【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测，具体涉及一种人血红蛋白、转铁蛋白的共检试剂管及其制备方法和应用。
技术介绍
1、粪便隐血是指消化道少量出血，红细胞被消化破坏，粪便外观无异常改变，肉眼和显微镜下均不能证实的出血。粪便隐血检查又称便潜血试验。是用来检查粪便中隐匿的红细胞或血红蛋白，转铁蛋白一项实验。这对检查消化道出血是一项非常有用的诊断指标。
2、目前检测消化道出血较多的方法为便隐血试剂双联检测法，是一种特异性检测人粪便中的血红蛋白(hb)和转铁蛋白(tf)的检测方法。联合检测hb和tf法，灵敏度高、特异性强，对检测消化道出血的临床意义可起到优势互补的作用。
3、但现有的tf/hb双联胶体金诊断试纸检测粪便隐血的新方法，将抗人tf抗体和抗人hb抗体整合在同一试纸带上，可同步检测tf与hb，互不干扰，二者优势互补，但其hb检出限有限(经测试，20μg/ml能检出，1μg/ml不能检出)，灵敏度和检出限有待进一步提高。
4、中国专利cn106680477a公开一种粪便取样及隐血检测一体化装置。但该专利技术只可放置单一试纸条，检测灵敏度及样本利用率比较低，血液中转铁蛋白含量较血红蛋白低，对微量出血的检测灵敏度不及血红蛋白，但血红蛋白在胃肠道内受到消化酶和细菌的作用易变性，容易引起潜血假阴性，转铁蛋白在肠道内抗菌能力强，性质比较稳定。单一的大便潜血(fob)诊断方法的灵敏度和特异性都有待进一步提高。
5、中国专利cn110456048a公开多功能粪便采集及检测装置。但该专利技术虽然有多个试纸槽但设计上
6、中国专利cn105467124a公开了一种检测便隐血的胶体金双联试纸条及其制备方法，该试纸条采样和检测过程暴露，不利于居家自测。
技术实现思路
1、为此，本专利技术提供了一种人血红蛋白、转铁蛋白的共检一体化装置，实现一次采便，可同时检测两个项目，可有效提高便隐血临床的检出率，操作简便利于居家检测。使用者在节省去医院的时间，同时了解到自己健康是否有相关问题，整个装置经济有效。
2、本专利技术以双抗体夹心法为基础，利用胶体金免疫层析技术，快速检测人粪便样本中的血红蛋白和转铁蛋白。
3、本专利技术是基于特定鼠抗人hb单克隆抗体和血红蛋白，鼠抗人tf单克隆抗体和转铁蛋白特异性结合的原理，提供该单克隆抗体制备得到的试纸，使得检测试剂管具备较高的准确性和灵敏度。
4、为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
5、根据本专利技术第一方面提供的一种人血红蛋白、转铁蛋白的共检试剂管的制备方法，其特征在于，包括：
6、步骤一，采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金；
7、步骤二，利用胶体金标记鼠抗人hb单克隆抗体1、鼠抗人tf单克隆抗体1，分别制备胶体金-鼠抗人hb单克隆抗体1复合物、胶体金-鼠抗人tf单克隆抗体1复合物；
8、步骤三，将胶体金-鼠抗人hb单克隆抗体1复合物、胶体金-鼠抗人tf单克隆抗体1复合物分别包被到玻璃纤维膜上制备免疫胶体金垫；
9、步骤四，分别用鼠抗人hb单克隆抗体2、鼠抗人tf单克隆抗体2配制检测线(t线)溶液，用羊抗鼠igg配制质控线(c线)溶液；
10、在硝酸纤维素膜上喷点c、t线，制得免疫硝酸纤维素膜；
11、步骤五，将免疫胶体金垫和免疫硝酸纤维素膜分别进行干燥处理；
12、将免疫胶体金垫、免疫硝酸纤维素膜、吸水纸、样品垫粘贴在底衬片上组成hb检测试纸半成品板、tf检测试纸半成品板；
13、步骤六，将两种半成品板分切成试剂条，装进不同卡槽内，将带有卡槽的底座与检测管牢固连接，向内管内加入样本处理液，包装即得单人份hb、tf检测试剂管。
14、进一步的，所述步骤一中，胶体金制备的方法包括：分别配制0.01％的haucl4水溶液和1.0％的柠檬酸三钠水溶液，将0.01％的haucl4水溶液加热至沸腾，搅拌下加入1.0％柠檬酸三钠水溶液，边加边搅拌；沸腾后，继续加热煮沸10～15分钟至溶液呈透明的紫红色，即得胶体金溶液。
15、进一步的，所述步骤二中，胶体金-鼠抗人hb单克隆抗体1复合物的制备方法包括：取步骤一得到的胶体金，加入ph7.8，0.01m磷酸盐缓冲液，混匀；在搅拌下，加入抗人hb单克隆抗体1溶液，混匀，室温反应；反应结束后，加入5％的bsa作为保护剂，混匀、室温反应10分钟；反应复合物离心纯化；再次加ph7.8，0.01m磷酸盐缓冲液至原体积，离心，取沉淀，加ph7.8，0.01m磷酸盐缓冲液至终体积；
16、胶体金-鼠抗人tf单克隆抗体1复合物的制备方法包括：与胶体金-鼠抗人hb单克隆抗体1复合物的制备方法完全一样。
17、进一步的，所述步骤三中，免疫胶体金垫的制备方法包括：取纯化的胶体金-鼠抗人hb单克隆抗体1复合物、胶体金-鼠抗人tf单克隆抗体1复合物用缓冲液进行10倍稀释，将一张待铺玻璃纤维膜平整放置于模板中，取一定量稀释溶液缓慢均匀倒在膜板内，使其浸泡均匀，取出干燥即得免疫胶体金垫。
18、进一步的，所述步骤四中，检测线(t线)溶液的配置包括：根据需配制的t线溶液的量和血红单克隆抗体2、转铁蛋白单克隆抗体2的浓度，计算并量取血红蛋白单克隆抗体2、转铁蛋白单克隆抗体2，用包被缓冲液稀释至蛋白浓度1.0mg/ml。
19、质控线(c线)溶液的配置包括：根据需配制的c线溶液的量及羊抗鼠igg的浓度，计算并量取羊抗鼠igg原液，用包被缓冲液稀释至蛋白浓度1.0mg/ml。
20、免疫硝酸纤维素膜上，t线浓度：1.0mg/ml；c线浓度：1.0mg/ml。
21、进一步的，所述步骤五中，半成品板按层析方向依次为样品垫、免疫胶体金垫、免疫硝酸纤维素膜、吸水纸、检测线、质控线和底衬。
22、进一步的，所述步骤六中，卡槽位于内管外层，内管内有样品处理液，样本处理液与卡槽层未使用前不相通；内管底部有可戳破的内壁，隔离开内管内的处理液与卡槽所处的内管外层。
23、根据本专利技术第二方面提供的一种人血红蛋白、转铁蛋白抗体的共检试剂管用于制备检测粪便隐血产品中的应用。
24、根据本专利技术第三方面提供的一种人血红蛋白、转铁蛋白的共检装置，其特征在于，包括管体(1)、样品处理腔(2)、漏斗管段、盖子(3)、取样棒(4)、分隔件(8)、检测试剂条(9)、易撕条(10)、底座(11)、刺针(12)、接收槽(13)以及密封片(17)；
25、所述管体(1)内开设有所述样品处理腔(2)，所述样品处理腔(2)内设置有所述漏斗管段，所述漏斗管段将所述样品处理腔(2)分隔为上部液腔(15)和下部液腔(16)；
26、所述盖子(3)的下端固定有所述取样棒(4)，所述取样棒(4)插入至所述样品处理腔(2)内，所述盖子(3)用于密封设置在所述样品处理腔(2)的上部敞口端；
27、所述样品本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种人血红蛋白、转铁蛋白的共检试剂管的制备方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述一种人血红蛋白、转铁蛋白的共检试剂管的制备方法，其特征在于，所述步骤五中，半成品板按层析方向依次为样品垫、免疫胶体金垫、免疫硝酸纤维素膜、吸水纸、检测线、质控线和底衬。
3.根据权利要求1所述一种人血红蛋白、转铁蛋白的共检试剂管的制备方法，其特征在于，所述步骤六中，卡槽位于内管外层，内管内有样品处理液，样本处理液与卡槽层未使用前不相通；内管底部有可戳破的内壁，隔离开内管内的处理液与卡槽所处的内管外层。
4.一种人血红蛋白、转铁蛋白的共检试剂管用于制备检测粪便隐血产品中的应用。
5.一种人血红蛋白、转铁蛋白的共检装置，其特征在于，包括管体(1)、样品处理腔(2)、漏斗管段、盖子(3)、取样棒(4)、分隔件(8)、检测试剂条(9)、易撕条(10)、底座(11)、刺针(12)、接收槽(13)以及密封片(17)；
【技术特征摘要】
1.一种人血红蛋白、转铁蛋白的共检试剂管的制备方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述一种人血红蛋白、转铁蛋白的共检试剂管的制备方法，其特征在于，所述步骤五中，半成品板按层析方向依次为样品垫、免疫胶体金垫、免疫硝酸纤维素膜、吸水纸、检测线、质控线和底衬。
3.根据权利要求1所述一种人血红蛋白、转铁蛋白的共检试剂管的制备方法，其特征在于，所述步骤六中，卡槽位于内管外层，内管内有样品处理液，样本处...
【专利技术属性】
技术研发人员：王丽，
申请(专利权)人：北京金沃夫生物工程科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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