【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及与seq id no.1和/或2的ace2杂交以降低ace2、ace2 mrna、ace2mrna前体(ace2 pre-mrna)或其组合的水平的寡核苷酸和包含此类寡核苷酸的药物组合物。该寡核苷酸和药物组合物分别用于预防和/或治疗病毒性疾病如covid-19的方法。
技术介绍
1、血管紧张素转换酶2(ace2)是一种含锌金属酶，其存在于细胞表面，所述细胞为例如位于肺、上呼吸道、动脉、心脏、肾脏和肠中的细胞。跨膜蛋白ace2包含n端肽酶m2结构域和c端collectrin肾氨基酸转运蛋白结构域。ace2是一种单通道i型膜蛋白，其酶活性结构域暴露在细胞表面。
2、ace2的主要功能是充当蛋白酶并平衡血管紧张素转换酶(ace)。ace将血管紧张素i激素裂解为收缩血管的血管紧张素ii。之后，ace2从血管紧张素ii(asp-arg-val-tyr-ile-his-pro-phe)上裂解羧基末端氨基酸苯丙氨酸，并将其水解成血管扩张剂血管紧张素(1-7)，(h-asp-arg-val-tyr-ile-his-pro-oh)。因此，ace2作为肾素-血管紧张素系统(ras)中的拮抗剂，主要负责人体体液平衡和血压调节。
3、ace2还可以切割多种肽，包括[des-arg9]-缓激肽、艾帕素、神经降压素、强啡肽a，和促生长激素释放素，并调节中性氨基酸转运蛋白slc6a19的膜运输。
4、此外，ace2在冠状病毒等病毒感染中起着重要作用。冠状病毒的外部刺突s1蛋白与宿主细胞表面ace2的酶促结构域
5、sars-cov-2可在在相对较短的时间内演变成一种大流行病毒，可能会导致严重的疾病症状，并已成为2020年的主要死亡原因，尤其是在人口稠密地区。
6、存在治疗方法，例如使用瑞德西韦抑制病毒rna聚合酶，其有助于缩短具有sars-cov-2感染的严重疾病进展的患者的康复时间(beigel j.h.nejm 2020)。然而，此类治疗方法不包含或阻止病毒的大流行传播或导致宿主对象的免疫，而仅抑制已感染对象中的病毒繁殖。
7、已进行了重点为研究针对sars-cov-2的疫苗的广泛的研究。然而，大多数候选疫苗目前仍处于试验阶段，即使有些疫苗处于已经进入或正在进入市场的阶段。无论如何，疫苗都必须首先证明诱导的免疫反应足以预防sars-cov-2感染，或在广泛的世界人口中降低疾病进展的严重程度。除此之外，在成功准入候选疫苗后，将需要数月至数年的时间为整个人群生产足够的疫苗量。此外，病毒的突变可能导致良好的候选疫苗的效力突然丧失。
8、因此，迫切需要替代治疗方法来预防和治疗冠状病毒感染等病毒性疾病。
9、可以考虑rna干扰(rnai)，它是宿主细胞固有地用于破坏细胞内rna病毒的强大生物过程。然而，sirna的活性完全依赖于递送系统。在体外，例如需要转染试剂如lipofectamine。在体内的情况下，典型的偶联被(conjugations)用于sirna的细胞特异性摄取。由于细胞特异性递送系统的可用性目前有限(目前只有用于靶向肝细胞的galnac修饰具有临床相关性)，sirna的适用性仅限于这些细胞类型。此外，rnai的作用机制发生在细胞质中。因此，sirna只能靶向细胞质中的rnas，例如mrna。
10、与此相对，单链aso不需要递送系统(例如转染试剂或偶联)以在许多细胞和器官中发挥体外或体内活性。裸aso被细胞以足够的量摄取，以实现序列特异性的靶向敲低(target knockdown)。此外，依赖于rnase h的aso的机制发生在细胞核中，大量扩展了rna的库(repertoire)或rna上可以靶向的区域。
11、verma et al.(front mol biosci.,2020；7:197)描述了用于预防和/或治疗covid-19的aso和重组ace2蛋白的组合，其中aso靶向sars-cov-2的高度保守区域，例如rna依赖性rna聚合酶(rdrp)、s蛋白和m蛋白。
12、由于ace2在sars-cov或sars-cov2等冠状病毒感染宿主细胞中的突出作用，通过反义寡核苷酸(aso)特异性介导抑制宿主细胞中ace2的表达是一种降低病毒感染风险和/或减少感染后的病毒载量的有前景的方法，并且不良副作用的风险非常低。
13、用aso直接靶向病毒会导致病毒可能因aso结合位点突变而逃避治疗的风险。因此，靶向不受病毒突变影响的宿主因子ace2是有利的。
14、迄今为止，不存在靶向ace2并且通过与ace2 mrna和/或mrna前体杂交分别高效减少和抑制ace2表达的aso。
15、本专利技术的aso在抑制ace2表达方面非常成功，代表了预防和/或治疗诸如冠状病毒感染(例如sars-cov-2)等病毒性疾病的有效治疗方法。
技术实现思路
1、本专利技术涉及寡核苷酸，所述寡核苷酸包含10至25个核苷酸或由10至25个核苷酸组成，其中至少一个核苷酸被修饰，与seq id no.1的血管紧张素转换酶2(ace2)的mrna和/或与seq id no.2的ace2的mrna前体杂交，导致与未经处理的对照相比，ace2、ace2 mrna、ace2mrna前体或其组合的水平降低30％至99％。核苷酸的修饰例如选自由桥接核酸如lna、ena、2'氟修饰的核苷酸、2o-甲基修饰的核苷酸、2o-甲氧基修饰的核苷酸、fana和它们的组合组成的组。
2、本专利技术的寡核苷酸与seq id no.1和/或seq id no.2的ace2杂交，其中所述寡核苷酸优选在杂交活性区内杂交，所述杂交活性区为39345位至40144位、28945位至29744位、22545位至23344位、9745位至10544位、12945位至13744位、34545位至35344位、36145位至36944位、38545位至39344位、24945位至25744位、36145位至36944位、19345位至20144位、14545位至15344位、30545位至31344位、24145位至24944位、16945位至17744位、145位至944位、21745位至22544位、20145位至20944位、37745位至38544位、945位至1744位、18545位至19344位、5745位至6544位、11345位至12144位、32945位至33744位、8945位至9744位、3345位至4144位、26545位至27344位、28145位至28944位、25745位至26544位、6545位至7344位、15345位至16144位、4145位至4944位、8145位至8944位、31345位至32144位、2545位至3344位、7本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.包含10至25个核苷酸的寡核苷酸，其中至少一个核苷酸被修饰，与SEQ ID NO.1的血管紧张素转换酶2(ACE2)的mRNA和/或与SEQ ID NO.2的ACE2的mRNA前体杂交，导致与未经处理的对照相比，ACE2、ACE2mRNA、ACE2mRNA前体或其组合的水平降低30％至99％。
2.根据权利要求1所述的寡核苷酸，其中所述核苷酸的修饰选自由桥接核酸如LNA、ENA、2'氟修饰的核苷酸、2O-甲基修饰的核苷酸、2O-甲氧基修饰的核苷酸、FANA和它们的组合组成的组。
3.根据权利要求1或2所述的寡核苷酸，其与SEQ ID NO.1和/或SEQ ID NO.2的ACE2杂交，其中所述寡核苷酸在杂交活性区外或在杂交活性区内杂交，所述杂交活性区为28945位至29744位、22545位至23344位、39345位至39928位、9745位至10544位、12945位至13744位、34545位至35344位、36145位至36944位、38545位至39344位、24945位至25744位、36145位至36944位、19345位至20144位、
4.根据权利要求1-3中任意一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含SEQ IDNO.100、SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.78、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.97、SEQ ID NO.22、SEQID NO.24、SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.61、SEQ ID NO.99、SEQ ID NO.29、SEQID NO.45、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.83、SEQ ID NO.41、SEQ ID NO.5、SEQID NO.85、SEQ ID NO.74、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.62、SEQ ID NO.87、SEQ ID NO.39、SEQID NO.4、SEQ ID NO.60、SEQ ID NO.48、SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.63、SEQ ID NO.104、SEQID NO.67、SEQ ID NO.92、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.103、SEQ ID NO.58、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.70、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.88、SEQ ID NO.59、SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.75、SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.56、SEQ ID NO.96、SEQ ID NO.53、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.84、SEQ IDNO.13、SEQ ID NO.69、SEQ ID NO.90、SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.89、SEQ ID NO.82、SEQ IDNO.102、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.55、SEQ ID NO.25、SEQ IDNO.23、SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.93、SEQ ID NO.66、SEQ ID NO.91、SEQ ID NO.51、SEQ IDNO.19、SEQ ID NO.71、SEQ ID NO.80、SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.73、SEQ ID NO.76、SEQ IDNO.27、SEQ ID NO.101、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.50、SEQ ID NO...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.包含10至25个核苷酸的寡核苷酸，其中至少一个核苷酸被修饰，与seq id no.1的血管紧张素转换酶2(ace2)的mrna和/或与seq id no.2的ace2的mrna前体杂交，导致与未经处理的对照相比，ace2、ace2mrna、ace2mrna前体或其组合的水平降低30％至99％。
2.根据权利要求1所述的寡核苷酸，其中所述核苷酸的修饰选自由桥接核酸如lna、ena、2'氟修饰的核苷酸、2o-甲基修饰的核苷酸、2o-甲氧基修饰的核苷酸、fana和它们的组合组成的组。
3.根据权利要求1或2所述的寡核苷酸，其与seq id no.1和/或seq id no.2的ace2杂交，其中所述寡核苷酸在杂交活性区外或在杂交活性区内杂交，所述杂交活性区为28945位至29744位、22545位至23344位、39345位至39928位、9745位至10544位、12945位至13744位、34545位至35344位、36145位至36944位、38545位至39344位、24945位至25744位、36145位至36944位、19345位至20144位、14545位至15344位、30545位至31344位、24145位至24944位、16945位至17744位、145位至944位、21745位至22544位、20145位至20944位、37745位至38544位、945位至1744位、18545位至19344位、5745位至6544位、11345位至12144位、32945位至33744位、8945位至9744位、3345位至4144位、26545位至27344位、28145位至28944位、25745位至26544位、6545位至7344位、15345位至16144位、4145位至4944位、8145位至8944位、31345位至32144位、2545位至3344位、7345位至8144位、12145位至12944位、20945位至21744位、13745位至14544位、4945位至5744位，或23345位至24144位。
4.根据权利要求1-3中任意一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含seq idno.100、seq id no.42、seq id no.78、seq id no.31、seq id no.97、seq id no.22、seqid no.24、seq id no.28、seq id no.16、seq id no.61、seq id no.99、seq id no.29、seqid no.45、seq id no.15、seq id no.30、seq id no.83、seq id no.41、seq id no.5、seqid no.85、seq id no.74、seq id no.26、seq id no.62、seq id no.87、seq id no.39、seqid no.4、seq id no.60、seq id no.48、seq id no.52、seq id no.63、seq id no.104、seqid no.67、seq id no.92、seq id no.14、seq id no.103、seq id no.58、seq id no.20、seq id no.70、seq id no.8、seq id no.10、seq id no.47、seq id no.88、seq id no.59、seq id no.33、seq id no.75、seq id no.34、seq id no.9、seq id no.56、seq id no.96、seq id no.53、seq id no.18、seq id no.32、seq id no.44、seq id no.84、seq idno.13、seq id no.69、seq id no.90、seq id no.57、seq id no.89、seq id no.82、seq idno.102、seq id no.3、seq id no.12、seq id no.17、s...
【专利技术属性】
技术研发人员：弗兰克·雅申斯基，安妮·沙黛瓦瑟，斯文·米歇尔，玛塔·露西亚·德洛斯·雷耶斯，理查德·克拉尔，张楠，克劳斯·巴赫特，文卫平，
申请(专利权)人：赛卡纳制药股份两合公司，
类型：发明
国别省市：
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