LIGHT蛋白作为采用细胞毒性法检测IFN-γ生物活性的辅助试剂的应用制造技术

本发明专利技术公开了LIGHT蛋白作为采用细胞毒性法检测IFN‑γ生物活性的辅助试剂的应用。还公开了联用LIGHT蛋白检测IFN‑γ生物活性的方法，以及相应的检测试剂盒。本发明专利技术建立了一种针对IFN‑γ的细胞毒生物活性的生物活性检测方法，通过IFN‑γ与LIGHT蛋白的联合使用来增强细胞毒性，提高了检测过程中HT‑29细胞对IFN‑γ细胞毒性的敏感度，显著提高了检测结果的准确性和灵敏度，缩短了检测时间，改善了其重现性。该方法快速，高效，可重复性高，成本较低，易推广，适合高通量作业，能够满足IFN‑γ的生产及研发过程中，对IFN‑γ的筛选、产品放行以及稳定性评价的需要。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术专利涉及light蛋白作为采用细胞毒性法检测ifn-γ生物活性的辅助试剂的应用，及相应的检测方法和检测ifn-γ生物活性的试剂盒，属于生物。

技术介绍

1、干扰素γ(interferon-gamma，ifn-γ)是一种二聚体可溶性细胞因子，由辅助性t细胞(特别是th1细胞)、细胞毒性t细胞(tc细胞)、巨噬细胞、粘膜上皮细胞和nk细胞分泌，具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能等作用。目前在临床上已经被运用在抗肝纤维化、抗肿瘤、治疗类风湿性关节炎、治疗耐多药结核病、治疗皮肤性病等领域，有着广泛的应用前景。在体外表达制备ifn-γ过程中，为了便于从大量候选克隆中筛选到能够表达具有生物活性细胞因子的目标克隆，或者是基于该细胞因子的产品放行或稳定性研究，研究人员需要建立快速、高效的体外检测手段用于准确评价ifn-γ的生物学活性。生物活性体外检测方法可以基于elisa等结合实验或细胞学实验。elisa等结合实验主要考察ifn-γ与受体的结合能力，细胞学实验则除了考察ifn-γ与受体的结合能力外还可评价ifn-γ与受体结合之后的生物学功能，基于细胞水平的活性检测本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.LIGHT蛋白作为采用细胞毒性法检测IFN-γ生物活性的辅助试剂的应用。

2.一种联用LIGHT蛋白检测IFN-γ生物活性的方法，其特征在于其步骤包括：

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤(1)中培养基为McCoy's 5A培养基，样品稀释液中含5ng/mL-20ng/mL LIGHT。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤(1)中培养基为McCoy's 5A培养基，样品稀释液中含2％-10％体积比的FBS。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤(1)中参考品和供试品的稀释浓度为0.006～400ng/mL。<...

【技术特征摘要】

1.light蛋白作为采用细胞毒性法检测ifn-γ生物活性的辅助试剂的应用。

2.一种联用light蛋白检测ifn-γ生物活性的方法，其特征在于其步骤包括：

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤(1)中培养基为mccoy's 5a培养基，样品稀释液中含5ng/ml-20ng/ml light。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤(1)中培养基为mccoy's 5a培养基，样品稀释液中含2％-10％体积比的fbs。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤(1)中参考品和供试品的稀释浓度为0.006～400ng/ml。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤(2)中将细胞悬液中的细胞浓度调整到2.0～3.0×104个/ml后再铺板。

7.根据权利要求2所述的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：易红飞，孙祥祥，
申请(专利权)人：翌圣生物科技上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：