【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及兽用医疗技术与药物开发，尤其是针对国内猪流行性腹泻病毒的感染起到检测和疾病治疗作用一种猪流行性腹泻病毒单克隆中和抗体。
技术介绍
1、猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,pedv)是一种严重的，具有高度传染性的猪肠道传染性疾病，主要症状包括厌食、呕吐、水样腹泻等。pedv于1971年在英国首次被发现，经典毒株cv777于1977年在比利时得到病原鉴定。1973年中国首次报道了猪流行性腹泻，并在1984年鉴定pedv为ped病原体。自2010年来，pedv在欧洲、亚洲、美洲等国反复出现，在中国引起ped爆发的变异株尤其严重，初生仔猪的死亡率高达90％，给养猪业造成了巨大的经济损失。
2、pedv属于冠状病毒科α冠状病毒属(alphacoronavirus)，为单股正链rna基因组，全基因组长度为28kb，含有至少7个开放阅读框(orf1a，orf1b，orf2-orf6)。orf1a，orf1b编码病毒的非结构蛋白(non-structural protein，nsps)，这些nsps主要负责宿主细胞内的转录、翻译和病毒rna合成的调控。其余orfs位于病毒基因组的3’端，编码4种结构蛋白：150-220kda的糖基化刺突蛋白(spike protein,s)、7kda的包膜蛋白(envelope protein,e)、20～30kda的膜蛋白(membrane protein,m)、58kda的核衣壳蛋白(nucleocapsidprotein,n)和1种辅
3、我国于1995年开始用二联灭活苗或弱毒苗进行pedv和tgev的联合预防，但从2006年初开始，用pedv疫苗免疫过的猪群照常爆发ped。且近年来，ped仍在我国部分地区的养猪场中仍有流行，基于cv777的传统疫苗已不能对pedv感染提供有效的保护。虽然现有疫苗难以提供有效长期的防护作用，但疫苗接种是控制pedv感染的一种现实可行的方法。
技术实现思路
1、针对目前经典疫苗、减毒疫苗及灭活病毒对国内猪流行性腹泻疾病的保护力度有限，本专利技术的目的是：提供一种猪流行性腹泻病毒单克隆中和抗体及应用。
2、本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：
3、本专利技术人前期从河南省牧原集团有限公司获得一株pedv流行毒株的s1蛋白基因序列。并据此筛选获得一种猪流行性腹泻病毒单克隆中和抗体，所述猪流行性腹泻病毒单克隆中和抗体为mab-s1-1d12-7、mab-s1-2d8-8、mab-s1-2c10-1中的一种或多种；其中，mab-s1-1d12-7的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.25所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.29所示；mab-s1-2d8-8的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.26所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.30所示；mab-s1-2c10-1的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.25所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.29所示。
4、进一步地，单克隆抗体特异性识别pedv毒株s蛋白的s1区域。
5、所述的猪流行性腹泻病毒单克隆中和抗体的编码基因。
6、进一步地，mab-s1-1d12-7的重链和轻链的编码基因分别如seq id no.31和seqid no.34所示；mab-s1-2d8-8的重链和轻链的编码基因分别如seq id no.32和seq idno.35所示；mab-s1-2c10-1的重链和轻链的编码基因分别如seq id no.33和seq id no.36所示。
7、所述的猪流行性腹泻病毒单克隆中和抗体在制备猪流行性腹泻病毒检测试剂中的应用。
8、所述的猪流行性腹泻病毒单克隆中和抗体在制备治疗猪流行性腹泻试剂中的应用。
9、本专利技术的有益效果是：
10、1.本专利技术综合利用病毒学和免疫学等技术，制备了3种特异性识别pedv流行毒株的单克隆抗体。
11、2.本专利技术制备的3种单克隆抗体均可应用于pedv s1蛋白的检测。
12、3.本专利技术3种单克隆抗体对pedv感染的人肝癌细胞系huh 7细胞展现出良好的中和效果。
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1.一种猪流行性腹泻病毒单克隆中和抗体，其特征在于，所述猪流行性腹泻病毒单克隆中和抗体为Mab-S1-1D12-7、Mab-S1-2D8-8、Mab-S1-2C10-1中的一种或多种；其中，Mab-S1-1D12-7的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.25所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.28所示；Mab-S1-2D8-8的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.26所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.29所示；Mab-S1-2C10-1的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.27所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.30所示。
2.根据权利要求1所述的猪流行性腹泻病毒单克隆中和抗体，其特征在于，单克隆抗体特异性识别PEDV毒株S蛋白的S1区域。
3.权利要求1-2任一项所述的猪流行性腹泻病毒单克隆中和抗体的编码基因。
4.根据权利要求3所述的编码基因，其特征在于，Mab-S1-1D12-7的重链和轻链的编码基因分别如SEQ ID NO.31和SEQ ID NO.34所示；Mab-S
5.权利要求1或2所述的猪流行性腹泻病毒单克隆中和抗体在制备猪流行性腹泻病毒检测试剂中的应用。
6.权利要求1或2所述的猪流行性腹泻病毒单克隆中和抗体在制备治疗猪流行性腹泻试剂中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种猪流行性腹泻病毒单克隆中和抗体，其特征在于，所述猪流行性腹泻病毒单克隆中和抗体为mab-s1-1d12-7、mab-s1-2d8-8、mab-s1-2c10-1中的一种或多种；其中，mab-s1-1d12-7的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.25所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.28所示；mab-s1-2d8-8的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.26所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.29所示；mab-s1-2c10-1的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.27所示，轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.30所示。
2.根据权利要求1所述的猪流行性腹泻病毒单克隆中和抗体，其特征在于，单克隆抗体特异性识别pedv毒...
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