【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种基于磁性吸附剂提取尿液中儿茶酚胺类物质的方法及应用。
技术介绍
1、儿茶酚胺(cas)主要包括肾上腺素(e)、去甲肾上腺素(ne)和多巴胺(da)，其主要的代谢物有3-甲氧基酪胺(3-mt)、甲氧基去甲肾上腺素(nmn)和甲氧基肾上腺素(mn)。儿茶酚胺类物质在临床上可以用于辅助诊断嗜铬细胞瘤和神经母细胞瘤等内分泌相关疾病。尿液儿茶酚胺类物质是正常生理过程中重要的信号介质，在24小时尿液中的含量变化与许多病理过程息息相关。
2、《嗜铬细胞瘤和副神经瘤诊断治疗专家共识(2020版)》明确表明，诊断ppgl首选血浆游离或尿液甲氧基肾上腺素(mn)和甲氧基去甲肾上腺素(nmn)浓度测定，测定甲氧基肾上腺素类(mns)水平诊断ppgl的灵敏度高，对于mn或nmn单项升高3倍以上或两者均升高做判断标准，可降低假阳性率。另外建议可同时检测血或尿中去甲肾上腺素(ne)、肾上腺素(e)、多巴胺(da)和其他代谢产物3-甲氧基酪胺(3-mt)等浓度以帮助诊断。
3、儿茶酚胺类物质在疾病诊断上具有重要意义，但是，目前常用的提取尿液中的儿茶酚胺类物质的方法是固相萃取法(spe)，但是通过spe进行提取的过程耗时长，操作复杂。且儿茶酚胺类物质稳定性较差，在室温环境中降解较快。部分使用磁珠法提取尿液中的儿茶酚胺类物质，但在提取过程中，未考虑样本的稳定性，或样本的提取效率，造成检测灵敏度低的现象。还有使用衍生法对尿液中儿茶酚胺类物质进行衍生的方法，但存在操作复杂或衍生试剂气味较大等问题。故亟需一种操作
4、公开号为cn113917007a的中国专利公开了一种检测人尿液儿茶酚胺及其中间代谢物的试剂盒及测试方法。在乙醛对儿茶酚胺及其中间代谢物进行衍生化，需在37-60℃温浴5-40分钟，随后进行检测。但是乙醛作为衍生试剂，气味较大，且衍生化时间较长，检测效率较低。
5、公开号为cn114354821a的中国专利公开了一种基于磁性吸附剂的儿茶酚胺类物质的提取方法。在提取过程中使用乙醛进行衍生化，乙醛作为衍生试剂，气味较大，且需要配制的试剂较多，实验操作复杂。另外，方案所需样本量为400μl，用量较多，尿液中儿茶酚胺及其中间代谢物浓度较高，应寻求提取效率更高的实验方案。
6、公开号为cn114354822a的中国专利公开了一种基于磁性吸附剂快速提取儿茶酚胺的方法。方案中血浆和尿液均通过相同的处理方式，但是一般尿液采样后，加入酸性试剂进行保护，此时尿液呈酸性，不利于样本中目标化合物的提取，会降低提取效率，故需要的样本量较多。本方案通过方案优化，可有效提高提取效率，减少样本的使用。
7、公开号为cn115327008a的中国专利公开了血浆和尿液中儿茶酚胺及其代谢产物的检测方法。方案采用的spe样本前处理方案操作复杂，操作所需时间及人力成本较高，不易实现前处理及检测过程的自动化。本方案基于磁珠对尿液中儿茶酚胺及其中间代谢物进行提取，前处理简单，更易实现自动化。
技术实现思路
1、本专利技术针对现有技术存在的不足，提供了一种基于磁性吸附剂提取尿液中儿茶酚胺类物质的方法及应用。
2、本专利技术是通过以下技术方案实现的：
3、本专利技术提供了一种基于磁性吸附剂提取尿液中儿茶酚胺类物质的方法，包括以下步骤：
4、s1、样本前处理：在校准品或样品中加入内标，混匀后加入乙酸铵水溶液混匀，得到待测样品溶液；
5、s2、磁性吸附剂提取：活化磁性弱阳离子吸附剂，加入待测样品溶液，振荡后移除溶液，对磁性弱阳离子吸附剂进行淋洗和再次淋洗，洗脱，得到提取产品。
6、优选地，所述儿茶酚胺类物质包括肾上腺素、去甲肾上腺素、甲氧基肾上腺素、多巴胺、甲氧基去甲肾上腺素、3-甲氧基酪胺中的至少一种。
7、优选地，步骤s1中所述乙酸铵水溶液的浓度为0.2-0.6mol/l。
8、优选地，步骤s2中所述活化的方法包括：在磁性弱阳离子吸附剂中加入有机试剂进行活化，振荡，移除溶液；用超纯水进行平衡，涡旋振荡，移除溶液。
9、优选地，所述有机试剂包括乙腈。
10、优选地，所述样品包括尿液。
11、优选地，步骤s2中所述淋洗的方法包括：用超纯水对磁性弱阳离子吸附剂进行淋洗，振荡，移除溶液。
12、优选地，步骤s2中所述再次淋洗的方法包括：用甲醇水溶液或乙腈水溶液对磁性弱阳离子吸附剂进行再次淋洗，振荡，移除溶液。
13、优选地，所述甲醇水溶液中甲醇的体积浓度为10-20％。
14、优选地，所述乙腈水溶液中乙腈的体积浓度为10-20％。
15、优选地，步骤s2中所述洗脱的方法包括：加入洗脱液，振荡，移除磁性弱阳离子吸附剂。
16、优选地，所述洗脱液包括甲酸、有机溶剂和水，所述有机溶剂包括甲醇、乙醇、乙腈、异丙醇中的至少一种。
17、优选地，所述洗脱液包括体积浓度为0.1％的甲酸和体积浓度为5％的有机溶剂。
18、优选地，所述振荡的方法包括涡旋振荡30-50s。
19、优选地，所述移除溶液的方法包括用具磁物吸磁性弱阳离子吸附剂至管壁后移除溶液。
20、本方法在尿液样本中加入乙酸铵，使样本在中性环境下进行提取，可提高化合物的提取效率，提高检测灵敏度，对诊断来源于神经嵴的神经内分泌肿瘤如嗜铬细胞瘤、神经母细胞瘤和副神经节瘤等患者的诊断和鉴别诊断，以及疾病的发展过程、疗效和预后评估具有十分重要的意义，从而为患者提供个性化的诊断治疗信息。
21、与现有技术相比，本专利技术具有如下的有益效果：
22、(1)通过磁性弱阳离子吸附剂，可以快速实现儿茶酚胺类物质的提取；
23、(2)通过磁性弱阳离子吸附剂，有效去除尿液中盐，减少对仪器检测的影响，提高检测灵敏度；
24、(3)可选择手动操作或自动化处理，对于大量样本的检测具有重要意义；
25、(4)提取过程可以在10min内完成；
26、(5)磁性弱阳离子吸附剂一般是在中性或碱性环境下吸附样本中的目标化合物，在酸性条件下洗脱目标化合物，因此在样本提取前，加入中性的乙酸铵溶液，可调整样本中的ph，提高样本提取效率；
27、(6)本专利技术提供的提取方法线性范围较宽，为1ng/ml～3000ng/ml，可以满足更多的样本检测需求；
28、(7)通过磁性弱阳离子吸附剂快速的提取尿液中的儿茶酚胺类物质，为尿液中儿茶酚胺类物质的快速提取和检测提供实验方案；
29、(8)淋洗剂中有机试剂的浓度较低，可以更好的淋洗掉水溶性的杂质，减少杂质的干扰，提高目标化合的检测灵敏度。
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1.一种基于磁性吸附剂提取尿液中儿茶酚胺类物质的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述儿茶酚胺类物质包括肾上腺素、去甲肾上腺素、甲氧基肾上腺素、多巴胺、甲氧基去甲肾上腺素、3-甲氧基酪胺中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中所述乙酸铵水溶液的浓度为0.2-0.6mol/L。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中所述活化的方法包括：在磁性弱阳离子吸附剂中加入有机试剂进行活化，振荡，移除溶液；用超纯水进行平衡，涡旋振荡，移除溶液。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述样品包括尿液。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中所述淋洗的方法包括：用超纯水对磁性弱阳离子吸附剂进行淋洗，振荡，移除溶液。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中所述再次淋洗的方法包括：用甲醇水溶液或乙腈水溶液对磁性弱阳离子吸附剂进行再次淋洗，振荡，移除溶液。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述甲
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中所述洗脱的方法包括：加入洗脱液，振荡，移除磁性弱阳离子吸附剂。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述洗脱液包括甲酸、有机溶剂和水，所述有机溶剂包括甲醇、乙醇、乙腈、异丙醇中的至少一种。
...【技术特征摘要】
1.一种基于磁性吸附剂提取尿液中儿茶酚胺类物质的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述儿茶酚胺类物质包括肾上腺素、去甲肾上腺素、甲氧基肾上腺素、多巴胺、甲氧基去甲肾上腺素、3-甲氧基酪胺中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s1中所述乙酸铵水溶液的浓度为0.2-0.6mol/l。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s2中所述活化的方法包括：在磁性弱阳离子吸附剂中加入有机试剂进行活化，振荡，移除溶液；用超纯水进行平衡，涡旋振荡，移除溶液。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述样品包括尿液。
6.根据权利要求1所述的方法，...
【专利技术属性】
技术研发人员：李姝妹，王路思，翟立斐，谢晓磊，
申请(专利权)人：上海睿质科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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