【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及细胞制剂的制造方法和能够用于该细胞制剂的制造方法的、用于对培养细胞给予低氧刺激的低氧刺激用容器。
技术介绍
1、以往，脑梗塞发病后数日以后从亚急性期至慢性期的治疗法限于复发的预防，作为使功能恢复的治疗也仅有康复训练疗法。作为脑梗塞慢性期的治疗，进行了使用生长因子的临床试验(血管内皮生长因子、促红细胞生成素等)，但未显示有效性。没有发现有效性的理由之一是，在脑组织中存在血脑屏障(也称为bbb)，由于该屏障机构，迄今为止几乎所有的脑梗塞治疗的药剂几乎不到达脑实质。
2、正在研究针对脑梗塞的干细胞疗法。使用骨髓间充质干细胞的细胞疗法有望。然而，作为妨碍其普及的缺点，可举出所得到的细胞数少、在专用的细胞处理中心(称为cpc)中培养需要2周以上，因此只能在极少一部分的专业医院进行。另外，ips(inducedpluripotent stem，诱导性多能干)细胞有癌变的危险性，此外举出在中枢神经疾病的治疗中难以越过成为问题的bbb的屏障机构，它们妨碍临床应用。即，现状是干细胞对脑梗塞的治疗应用仍是困难的。
3、本专利技术人在下述专利文献1中提出了一种用于促进血管新生或促进轴索伸展的细胞制剂的制造方法，其示出了通过在慢性期对由低氧低糖刺激转换为保护型的脑内炎性细胞小胶质细胞进行动脉给药，来促进抗炎、血管新生、神经轴索伸展而使功能恢复的再生疗法的可能性。
4、临床上不容易得到小胶质细胞，因此着眼于性质与小胶质细胞类似的外周血单核细胞进行了研究。这是因为单核细胞容易越过bbb集中于病变部，通过刺激
5、在先技术文献
6、专利文献：
7、专利文献1：国际公开第wo2018/043596a1号公报。
技术实现思路
1、专利技术要解决的问题
2、然而，如专利文献1记载的方法那样，为了在不具备特殊的设备的一般医院等中实施从患者的外周血收集单核细胞并实施低氧低糖刺激来变化为保护型、由此作为细胞制剂向患者给药的治疗方法，需要进一步的改良。例如，从自体外周血中分离收集单核细胞的方法可以使用已经在临床上利用的单采术(apheresis)设备来实施。然而，对于从自体外周血收集的单核细胞，即使是没有cpc那样的特别设备的一般医院也并不知晓实施适当的低氧低糖刺激的方法。
3、因此，本专利技术的目的在于提供一种能够对外周血单核细胞实施适当的低氧低糖刺激而简易地制造有效的细胞制剂的细胞制剂的制造方法和适用于该细胞制剂的制造方法的低氧刺激用容器。
4、解决问题的手段
5、实现上述目的的本专利技术的细胞制剂的制造方法是一种通过对外周血单核细胞给予低氧低糖刺激并将该外周血单核细胞转换为保护型来制造用于促进血管新生或轴索伸展的细胞制剂的方法，其特征在于，在被至少一部分具有透氧性并具有可挠性的第一壁包围的第一室中，容纳接种有所述外周血单核细胞的糖浓度1.0g/l以下的低糖液体培养基并密封；利用具有氧遮蔽性和可挠性的第二壁至少覆盖所述第一壁中具有透氧性的部位，在形成于所述第一壁与所述第二壁之间的第二室中容纳脱氧剂，由此经由所述第一壁吸引所述低糖液体培养基中的溶解氧；将所述低糖液体培养基的溶解氧降低至低于1％并维持，由此对所述外周血单核细胞给予24小时以下的所述低氧低糖刺激。
6、在本专利技术的细胞制剂的制造方法中，优选在低糖液体培养基中接种外周血单核细胞后，将溶解氧在1小时以内降低至小于1％，然后将低糖液体培养基的溶解氧维持在小于1％。优选在第一室内与低糖液体培养基一起容纳氮气，并降低低糖液体培养基的溶解氧。在该情况下，更优选将二氧化碳与氮气一起容纳于第一室内。
7、进而，在本专利技术的细胞制剂的制造方法中，也可以在第二室内容纳氮气而降低低糖液体培养基的溶解氧。也可以利用具有氧遮蔽性和可挠性的第三壁覆盖第二壁的外周和/或第一壁，并在形成于第三壁与第二壁之间和/或第三壁与第一壁之间的第三室中容纳氮气来降低低糖液体培养基的溶解氧。
8、另外，在本专利技术的细胞制剂的制造方法中，也可以在由第一壁构成的第一室的内壁面使用含有细胞固着促进材料的涂布材料实施涂布后，将播种有外周血单核细胞的低糖液体培养基容纳于第一室并进行密封。
9、实现上述目的的本专利技术的低氧刺激用容器的第一方式的特征在于，在用于对培养细胞给予低氧刺激的低氧刺激用容器中，包括：第一室，其被至少一部分具有透氧性并具有可挠性的第一壁包围，容纳有低糖液体培养基和所述培养细胞并被密封；第二室，其通过利用具有氧遮蔽性和可挠性的第二壁至少覆盖所述第一壁中具有透氧性的部位而形成于所述第一壁与所述第二壁之间并被密封；脱氧剂，其容纳于所述第二室，经由所述第一壁吸引所述低糖液体培养基中的溶解氧；第一通路，以连通所述第一室和外部的方式设置，能够气密地闭塞；以及第二通路，以连通所述第二室和外部的方式设置，能够气密地闭塞。
10、本专利技术的低氧刺激用容器的第二方式的特征在于，在用于对培养细胞给予低氧刺激的低氧刺激用容器中，包括：第一室，其被至少一部分具有透氧性并具有可挠性的第一壁包围，容纳有包含低糖液体培养基和所述培养细胞的细胞悬浮液并被密封；第二室，其通过利用具有氧遮蔽性和可挠性的第二壁至少覆盖所述第一壁中具有透氧性的部位而形成于所述第一壁与所述第二壁之间并被密封；脱氧剂，其容纳于所述第二室，经由所述第一壁吸引所述低糖液体培养基中的溶解氧；第三室，其通过利用具有氧遮蔽性和可挠性的第三壁覆盖所述第二壁的外周和/或第一壁而形成于所述第三壁与所述第二壁之间和/或所述第三壁与第一壁之间并被密封；第一通路，以连通所述第一室和外部的方式设置，能够气密地闭塞；以及第三通路，以连通所述第三室和外部的方式设置，能够气密地闭塞。
11、在第二方式中，优选地还设置有第四室，所述第四室能够容纳第一通路、第二通路和/或第三通路，具有氧遮蔽性和可挠性并能够开口和密封。
12、在这些低氧刺激用容器中，第一通路、第二通路或第三通路也可以从第一室、第二室或第三室向外侧突出地设置，分别具有用于取放各室内容物的氧遮蔽性的阻气性管。另外，在第一通路、第二通路或第三通路与第一室之间也可以具备能够气密地闭塞的遮蔽单元。在这些低氧刺激用容器中，也可以在由所述第一壁构成的所述第一室的内壁面涂布含有细胞固着促进材料的涂布材料。
13、专利技术效果
14、根据本专利技术的细胞制剂的制造方法，包围第一室的第一壁和覆盖第一壁的第二壁具有可挠性，因此第一壁和第二壁能够变形。因此，在将低糖液体培养基、外周血单核细胞容纳于第一室或从第一室取出时，第一壁和第二壁变形，从而不会向第一室内吸引周围的气体等，能够将第一室保持为无菌状态。
15、通过在确保第一壁的透氧性、第二壁的氧遮蔽性、与外部的遮蔽性等的同时在第一壁与第二壁之间的第二室中容纳足够本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种细胞制剂的制造方法，通过对外周血单核细胞给予低氧低糖刺激并将该外周血单核细胞转换为保护型来制造用于促进血管新生或轴索伸展的细胞制剂，其中，
2.根据权利要求1所述的细胞制剂的制造方法，其中，
3.根据权利要求1所述的细胞制剂的制造方法，其中，
4.根据权利要求1所述的细胞制剂的制造方法，其中，
5.根据权利要求1所述的细胞制剂的制造方法，其中，
6.根据权利要求1所述的细胞制剂的制造方法，其中，
7.一种低氧刺激用容器，用于对培养细胞给予低氧刺激，包括：
8.一种低氧刺激用容器，用于对培养细胞给予低氧刺激，包括：
9.根据权利要求7或8所述的低氧刺激用容器，其中，
10.根据权利要求7或8所述的低氧刺激用容器，其中，
11.根据权利要求7或8所述的低氧刺激用容器，包括：
12.根据权利要求7或8所述的低氧刺激用容器，其中，
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种细胞制剂的制造方法，通过对外周血单核细胞给予低氧低糖刺激并将该外周血单核细胞转换为保护型来制造用于促进血管新生或轴索伸展的细胞制剂，其中，
2.根据权利要求1所述的细胞制剂的制造方法，其中，
3.根据权利要求1所述的细胞制剂的制造方法，其中，
4.根据权利要求1所述的细胞制剂的制造方法，其中，
5.根据权利要求1所述的细胞制剂的制造方法，其中，
6.根据权利要求1所...
【专利技术属性】
技术研发人员：金泽雅人，畠山公大，下畑享良，井川博史，尾前薫，
申请(专利权)人：公益财团法人神戸医疗产业都市推进机构，
类型：发明
国别省市：
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