【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于阴香内参基因的，具体涉及一种阴香在不同条件下稳定表达的内参基因及其应用。
技术介绍
1、阴香(cinnamomum burmannii，c.burmnnii)是樟科肉桂属植物，是一种重要的芳香药用和绿化树种，主要分布于广东、广西和福建三省。阴香叶片中含有多种挥发性化合物，广泛的研究表明阴香具有潜在的健康益处，如抗菌、抗氧化、抗糖尿病和抗肿瘤等。这其中特别是冰片型精油由于冰片具有较好的渗透性和抗菌性能是化妆品和医药的重要原料。在过去的几十年里，对阴香的研究主要集中在化合物提取、成分分析和生物活性等方面，而对其基因调控的研究则比较有限，这在一定程度上阻碍了该作物的遗传改良。了解该作物的生物学功能对进一步的分子育种具有十分重要的意义，准确的基因表达分析将为了解生长发育的分子生物学机制，以及信号转导和代谢提供有力而有价值的途径。而根据所知目前还没有关于阴香的系统的内参基因筛选的报道。
2、理想情况下选定的内参基因在各种组织、细胞和实验条件下的表达水平应该是相对恒定的，然而多个报道表明很难找到一个适用于所有条件的单一内参基因，例如常用的内参基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gapdh)在carex rigescens中盐处理条件下被选为稳定性最好的基因，但在salsola ferganica 6种非生物胁迫下和在betula platyphylla中盐和渗透胁迫条件下就不适合。此外，在uv-b胁迫下的solanum lycopersicum中，肌动蛋白(act)作为叶片的最佳内参基因，但在大多数pecan实验中，其稳定
3、因此，为了提高基因表达分析的可靠性，研究阴香的内参基因选择是非常有必要的。
技术实现思路
1、针对上述问题，本专利技术的目的在于提供一种阴香在不同条件下稳定表达的内参基因及其应用。
2、本专利技术的
技术实现思路
如下：
3、本专利技术提供了一种阴香在不同条件下稳定表达的内参基因，所述内参基因包括act7、cpn60β、ef1α、eif-5a、gapdh、giiα、his、ra、rpl27、rps15、tata、tub、apt，在不同条件下的基因表达稳定性不同，
4、阴香在盐胁迫(nacl)处理和干旱(peg)处理的条件下表达稳定性最佳的内参基因组为rpl27和rps15；
5、阴香在冷处理的条件下表达稳定性最佳的内参基因组为rpl27和apt；
6、阴香在不同组织中的条件下表达稳定性最佳的内参基因组为ef1α和act7；
7、阴香不同龙脑无性系的条件下表达稳定性最佳的内参基因组为eif-5a和gllα；
8、阴香在不同发育阶段的条件下表达稳定性最佳的内参基因组为rps15和act7；
9、阴香在综合条件下，综合表达表达稳定性最佳的内参基因组为rps15和tata；
10、以上所述各组基因的id如表1所示。
11、所述各内参基因用于实时荧光定量pcr分析时所使用的引物对的核酸序列分别如seq id no.1～26所示；
12、act7的引物对
13、f(seq id no.1)：caacccaaaagccaacagg
14、r(seq id no.2)：tcacccgagtccagaacaatac
15、cpn60β的引物对
16、f(seq id no.3)：caacaaggatgggctggcta
17、r(seq id no.4)：ttggccacagtcactccatc
18、ef1α的引物对
19、f(seq id no.5)：ggtacaagggcccaactctc
20、r(seq id no.6)：ctggagagcttcatggtgca
21、eif-5a的引物对
22、f(seq id no.7)：ccaagtgtcactttgtggcg
23、r(seq id no.8)：agtggggagcctcagatcat
24、gapdh的引物对
25、f(seq id no.9)：aagggtggtgccaagaaagt
26、r(seq id no.10)：gttgcagtgatggagtggacag
27、giiα的引物对
28、f(seq id no.11)：ccttatcgccttttcaacctt
29、r(seq id no.12)：agcgtatcaatccgccctc
30、his的引物对
31、f(seq id no.13)：ggagggaaggctcctaggaa
32、r(seq id no.14)：caactgttccagggcggtat
33、ra的引物对
34、f(seq id no.15)：acagaccgacaaggacaaatgg
35、r(seq id no.16)：cggagacccgtgctcaagtat
36、rpl27的引物对
37、f(seq id no.17)：gccgtcatcgtacgatcctt
38、r(seq id no.18)：tgccgtcttctttgcagagt
39、rps15的引物对
40、f(seq id no.19)：gcagccgaagaggagaaca
41、r(seq id no.20)：ggcttccgcttcaaaccac
42、tata的引物对
43、f(seq id no.21)：ccgtaatgcagagtataacccc
44、r(seq id no.22)：tttgacatcacaagagcccac
45、tub的引物对
46、f(seq id no.23)：tgggaataactgggctaaggg
47、r(seq id no.24)：aagcatcatccgatcagggta
48、apt的引物对
49、f(seq id no.25)：tgcttgatcccgaggcattt
50、r(seq id no.26)：acttcgaaccaagggccaaa
51、所述内参基因的筛选方法为采用δct、genorm、normfinder和bestkeeper对基因稳定性进行评价，并根据几何均值对结果进行进一步排序，筛选出不同实验条件下最优的内参基因。
52、本专利技术还提供了一种阴香在不同条件下稳定表达的内参基因在阴香分子遗传机制研究的应用。
53、本专利技术的有益效果如下：
54、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种阴香在不同条件下稳定表达的内参基因，其特征在于，所述内参基因包括ACT7、Cpn60β、EF1α、eIF-5A、GAPDH、GIIα、HIS、RA、RPL27、RPS15、TATA、TUB、APT，在不同条件下的基因表达稳定性不同。
2.根据权利要求1所述的阴香在不同条件下稳定表达的内参基因，其特征在于，阴香在盐胁迫(NaCl)处理和干旱(PEG)处理的条件下表达稳定性最佳的内参基因组为RPL27和RPS15。
3.根据权利要求1所述的阴香在不同条件下稳定表达的内参基因，其特征在于，阴香在冷处理的条件下表达稳定性最佳的内参基因组为RPL27和APT。
4.根据权利要求1所述的阴香在不同条件下稳定表达的内参基因，其特征在于，阴香在不同组织中的条件下表达稳定性最佳的内参基因组为EF1α和ACT7。
5.根据权利要求1所述的阴香在不同条件下稳定表达的内参基因，其特征在于，阴香不同龙脑无性系的条件下表达稳定性最佳的内参基因组为eIF-5A和Gllα。
6.根据权利要求1所述的阴香在不同条件下稳定表达的内参基因，其特征在于
7.根据权利要求1所述的阴香在不同条件下稳定表达的内参基因，其特征在于，阴香在综合条件下，综合表达表达稳定性最佳的内参基因组为RPS15和TATA。
8.根据权利要求1所述的阴香在不同条件下稳定表达的内参基因，其特征在于，所述各内参基因用于实时荧光定量PCR分析时所使用的引物对的核酸序列分别如SEQ ID NO.1～26所示。
9.根据权利要求1所述的阴香在不同条件下稳定表达的内参基因，其特征在于，所述内参基因的筛选方法为采用ΔCt、geNorm、NormFinder和BestKeeper对基因稳定性进行评价，并根据几何均值对结果进行进一步排序，筛选出不同实验条件下最优的内参基因。
10.一种权利要求1-9任一项所述阴香在不同条件下稳定表达的内参基因在阴香分子遗传机制研究的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种阴香在不同条件下稳定表达的内参基因，其特征在于，所述内参基因包括act7、cpn60β、ef1α、eif-5a、gapdh、giiα、his、ra、rpl27、rps15、tata、tub、apt，在不同条件下的基因表达稳定性不同。
2.根据权利要求1所述的阴香在不同条件下稳定表达的内参基因，其特征在于，阴香在盐胁迫(nacl)处理和干旱(peg)处理的条件下表达稳定性最佳的内参基因组为rpl27和rps15。
3.根据权利要求1所述的阴香在不同条件下稳定表达的内参基因，其特征在于，阴香在冷处理的条件下表达稳定性最佳的内参基因组为rpl27和apt。
4.根据权利要求1所述的阴香在不同条件下稳定表达的内参基因，其特征在于，阴香在不同组织中的条件下表达稳定性最佳的内参基因组为ef1α和act7。
5.根据权利要求1所述的阴香在不同条件下稳定表达的内参基因，其特征在于，阴香不同龙脑无性系的条件下表达稳定性最佳的内参基因组为eif-5a和gll...
【专利技术属性】
技术研发人员：尧俊，石玲玲，何波祥，张谦，林善枝，蔡燕灵，
申请(专利权)人：广东省林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：
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