【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及多肽，尤其涉及一种鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽、制备方法及应用。
技术介绍
1、随着年龄的增长，人们不得不面对各种免疫缺陷疾病和免疫功能低下问题，这也使得免疫增强类药物的研究越来越受消费者关注，目前一些免疫增强类药物如咪喹莫特和左旋咪唑已经在临床上得到了应用。一方面，这些免疫增强类药物在一定程度上可以提高患者的免疫力，降低疾病感染的风险并辅助自身免疫病的治疗。而另一方面，其副作用和经济成本也给人们带来不少的担忧。从天然成分中开发的具有免疫活性的提取物成为近年来研究的热点。如jinyang cai等从人β-酪蛋白中提取分离的衍生肽bccy-1能够促进巨噬细胞的增殖以及激活信号通路(nf-κb和mapk)发挥免疫调节作用。家蚕蛹蛋白水解物中分离纯化鉴定出低分子量多肽(dhav)可以促进脾细胞的增殖以及刺激相关免疫因子的表达(il-6和il-12、nf-κb、细胞周期蛋白d1等)。
2、沙丁鱼(学名：sardina pilchardus)是鲱科、沙丁鱼属鱼类。为细长的银色小鱼，体长15～30厘米，头部无鳞，体侧圆鳞大小不一。分布于北纬14-68度的海洋区域中。沙丁鱼为近海暖水性鱼类，一般不见于外海和大洋。沙丁鱼食用价值很高，整体营养价值高，被大量捕捞运用于食品加工领域。沙丁鱼也是全球重要的经济鱼类，它们往往是远洋捕捞的重要产物。沙丁鱼中含有能防止心血管病的廿碳五烯酸，还含有核酸、牛磺酸及硒等多种营养成分，药用价值非常高。同时含有丰富的dha，对心血管有帮助。另外，富含磷脂即omega-3脂肪酸、蛋白质和钙。但由于此
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽、制备方法及应用，其能够以沙丁鱼等鱼类鱼鳞为原料，获得鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽的氨基酸序列，且制备的鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽具有良好的刺激免疫的作用。
2、为达到上述目的，本专利技术公开了一种鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽，其氨基酸序列为：qvpglyyf。
3、优选地，其分子量为986.14da。
4、上述鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽的制备方法，其包括以下步骤：
5、s1、预处理
6、去除沙丁鱼鱼鳞中的钙成分和非胶原蛋白，烘干备用；
7、s2、制备鱼鳞胶原蛋白肽
8、采用蛋白酶对预处理后的沙丁鱼鱼鳞进行酶解，酶解后灭酶，得到酶解液，酶解液离心处理，取上清液，对上清液进行分级过滤，收集分子量＜1kda的鱼鳞胶原蛋白肽，并冻干；
9、s3、序列鉴定
10、采用lc-ms/ms对鱼鳞胶原蛋白肽进行质谱测定，质谱测定的结果采用质谱分析软件分析，获得多条不重复多肽序列；
11、s4、预筛选
12、先筛选出肽链短且由2～10个氨基酸组成的多肽序列，然后通过将筛选出的多肽序列导入软件进行生物活性预测，筛选出评分大于0.75的多肽序列；
13、s5、虚拟筛选
14、通过软件将步骤s4筛选出的多肽序列与受体进行分子对接，筛选出与受体结合能力强的多肽序列，并进行毒性和admet预测；
15、s6、多肽合成
16、将步骤s5筛选出的多肽序列固相合成，即得沙丁鱼鱼鳞免疫调节肽。
17、优选地，步骤s1中，钙成分的去除为：将沙丁鱼鱼鳞按照料液比1：10～30加入乳酸溶液中浸泡1～2h，其中，乳酸溶液的浓度为0.5～1mol/l，浸泡完成后用水冲洗沙丁鱼鱼鳞至中性；将去除钙成分的沙丁鱼鱼鳞加入浓度为1～5％的nacl溶液中浸泡12～24h，料液比为1：10～30，浸泡完成后用水冲洗沙丁鱼鱼鳞至中性，即可滤去沙丁鱼鱼鳞中的非胶原蛋白；去除钙成分和非胶原蛋白的沙丁鱼鱼鳞在40～50℃下烘干。
18、优选地，步骤s1中，先将干制的沙丁鱼鱼鳞打碎后再进行钙成分和非胶原蛋白的去除；沙丁鱼鱼鳞浸泡乳酸溶液时还进行超声，超声功率为100～200w。
19、优选地，步骤s2中，先将预处理后的沙丁鱼鱼鳞按照料液比1:40～60加入蒸馏水中，然后调节ph至8.0～11.0，在40～50℃下预热10～60min；之后加入蛋白酶进行酶解，蛋白酶的添加量为4000～20000u/g，酶解3～7h；酶解结束后，于95～100℃下灭酶10～15min；灭酶结束后，待酶解液冷却至室温后，对酶解液进行离心处理，离心转速为3000～6000r/min，离心温度2～6℃，离心时间10～40min。
20、优选地，步骤s2中，上清液依次经过陶瓷膜、超滤膜和纳滤膜进行分级分离，得到＜1kda分子量的鱼鳞胶原蛋白肽。
21、优选地，步骤s5中，受体为tlr4蛋白。
22、此外，本专利技术还公开了上述鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽在下述至少一种情况中的应用：
23、(1)在提升巨噬细胞吞噬能力中的应用；
24、(2)在制备巨噬细胞吞噬能力促进剂中的应用；
25、(3)在促进巨噬细胞增殖中的应用；
26、(4)在制备巨噬细胞增殖促进剂中的应用；
27、(5)在提升巨噬细胞no释放、il-6、tnf-α及il-1β分泌量中的应用；
28、(6)在制备巨噬细胞no释放、il-6、tnf-α及il-1β分泌促进剂中的应用；
29、(7)在制备提升生物免疫力的药物中的应用；
30、(8)在制备提升生物免疫力的食品配料中的应用。
31、优选地，所述鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽的浓度为50～200μg/ml。
32、本专利技术具有以下有益效果：
33、本专利技术以沙丁鱼等鱼类的鱼鳞为原料，获得鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽的氨基酸序列，制备的鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽具有良好的刺激免疫的作用。本专利技术鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽以沙丁鱼鱼鳞为原料制备得到，废物利用，为沙丁鱼下脚料的高值化加工利用提供新思路，也为开发天然免疫调节产品拓展了资源。
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1.一种鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽，其特征在于，其氨基酸序列为：QVPGLYYF。
2.如权利要求1所述的鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽，其特征在于：其分子量为986.14Da。
3.如权利要求1或2所述的鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.如权利要求3所述的鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽的制备方法，其特征在于：步骤S1中，钙成分的去除为：将沙丁鱼鱼鳞按照料液比1：10～30加入乳酸溶液中浸泡1～2h，其中，乳酸溶液的浓度为0.5～1mol/L，浸泡完成后用水冲洗沙丁鱼鱼鳞至中性；将去除钙成分的沙丁鱼鱼鳞加入浓度为1～5％的NaCl溶液中浸泡12～24h，料液比为1：10～30，浸泡完成后用水冲洗沙丁鱼鱼鳞至中性，即可滤去沙丁鱼鱼鳞中的非胶原蛋白；去除钙成分和非胶原蛋白的沙丁鱼鱼鳞在40～50℃下烘干。
5.如权利要求4所述的鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽的制备方法，其特征在于：步骤S1中，先将干制的沙丁鱼鱼鳞打碎后再进行钙成分和非胶原蛋白的去除；沙丁鱼鱼鳞浸泡乳酸溶液时还进行超声，超声功率为100～200W。
6.如
7.如权利要求3所述的鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽的制备方法，其特征在于：步骤S2中，上清液依次经过陶瓷膜、超滤膜和纳滤膜进行分级分离，得到＜1kDa分子量的鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽。
8.如权利要求3所述的鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽的制备方法，其特征在于：步骤S5中，受体为TLR4蛋白。
9.如权利要求1所述的鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽在下述至少一种情况中的应用：
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于：所述鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽的浓度为50～200μg/mL。
...【技术特征摘要】
1.一种鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽，其特征在于，其氨基酸序列为：qvpglyyf。
2.如权利要求1所述的鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽，其特征在于：其分子量为986.14da。
3.如权利要求1或2所述的鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.如权利要求3所述的鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽的制备方法，其特征在于：步骤s1中，钙成分的去除为：将沙丁鱼鱼鳞按照料液比1：10～30加入乳酸溶液中浸泡1～2h，其中，乳酸溶液的浓度为0.5～1mol/l，浸泡完成后用水冲洗沙丁鱼鱼鳞至中性；将去除钙成分的沙丁鱼鱼鳞加入浓度为1～5％的nacl溶液中浸泡12～24h，料液比为1：10～30，浸泡完成后用水冲洗沙丁鱼鱼鳞至中性，即可滤去沙丁鱼鱼鳞中的非胶原蛋白；去除钙成分和非胶原蛋白的沙丁鱼鱼鳞在40～50℃下烘干。
5.如权利要求4所述的鱼类鱼鳞胶原免疫刺激肽的制备方法，其特征在于：步骤s1中，先将干制的沙丁鱼鱼鳞打碎后再进行钙成分和非胶原蛋白的去除；沙丁鱼鱼鳞浸泡乳酸溶液时还进行超声，超声功率为100～200w。
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【专利技术属性】
技术研发人员：刘淑集，刘智禹，苏永昌，陈晓婷，曾丽琴，许旻，廖登远，
申请(专利权)人：福建省水产研究所福建水产病害防治中心，
类型：发明
国别省市：
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