白具有捕获结核杆菌抗原的性能，所述kncn重组蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示，
3、seq id no.1：
4、mdipissrdfrglqlacvalglvagsiiigisvskaaaamggvfigaavlgllilaypfl karfnldhilptigslrihphpgadhgegrsstngnkegarsslstvsrtleklkpgtrga eec。
5、第二方面，本专利技术提供一种kncn重组蛋白的制备方法，所述方法包括如下步骤：
6、s1.获得kncn蛋白的核苷酸序列，所述核苷酸序列如seq id no.2所示，
7、s2.在特定载体上装入步骤s1获得的核苷酸序列，构建重组质粒，
8、s3.步骤s2构建的重组质粒转染到菌株进行表达，获得本专利技术的重组蛋白；
9、本专利技术的kncn重组蛋白具有捕获结核抗原的作用，
10、seq id no.2：
11、ggatccatggacatccccatcagcagcagagacttccgcggcctgcagctggcctgcgtggctctcgggctggtggctggcagcatcattatcggcatctccgtatccaaggctgcagctgccatgggcggtgtctttattggcgctgctgttctggggctcctcatcttggcctaccccttcctgaaggctcggttcaacctggaccacatcctgcctaccatagggagcctaagaatccatccccatccaggggcagaccacggggaaggaagatccagcaccaatggcaacaaggaaggagcccgcagcagcctgtccaccgtgagcaggaccctggagaagctgaagccggggacccggggggctgaggaatgctgagaattc。
12、进一步的，所述载体包括但不限于pet-28a、pet-30a、pet-22b、pet-24a、pet-32c中的一种或多种，优选pet-28a。
13、进一步的，所述菌株选自e.coli bl21(de3)。
14、第三方面，本专利技术提供一种检测结核杆菌的试剂盒，所述试剂盒包含检测结核杆菌的试剂和说明书，所述试剂进一步包含kncn重组蛋白，所述kncn重组蛋白具有捕获结核杆菌抗原的性能。
15、第四方面，本专利技术提供一种如第一方面所述的kncn重组蛋白在制备检测结核抗原的试剂盒中的用途，所述kncn重组蛋白具有捕获结核杆菌抗原的性能。
16、进一步的，所述结核抗原选自rv0956、rv1392、rv1926c、rv2232、rv2892c中的一种或多种。
17、有益效果：
18、kncn重组蛋白有能够特异、高效的捕获多种结核抗原的特性，可以通过kncn重组蛋白高效、特异的捕获样本中结核抗原来提高结核病的检测灵敏度和特异性。
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1.一种KNCN重组蛋白，所述KNCN重组蛋白具有捕获结核杆菌抗原的性能，所述KNCN重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，
2.一种KNCN重组蛋白的制备方法，所述方法包括如下步骤：
3.如权利要求2所述的一种KNCN重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述载体选自pET-28a、pET-30a、pET-22b、pET-24a、pET-32c中的一种或多种。
4.如权利要求2所述的一种KNCN重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述载体选自pET-28a。
5.如权利要求2所述的一种KNCN重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述菌株选自E.coli BL21(DE3)。
6.如权利要求2-5任一项所述KNCN重组蛋白的制备方法，其中，所述KNCN重组蛋白捕获的结核抗原可以通过生物质谱法来鉴定。
7.一种检测结核杆菌的试剂盒，所述试剂盒包含检测结核杆菌的试剂和说明书，所述试剂进一步包含KNCN重组蛋白，所述KNCN重组蛋白具有捕获结核杆菌抗原的性能，所述KNCN重组蛋白捕获的结核抗原可以通过生物质谱法来鉴定
8.一种如权利要求1所述的KNCN重组蛋白在制备检测结核抗原的试剂盒中的用途，所述KNCN重组蛋白具有捕获结核杆菌抗原的性能。
9.如权利要求8所述的KNCN重组蛋白在制备检测结核抗原的试剂盒中的用途，其特征在于，所述结核抗原选自Rv0956、Rv1392、Rv1926c、Rv2232、Rv2892c中的一种或多种。
...【技术特征摘要】
1.一种kncn重组蛋白，所述kncn重组蛋白具有捕获结核杆菌抗原的性能，所述kncn重组蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示，
2.一种kncn重组蛋白的制备方法，所述方法包括如下步骤：
3.如权利要求2所述的一种kncn重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述载体选自pet-28a、pet-30a、pet-22b、pet-24a、pet-32c中的一种或多种。
4.如权利要求2所述的一种kncn重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述载体选自pet-28a。
5.如权利要求2所述的一种kncn重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述菌株选自e.coli bl21(de3)。
6.如权利要求2-5任一项所...
【专利技术属性】
技术研发人员：曹廷明，盛钢，孙照刚，褚洪迁，戴广明，孙宏，张婧芳，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京胸科医院，
类型：发明
国别省市：
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