【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于化妆品，具体涉及一种超分子蓝铜肽纳米复合物的制备方法和应用。
技术介绍
1、蓝铜肽中文别名为三胜肽-1铜，序列为ghk-cu，cu2+并不是铜金属的黄色，而是在水溶液中呈现蓝色，所以又称为蓝铜肽。铜以三胜肽ghk为载体，通过有效络合、转运铜元素而发挥相应的作用，cu与ghk二者相辅相成使蓝铜肽具有多重生物学效能：(1)修复：能够增加血管生长和抗氧化能力，并刺激葡萄糖聚胺(gags)产生，帮助皮肤恢复自我修补。(2)抗炎：ghk-cu对炎症反应有抑制作用，可减少促炎细胞因子包括tnf-α、tgf-β、il-6等。有效减轻炎症，减少激素引起的红肿、瘙痒、刺痛等问题依赖，并再生皮肤。(3)抗皱：有效阻止乙酰胆碱物质的神经传导，从而放松肌肉，改善动态性皱纹。
2、但在应用时，蓝铜肽因其高亲水性，很难被皮肤直接吸收；并且目前在对蓝铜肽的递送过程中，效率较低；稳定性不好，易失活、难配伍，例如不能和酸性物质(果酸、a酸、高浓度水溶性左旋vc、水杨酸等)一起使用；不能和过酸或者过碱性的成品搭配，过低或过高的ph均可导致ghk-cu的分解失效变色，失去作用。
3、针对蓝铜肽的渗透递送问题，cn 115838394 a公开了一种新型蓝铜肽的制备方法，采用在赖氨酸侧链进行脂肪酸修饰的方式，增加蓝铜肽的亲酯性，提高渗透性，其多肽结构为h-gly-his-lys(pal)-oh,所用原料fmoc-lys(dde)-oh价格昂贵，原料成本太高；cn115089500a公开了一种超分子蓝铜肽微乳液的制备方法，通过制备离子
4、针对蓝铜肽的稳定性问题，cn 115501134 a公开了一种蓝铜肽与透明质酸的复配方案，cn 115569085 a公开了一种离子液体包裹蓝铜肽的方案；现有技术一般是通过复合物复配或离子液体包裹的方式，提高蓝铜肽稳定性，但蓝铜肽自身稳定性并未得到解决。
5、因此，现有技术还有待于改进和发展。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题在于：提供一种超分子蓝铜肽纳米复合物及其制备方法，提高蓝铜肽的透皮吸收，同时提高原料稳定性，提升功效的同时，减少添加量，并应用于化妆品
2、为了达到上述目的，本专利技术所采用的技术方案包括以下步骤：
3、一种超分子蓝铜肽纳米复合物的制备方法及其应用，包括以下步骤：
4、(1)超分子蓝铜肽纳米复合物结构设计：保持蓝铜肽ghk-cu前体ghk三肽的主体结构，连接一段细胞穿膜肽，并进行肉豆蔻酰修饰，将多肽序列改构设计为肉豆蔻酰十二肽，其序列为：myr-rhkrhkrhkghk，在溶液中与cuso4溶液络合可得超分子蓝铜肽，序列为：myr-rhkrhkrhk[ghk-cu]，与透明质酸或其盐，pdrn(多聚脱氧核糖核苷酸、依克多因)等负电荷活性成分复配，得到超分子蓝铜肽纳米复合物，其结构为：myr-rhkrhkrhk[ghk-cu]-x，x为透明质酸等负电荷活性成分。
5、(2)肉豆蔻酰十二肽的制备：以2-ctc resin为载体，使用多肽固相有机合成技术，在n,n-二甲基甲酰胺体系中，以fmoc合成策略，使用肉豆蔻酰氯进行最后的氮端修饰，合成全保护肽树脂。全保护肽树脂在三氟乙酸作用下发生裂解同时脱除多肽侧链保护基，得到多肽粗品；使用反相制备液相色谱对多肽进行纯化，填料：c18，a相：0.1％tfa/h2o，b相：0.1％tfa/meoh，a相平衡上样，洗脱程序：25％-85％；60min，制备纯化后冻干，得到纯化多肽；
6、(3)超分子蓝铜肽的制备：将纯化的肉豆蔻酰十二肽溶于水，向溶液中加入硫酸铜溶液，搅拌反应1-2小时，将溶液倒入透析袋中，透析24h，冻干得到超分子蓝铜肽，序列为myr-rhkrhkrhk[ghk-cu]。
7、(4)超分子蓝铜肽纳米复合物的制备：配制10mg/ml-30mg/ml的超分子蓝铜肽溶液；配制负电荷活性物水溶液(透明质酸钠、pdrn、依克多因)，将一定量超分子蓝铜肽溶液滴加到负电荷活性物水溶液中，将超分子蓝铜肽浓度稀释为0.07mg/ml-1mg/ml；
8、(5)本专利技术制备的超分子蓝铜肽纳米复合物的结构表征：
9、使用透射电子显微镜进行表征，样品使用3％的磷钨酸负染色处理，超分子蓝铜肽复合物结构形态为纳米粒子，dls进行粒径表征。
10、(6)超分子蓝铜肽纳米复合物的功效验证：
11、渗透性测试：通过荧光显微镜观察荧光标记物质(分别为fitc@超分子蓝铜肽纳米复合物、fitc@蓝铜肽)在小鼠皮肤中的分布情况并统计样品荧光强度的变化，评价超分子蓝铜肽纳米复合物、蓝铜肽在处理不同时间点的皮肤渗透行为。通过荧光显微镜观察：与蓝铜肽相比，超分子蓝铜肽纳米复合物渗透性显著增强。
12、抗衰测试：基于人皮肤成纤维细胞，检测超分子蓝铜肽样品作用后细胞增殖的变化情况；采用紫外处理人皮肤成纤维细胞，通过检测i型胶原(collagen i)蛋白含量的变化情况，表明超分子蓝铜肽纳米复合物具有显著的抗衰、抗皱功效；
13、抗炎测试：基于小鼠巨噬细胞，检测超分子蓝铜肽纳米复合物、蓝铜肽分别作用后，促炎因子tnf-α的含量变化情况，表明超分子蓝铜肽纳米复合物具有显著的抗炎舒缓功效。
14、(7)超分子蓝铜肽纳米复合物的稳定性验证；
15、加速测试：将制备的超分子蓝铜肽纳米复合物在4℃、25℃、45℃、50℃、光照(uv)条件下进行加速实验，观察样品稳定性，样品外观无异常；
16、抗酶解测试：分别向超分子蓝铜肽纳米复合物、蓝铜肽溶液中加入氨肽酶，测试肽含量变化情况。结果表明：超分子蓝铜肽纳米复合物能够有效抑制多肽酶促降解过程；而蓝铜肽在氨肽酶作用下很快降解。
17、生理盐环境解离的测试：超分子蓝铜肽纳米复合物为纳米胶束结构，可快速穿透皮肤屏障，透皮后纳米胶束需要解离为多肽和透明质酸等负电荷活性物，才能进一步作用于细胞，发挥功效。通过模拟人体生理盐环境，对超分子蓝铜肽纳米复合物进行解离验证：结果表明:在人体生理盐环境下，超分子纳米复合物可发生解离，活性物各自作用于细胞，发挥功效。
18、(8)超分子蓝铜肽纳米复合物的兼容性验证；
19、阴离子体系兼容测试：超分子蓝铜肽本身带正电，与阴离子体系不兼容，制备成纳米复合物，进行兼容性测试。配制0.1％的大分子透明质酸水溶液，加入10％的超分子蓝铜肽纳米复合物，观察样品兼容性。结果表明：样品无絮凝现象，与阴离子体系兼容良好。
20、(9)超分子蓝铜肽的载体功能
21、超分子蓝铜肽序列为myr-rhkrhkrhk-[ghk-cu]，自身具有两亲性，在溶液中可组装为具有球形结构的纳米胶束，球形结构包含亲酯内核和亲水外壳，其亲水外壳可以负载具有其他功效的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种超分子蓝铜肽纳米复合物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种超分子蓝铜肽纳米复合物的制备方法，其特征在于：所述超分子蓝铜肽纳米复合物的结构中：
3.据权利要求1所述的一种超分子蓝铜肽纳米复合物的制备方法，其特征在于：所述负电荷活性物为：透明质酸或其盐、PDRN、依克多因中的一种。
4.根据权利要求1所述的一种超分子蓝铜肽纳米复合物的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，所述肉豆蔻酰十二肽与硫酸铜的质量比为1:0.04～0.1,络合反应时间为1～2h，透析时间为24h。
5.根据权利要求1所述的一种超分子蓝铜肽纳米复合物的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，所述超分子蓝铜肽与负电荷活性成分的质量比为1:0.1～10；所述超分子蓝铜肽纳米复合物中多肽的最终浓度为0.07～1mg/mL。
6.根据权利要求1所述的一种超分子蓝铜肽纳米复合物的制备方法，其特征在于：所述超分子蓝铜肽可自组装形成阳离子纳米胶束，作为为载体负载亲水活性成分及核酸类负电荷活性成分。
7.一种根据权利要求1-
8.根据权利要求7所述的应用，其中所述化妆品为抗皱、抗衰、舒缓功能的化妆品。
...【技术特征摘要】
1.一种超分子蓝铜肽纳米复合物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种超分子蓝铜肽纳米复合物的制备方法，其特征在于：所述超分子蓝铜肽纳米复合物的结构中：
3.据权利要求1所述的一种超分子蓝铜肽纳米复合物的制备方法，其特征在于：所述负电荷活性物为：透明质酸或其盐、pdrn、依克多因中的一种。
4.根据权利要求1所述的一种超分子蓝铜肽纳米复合物的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，所述肉豆蔻酰十二肽与硫酸铜的质量比为1:0.04～0.1,络合反应时间为1～2h，透析时间为24h。
5.根据权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：李晨，王向东，王丽妮，
申请(专利权)人：陕西未来多肽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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