【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及艾草繁育，尤其涉及一种北艾遗传转化体系的构建方法。
技术介绍
1、艾草(artemisia argyi)是一种菊科蒿属多年生草本植物，广泛分布在亚洲。艾草全草药用，有温气血、逐寒湿、止血、温经、安胎等功效。艾叶晒干捣碎获得艾绒，不仅是制艾条供艾灸用的原料，而且也是制作印泥的原料。基于艾草取材简单、价格低廉、功效显著等特点，目前已被广泛研究和使用，然而多集中在其化学成分、药理作用等方向。
2、(艾)本草不著土产，但云生田野。宋时以汤阴复道(注:即现在汤阴县伏道镇)者为佳.....近代唯汤阴者谓之北艾。目前除应用得比较多的传统灸剂外，各种新型复方制剂也逐渐为大众所接受，不仅应用在临床，在日化、保健、美容等行业也发挥了很大的作用。由于汤阴北艾的多倍性和高度杂合性，使传统育种受到了有益性状定向改良难、育种范围狭窄等限制，且目前还未发现有北艾遗传转化体系的报道。本专利技术通过建立一种北艾遗传转化体系，为今后针对北艾的基因工程育种、创制新的种质资源奠定坚实基础。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于建立一种北艾遗传转化体系的构建方法，为今后针对北艾的基因工程育种、创制新的种质资源奠定坚实基础。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种北艾遗传转化体系的构建方法，包括如下步骤：
4、(1)切取无菌北艾组培苗的茎段进行扩繁，得到北艾幼苗，切取北艾幼苗茎段，作为受体材料；
5、(2
6、(3)将步骤(2)培养后的受体材料转移至芽诱导培养基中培养，得到抗性芽；
7、(4)将所述抗性芽转入生根培养基上培养，得到完整植株；
8、(5)将所述植株移栽培养后得到北艾遗传转化体系。
9、优选的，步骤(1)中所述北艾幼苗茎段的长度为1.3～1.7cm，所述北艾幼苗茎段保留有叶柄初的生长点。
10、优选的，步骤(2)中所述侵染液为含有乙酰丁香酮的lb培养基，所述乙酰丁香酮的浓度为1.95～1.98mg/ml，所述乙酰丁香酮与lb培养基混合的体积比为0.2:20～25；所述侵染液的ph为5.7～6.0；所述侵染的时间为8～12min，所述侵染时的温度为26～28℃，转速为180～200rpm。
11、优选的，步骤(2)中所述共培养基以ms培养基为基础含有iaa 0.1～1mg/l、ga30.01～0.1mg/l；所述共培养基培养的时间为2～3天。
12、优选的，步骤(2)中所述共培养基以ms培养基为基础含有iaa 1mg/l、ga30.1mg/l。
13、优选的，步骤(3)中所述芽诱导抗性培养基以ms培养基为基础含有6-ba 0.01～0.5mg/l、kt 0.1～0.5mg/l、naa 0.01～0.1mg/l、kan 45～55mg/l和头孢霉素200～400mg/l，ph＝5.7～6.0；步骤(3)中所述芽诱导抗性培养基的培养条件为：光照强度1800～2000lx，光周期为16h、光照8h黑暗，温度为24±2℃，时间为10～14天。
14、优选的，步骤(3)中所述芽诱导抗性培养基以ms培养基为基础含有6-ba 0.5mg/l、kt 0.5mg/l、naa 0.1mg/l、kan 45～55mg/l和头孢霉素200～400mg/l，ph＝5.7～6.0。
15、优选的，步骤(3)中所述生根培养基以ms培养基为基础含有naa 0.1～0.2mg/l、kan 45～55mg/l和头孢霉素200～400mg/l；光照强度1800～2000lx，光周期为16h、光照8h黑暗，温度为24±2℃，时间为20～21天。
16、优选的，步骤(3)中所述生根培养基以ms培养基为基础含有naa 0.1mg/l、kan 45～55mg/l和头孢霉素200～400mg/l。
17、本专利技术建立了一种北艾遗传转化体系的构建方法，包括用含有目的dna的重组根癌农杆菌侵染所述遗传转化受体材料，得到侵染后的外植体，通过共培养基、芽诱导培养基和生根培养基培养所述侵染后的外植体，得到转基因北艾植株。本专利技术具有操作简单、生长周期短、重复性好、转化方式统一简便、转化效率高、获得的转基因北艾植株遗传稳定性好等优点。为今后针对北艾的基因工程育种、创制新的种质资源奠定坚实基础。
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1.一种北艾遗传转化体系的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中所述北艾幼苗茎段的长度为1.3～1.7cm，所述北艾幼苗茎段保留有叶柄初的生长点。
3.如权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中所述侵染液为含有乙酰丁香酮的LB培养基，所述乙酰丁香酮的浓度为1.95～1.98mg/ml，所述乙酰丁香酮与LB培养基混合的体积比为0.2:20～25；所述侵染液的pH为5.7～6.0；所述侵染的时间为8～12min，所述侵染时的温度为26～28℃，转速为180～200rpm。
4.如权利要求3所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中所述共培养基以MS培养基为基础含有IAA 0.1～1mg/L、GA30.01～0.1mg/L；所述共培养基培养的时间为2～3天。
5.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中所述共培养基以MS培养基为基础含有IAA 1mg/L、GA30.1mg/L。
6.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)中所述芽诱导抗性培养
7.如权利要求6所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)中所述芽诱导抗性培养基以MS培养基为基础含有6-BA 0.5mg/L、KT 0.5mg/L、NAA 0.1mg/L、Kan 45～55mg/L和头孢霉素200～400mg/L，pH＝5.7～6.0。
8.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)中所述生根培养基以MS培养基为基础含有NAA 0.1～0.2mg/L、Kan 45～55mg/L和头孢霉素200～400mg/L；光照强度1800～2000lx，光周期为16h、光照8h黑暗，温度为24±2℃，时间为20～21天。
9.如权利要求8所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)中所述生根培养基以MS培养基为基础含有NAA 0.1mg/L、Kan 45～55mg/L和头孢霉素200～400mg/L。
...【技术特征摘要】
1.一种北艾遗传转化体系的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中所述北艾幼苗茎段的长度为1.3～1.7cm，所述北艾幼苗茎段保留有叶柄初的生长点。
3.如权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中所述侵染液为含有乙酰丁香酮的lb培养基，所述乙酰丁香酮的浓度为1.95～1.98mg/ml，所述乙酰丁香酮与lb培养基混合的体积比为0.2:20～25；所述侵染液的ph为5.7～6.0；所述侵染的时间为8～12min，所述侵染时的温度为26～28℃，转速为180～200rpm。
4.如权利要求3所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中所述共培养基以ms培养基为基础含有iaa 0.1～1mg/l、ga30.01～0.1mg/l；所述共培养基培养的时间为2～3天。
5.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中所述共培养基以ms培养基为基础含有iaa 1mg/l、ga30.1mg/l。
6.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)中所述芽诱导抗性培养基以ms培养基为基础含有6-ba 0.01～0.5mg/...
【专利技术属性】
技术研发人员：崔宇鹏，张坤朋，郭可栋，王静，郜新强，
申请(专利权)人：安阳工学院，
类型：发明
国别省市：
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