【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及检测钙蛋白酶的活性的荧光探针。
技术介绍
1、钙蛋白酶是以ca2+依赖性的方式被活化的半胱氨酸蛋白酶，是通过底物蛋白质的限制切割来调节该蛋白质的功能或结构的调节剂分子。钙蛋白酶被报道与各种生命现象相关，而另一方面，其活性或其基因的致病性突变与神经退行性疾病、心脏和肌肉疾病、缺血性疾病、癌症、眼部疾病等各种疾病有关。此外，还存在钙蛋白酶对于病原体的生存或感染等至关重要的感染症，例如已知疟疾、锥虫病、血吸虫病(schistosomiasis)等也与钙蛋白酶有关。因此，在钙蛋白酶相关病的诊断或疾病机理的分析/药物开发研究中，使钙蛋白酶的活性可视化很重要。
2、为了实时检测钙蛋白酶活性，荧光成像法是有用的手段。特别是作为不依赖于基因导入检测活细胞中的钙蛋白酶活性的手段，目前为止开发出了利用香豆素(非专利文献1)或羟甲基罗丹明绿(hydroxymethyl rhodamine green，hmrg)(专利文献1)这样的有机小分子的荧光探针。
3、特别是作为绿色的荧光探针，报道了使肽与作为荧光色素的羟甲基罗丹明绿(hmrg)结合得到的探针(专利文献1、非专利文献2)。hmrg探针的特征在于，在酶不存在时为无荧光性的，荧光底物通过与酶反应而变成荧光性的。
4、现有技术文献
5、专利文献
6、专利文献1：国际公开公报wo2016/137004
7、非专利文献
8、非专利文献1：the journal of biologicaclh(1993)268
9、非专利文献2：bioconjugate chemistry(2020)31：2241－2251
技术实现思路
1、专利技术所要解决的技术问题
2、专利文献1中记载的现有的hmrg探针在酶存在下的荧光强度仍有改善的余地。本专利技术的目的在于提供高灵敏度地检测钙蛋白酶酶活性的荧光探针。
3、用于解决技术问题的技术方案
4、本专利技术的专利技术人发现通过提高钙蛋白酶与荧光探针的反应性，钙蛋白酶活性的检测灵敏度提高，更具体而言，通过在荧光探针上以酰胺键结合有肽的钙蛋白酶探针的基本骨架中，在肽链的n末端结合具有与氧原子结合的α碳的酰胺基，来与钙蛋白酶的酶反应性提高。
5、本专利技术涉及下述的通式(i)所示的化合物或其盐(以下，有时也称为“化合物(i)”)：
6、
7、[式中，a和b分别独立地表示相同或不同的氨基酸残基，
8、其中，a与结合于a的nh之间的键为a的c末端与该nh之间的酰胺键，a和b以酰胺键结合，且b与结合于b的羰基(c＝o)之间的键为b的n末端与该羰基(c＝o)之间的酰胺键；
9、r1相同或不同，表示与苯环结合的取代基；
10、p表示0～4的整数；
11、r2、r3、r4、r5、r6和r7分别独立地表示氢原子、羟基(oh基)、卤原子、或者可以被取代的直链、支链或环状烷基；
12、r8和r9分别独立地表示氢原子、或者可以被取代的直链、支链或环状烷基，或者r8和r9可以结合形成环，或者r3和r8可以结合形成环，和/或r4和r9可以结合形成环；
13、x表示直链或支链c1～c3亚烷基；
14、r10和r11分别独立地表示氢原子、羟基(oh)、烷氧基、或者可以被取代的直链、支链或环状烷基，或者r10和r11可以结合形成环；
15、r12表示氢原子；可以被取代的直链、支链或环状烷基；可以被取代的直链或支链烯基；可以被取代的直链或支链炔基；可以被取代的芳基；或者可以被取代的杂环基，或者可以与r10或r11结合形成环；
16、l表示酰胺键、酯键、或－(直链或支链亚烷基－o－)n－(n为1～10的整数)，或者表示单键。]
17、在化合物(i)中，r1表示结合于苯环的取代基。p为0～4的整数，可以为0～3、0～2、0～1、1或0。作为r1，例如能够列举可以被取代的直链或支链烷基；可以被取代的直链或支链烷氧基；卤原子；可以被取代的氨基；取代甲硅烷基；或酰基等，不限定于这些。在p为2以上的情况下，多个r1分别可以相同也可以不同。
18、在r8与r9结合形成环的情况下、r3与r8结合形成环的情况下、r4与r9结合形成环的情况下、r10与r11结合形成环的情况下，该环可以包含杂原子(氧原子、氮原子、硫原子等)，例如可以为环烷基或环状醚。在r12与r10或r11结合形成环的情况下，该环可以为环状醚。另外这些环可以形成为3～14元、3～10元、3～8元、或3～6元环。
19、在本说明书整体中，作为烷基或其他基团的烷基部分中的取代基，能够列举：卤原子、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、巯基、烷基巯基、磺酰基、烷基磺酰基、烷氧基、环状醚基、羧基、烷基羰基、烷氧基羰基、烷氧基羰基氨基、烷基羰基氧基、烷基氨基羰基、烷基羰基氨基、羰基氨基、肼基。在烷基被取代的情况下，该取代基的数量例如可以设为1～6个、1～5个、1～4个、1～3个、1～2个、1个、2个或3个。
20、作为氨基中的取代基，可以为可以被取代的直链或支链烷基。在氨基被取代的情况下，该取代基的数量可以设为1～2个、1个或2个。
21、作为取代甲硅烷基的取代基，可以为可以被取代的直链或支链烷基或可以被取代的苯基。甲硅烷基的取代基的数量例如可以设为1～4个、1～3个、1～2个、1个、2个、3个或4个。
22、在通式(i)中，氨基酸只要是可以利用钙蛋白酶切断的氨基酸即可，可以为天然存在的氨基酸或其衍生物，例如可以为天然氨基酸的立体异构体。作为氨基酸，例如可以为met、ser、ala、thr、val、tyr、leu、asn、ile、gln、pro、asp、phe、glu、trp、lys、cys、arg、gly、his(以上，以氨基酸三字母记号表示)、正亮氨酸(nle)、或甲硫氨酸亚砜(meto)。
23、在本说明书中，“烷基”或其他基团中的“烷基”部分是指直链、支链或环状的饱和烃基，优选为碳原子数为1～6个的饱和烃基，例如，可以列举甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、异丁基、戊基、异戊基、2,3－二甲基丙基、己基、环丙基、环丁基、环戊基和环己基等，更优选为c1～5烷基，例如，可以列举甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、异丁基、戊基、异戊基、或2,3－二甲基丙基。更加优选为c1～3烷基，例如为甲基、乙基、正丙基和异丙基，最优选为甲基或乙基。另外，“亚烷基”为通过从上述烷基去掉1个氢原子而得到的2价基团。
24、“烷氧基”是上述烷基经由氧原子进行结合的基团((烷基)－o－基)，该烷基部分如上述所定义。例如烷氧基中，烷基部分的碳原子数可以为1～6个。作为烷氧基，例如，可以列举甲氧基、乙氧基、1－丙氧基、2－丙氧基、2－甲基－1－丙氧基、2－甲基－2－丙氧基本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种下述的通式(I)所示的化合物或其盐：
2.如权利要求1所述的化合物或其盐，其特征在于：
3.如权利要求1所述的化合物或其盐，其特征在于：
4.如权利要求1所述的化合物或其盐，其特征在于：
5.如权利要求1～权利要求4中任一项所述的化合物或其盐，其特征在于：
6.如权利要求1～权利要求5中任一项所述的化合物或其盐，其特征在于：
7.如权利要求1～权利要求6中任一项所述的化合物或其盐，其特征在于：
8.如权利要求1所述的化合物或其盐，其特征在于：
9.一种荧光探针，其特征在于：
10.如权利要求9所述的荧光探针，其特征在于：
11.一种样品中的钙蛋白酶活性的测定方法，其特征在于，包括：
12.一种与钙蛋白酶活性相关的疾病的诊断用组合物，其特征在于，包含：
13.如权利要求12所述的诊断用组合物，其特征在于：
14.如权利要求13所述的诊断用组合物，其特征在于：
15.如权利要求14所述的诊断用组合物，其特征在于
16.如权利要求13所述的诊断用组合物，其特征在于：
17.一种提供用于诊断哺乳类对象的与钙蛋白酶活性相关的疾病的信息的方法，其特征在于，包括：
18.一种用于判定候补化合物对与钙蛋白酶活性相关的疾病的治疗效果的试验方法，其特征在于，包括：
19.一种提供用于监测哺乳类对象的与钙蛋白酶活性相关的疾病的信息的方法，其特征在于，包括：
20.如权利要求9所述的荧光探针，其特征在于：
21.如权利要求9所述的荧光探针，其特征在于：
22.如权利要求9所述的荧光探针，其特征在于：
23.如权利要求9所述的荧光探针，其特征在于：
24.一种胰液检测用试剂盒，其特征在于：
25.一种含有钙蛋白酶抑制剂作为有效成分的用于治疗或预防与钙蛋白酶活性相关的疾病的医药组合物，其特征在于：
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种下述的通式(i)所示的化合物或其盐：
2.如权利要求1所述的化合物或其盐，其特征在于：
3.如权利要求1所述的化合物或其盐，其特征在于：
4.如权利要求1所述的化合物或其盐，其特征在于：
5.如权利要求1～权利要求4中任一项所述的化合物或其盐，其特征在于：
6.如权利要求1～权利要求5中任一项所述的化合物或其盐，其特征在于：
7.如权利要求1～权利要求6中任一项所述的化合物或其盐，其特征在于：
8.如权利要求1所述的化合物或其盐，其特征在于：
9.一种荧光探针，其特征在于：
10.如权利要求9所述的荧光探针，其特征在于：
11.一种样品中的钙蛋白酶活性的测定方法，其特征在于，包括：
12.一种与钙蛋白酶活性相关的疾病的诊断用组合物，其特征在于，包含：
13.如权利要求12所述的诊断用组合物，其特征在于：
14.如权利要求1...
【专利技术属性】
技术研发人员：中泽彻，铃木悠记，冈隆之，内田孝俊，
申请(专利权)人：东北泰克诺亚奇股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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