【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于体外检测，具体涉及一种检测呼吸道病毒抗原的荧光免疫层析试剂盒及其制备方法。
技术介绍
1、侧流免疫层析(lfia)是在20世纪80年代初出现的一种新型免疫分析方法。由于其简便、快速和低成本的特点，它已经成为医疗检测和家庭测试领域日益重要的即时检测(poct)设备。侧流免疫层析已经应用于多个领域，如孕激素、毒品、兴奋剂、慢性疾病、传染病等的检测。其应用范围不断扩大，对于快速、便捷的生物分子检测具有重要意义。
2、目前应用最广泛的现场快速检测(point-of-care testing,poct)技术是胶体金免疫层析法，该技术以简便、快速、半定量等优点被视为目前最有潜力的现场快速检测工具，且操作简便，可在15min左右报告结果，非常适合现场快速检测。但胶体金免疫层析法的灵敏度较低，为了提高检测灵敏度，近年来，越来越多的新型纳米材料被用作免疫产品标记物，如纳米荧光染料、上转换纳米颗粒、量子点微球、时间分辨荧光微球和纳米磁珠等。在这些材料中，荧光量子点微球(quantum dot microsphere nanobeads，qbs)具备光稳定性好、荧光强度高、发射波长可调等优越的发光性能，且在量子点表面修饰-cooh、-nh2等不同的官能团后很容易与抗体等生物大分子进行偶联。时间分辨荧光微球结合了微球技术的颗粒特性和时间分辨荧光技术的高特异性和灵敏度，可用于各种生物学和医学研究应用，特别是在检测低浓度生物分子和研究生物分子的动态行为方面非常有用。因此，基于量子点/时间分辨荧光微球标记的免疫层析产品的灵敏度与稳定
3、传统免疫层析法将标记探针固定于结合垫上，上样后随着层析的推进，样本中的待检物与探针进行反应，但是反应时间比较短且往往不能完全反应，这也是造成免疫层析法灵敏度低的一个重要原因。这使得不断提高lfia的灵敏度成为即时检测领域亟待解决的问题之一。目前市场上也有体系外反应的检测试剂盒，但是探针都是液体形态，导致产品需要低温保存且有效期短，给使用者带来严重不便。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种检测呼吸道病毒抗原的荧光免疫层析试剂盒，该试剂盒不仅能够实现多种目标物的即时检测，还能够长效低温保存且不影响其检测效果。
2、本专利技术提供了一种检测呼吸道病毒抗原的荧光免疫层析试剂盒，包括多重检测试纸条，所述多重检测试纸条包括背板和在所述背板的一面由下向上依次设置的加样区、检测区和吸水区；所述检测区根据目标病毒的数量设置若干条检测线，所述呼吸道感染病毒包括以下病毒中的至少一种：新型冠状病毒(sars-cov-2)、腺病毒(adv)和甲型流感病毒(iva)；所述检测线各包被以下任意一种不同的抗体：抗新型冠状病毒抗体1、抗腺病毒抗体1和抗甲型流感病毒抗体1；
3、所述试剂盒还包括荧光微球标记的探针冻干粉；
4、所述荧光微球标记的探针冻干粉包含由荧光微球标记的抗新型冠状病毒抗体2、抗腺病毒抗体2和抗甲型流感病毒抗体2。
5、优选的，所述荧光微球标记的探针冻干粉是将由荧光微球标记的抗新型冠状病毒抗体2、荧光微球标记的抗腺病毒抗体2、荧光微球标记的抗甲型流感病毒抗体2、冻干保护剂和上样液混合，得到的混合液分装后冻干制备得到。
6、优选的，所述上样液为包括以下含量组分的水溶液：
7、0.05～0.15mol/l tris-hcl、体积浓度0.5％～2.5％tween-20、质量浓度1.2％～5.0％蔗糖、质量浓度1.0％～4.6％海藻糖、质量浓度0.1％～2.5％牛血清白蛋白和质量浓度0.1％～0.9％聚乙二醇20000，ph值为7.0～10.0。
8、优选的，每管所述混合液的体积为30μl；
9、所述由荧光微球标记的抗新型冠状病毒抗体2、抗腺病毒抗体2和抗甲型流感病毒抗体2在混合液中的总质量浓度为0.21％～0.39％。
10、优选的，所述冻干保护剂在混合液中的体积浓度为15％～75％。
11、优选的，所述冻干的方法为4℃预冻0.5-2h；-50℃冷冻2-5h；-30℃一次升华5～12h；25℃二次升华3～8h。
12、优选的，所述荧光微球为量子点荧光微球和/或时间分辨荧光微。
13、优选的，所述检测线上，抗新型冠状病毒抗体1的包被浓度为0.2～1.0mg/ml；
14、所述抗腺病毒抗体1的包被浓度为0.3～～1.5mg/ml；
15、所述抗甲型流感病毒抗体1的包被浓度为0.3～～1.2mg/ml。
16、优选的，样品区的材料在贴于背板前采用处理液处理；
17、所述处理液为包含质量浓度0.5％～3％nacl，质量浓度0.5％～3％bsa，质量浓度0.1％～2％pvp-10的0.05～0.3mol/l、ph值7.4tris-hcl水溶液。
18、本专利技术提供一种检测呼吸道病毒抗原的荧光免疫层析试剂盒，利用双抗体夹心法检测原理针对新型冠状病毒、腺病毒和甲型流感病毒三种呼吸道感染病毒进行多重检测，本专利技术与常规的免疫层析试纸条相比，将结合区上与检测目标物结合的探针标记物从试纸条上单独分离出，并制备成适合长期常温保存的探针冻干粉，使所述试剂盒在使用时可以将冻干探针和样本直接混合、孵育，增大探针捕获待测目标物的时间，从而提高检测灵敏度，进而提高检出率。同时多重检测试纸条能实现对多种目标检测物的鉴别检测和同步定量检测，有效提高检测效率。且检测操作流程简单、高效，能在15min内报告结果，适用于现场快速检测。
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1.一种检测呼吸道病毒抗原的荧光免疫层析试剂盒，包括多重检测试纸条，所述多重检测试纸条包括背板和在所述背板的一面由下向上依次设置的加样区、检测区和吸水区；所述检测区根据目标病毒的数量设置若干条检测线，其特征在于，所述呼吸道感染病毒包括以下病毒中的至少一种：新型冠状病毒、腺病毒和甲型流感病毒；所述检测线各包被以下任意一种不同的抗体：抗新型冠状病毒抗体1、抗腺病毒抗体1和抗甲型流感病毒抗体1；
2.根据权利要求1所述检测呼吸道病毒抗原的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述荧光微球标记的探针冻干粉是将荧光微球标记的抗新型冠状病毒抗体2、荧光微球标记的抗腺病毒抗体2、荧光微球标记的抗甲型流感病毒抗体2、冻干保护剂和上样液混合，得到的混合液分装后冻干制备得到。
3.根据权利要求2所述检测呼吸道病毒抗原的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述上样液为包括以下含量组分的水溶液：
4.根据权利要求2所述一种检测呼吸道病毒抗原的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，每管所述混合液的体积为30μl；
5.根据权利要求3所述检测呼吸道病毒抗原的荧光免疫层析试剂盒
6.根据权利要求2所述检测呼吸道病毒抗原的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述冻干的方法为4℃预冻0.5-2h；-50℃冷冻2-5h；-30℃一次升华5～12h；25℃二次升华3～8h。
7.根据权利要求1所述检测呼吸道病毒抗原的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述荧光微球为量子点荧光微球和/或时间分辨荧光微球。
8.根据权利要求1所述检测呼吸道病毒抗原的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述检测线上，抗新型冠状病毒抗体1的包被浓度为0.2～1.0mg/mL；
9.根据权利要求1～8中任意一项所述检测呼吸道病毒抗原的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，样品区的材料在贴于背板前采用处理液处理；
...【技术特征摘要】
1.一种检测呼吸道病毒抗原的荧光免疫层析试剂盒，包括多重检测试纸条，所述多重检测试纸条包括背板和在所述背板的一面由下向上依次设置的加样区、检测区和吸水区；所述检测区根据目标病毒的数量设置若干条检测线，其特征在于，所述呼吸道感染病毒包括以下病毒中的至少一种：新型冠状病毒、腺病毒和甲型流感病毒；所述检测线各包被以下任意一种不同的抗体：抗新型冠状病毒抗体1、抗腺病毒抗体1和抗甲型流感病毒抗体1；
2.根据权利要求1所述检测呼吸道病毒抗原的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述荧光微球标记的探针冻干粉是将荧光微球标记的抗新型冠状病毒抗体2、荧光微球标记的抗腺病毒抗体2、荧光微球标记的抗甲型流感病毒抗体2、冻干保护剂和上样液混合，得到的混合液分装后冻干制备得到。
3.根据权利要求2所述检测呼吸道病毒抗原的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述上样液为包括以下含量组分的水溶液：
4.根据权利要求2所述一种检测呼吸道病毒抗...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘琪琦，李小燕，周喆，王菲，赵昶旭，侯广争，丁艳磊，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：
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