一种检测食源性病原菌的试剂盒及其检测方法与应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种检测食源性病原菌的试剂盒及其检测方法与应用。本发明专利技术通过RPA扩增技术实现在短时间内恒温、快速高效地扩增目标DNA片段，利用独特设计的检测盒结合LFD试纸进行可视化读取检测结果，同时实现对至少两种食源性病原菌DNA的快速检测。本发明专利技术建立了同时对至少两种食源性病原菌核酸检测的RPA‑LFD检测方法，检测时间短、温度低、操作简单、灵敏度高、易于观察。本发明专利技术基于特异性引物的RPA‑LFD技术，可以通过设计不同的特异性引物来针对性检测不同的细菌，实用性强。本发明专利技术设计的检测盒具有免开盖、一次性的性质，使体系的抗污染能力提高，适用于对速度与精度有要求的检测环境。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及一种检测食源性病原菌的试剂盒及其检测方法与应用。

技术介绍

1、大肠杆菌o157(escherichia coli o157)，可通过人与人接触和饮水感染人类。严重感染会引起出血性肠炎、血小板减少性紫癜、溶血性贫血等致死率高的食源性疾病。沙门氏菌(salmonella)是常见的食源性致病菌，感染后表现症状为恶心、腹泻和呕吐等，严重时死亡率可达10％。志贺氏菌(shigella)通常称为痢疾杆菌，感染后严重者出现神经症状等。严重威胁人类健康，是wto要求重点检测的食源性致病菌。

2、食源性致病微生物主要分为食源性致病细菌、真菌、病毒、寄生虫等。在《食品安全国家标准食品微生物学检验》中规定食品中不得检出大肠杆菌o157，沙门氏菌，志贺氏菌等病原微生物。现有的检测技术以传统微生物检测为主，还存在时效性不强、操作不便捷、检验成本高等问题，无法满足日益增长的食品快速检测技术的应用需求，需要一种能够符合现场快速检测且准确、安全、低成本的检测方法的建立。

3、重组酶聚合酶扩增(recombinase polymeras本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种检测食源性病原菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括用于同时检测沙门氏菌、大肠杆菌O157、志贺氏菌中至少两种食源性病原菌的引物组合物以及检测盒；

2.根据权利要求1所述的一种检测食源性病原菌的试剂盒，其特征在于，所述沙门氏菌的特异性检测靶标的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述大肠杆菌O157的特异性检测靶标的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述志贺氏菌的特异性检测靶标的核苷酸序列如SEQID NO.3所示。

3.根据权利要求2所述的一种检测食源性病原菌的试剂盒，其特征在于，根据沙门氏菌的特异性检测靶标的核苷酸序列设计引物，沙门氏菌引物...

【技术特征摘要】

1.一种检测食源性病原菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括用于同时检测沙门氏菌、大肠杆菌o157、志贺氏菌中至少两种食源性病原菌的引物组合物以及检测盒；

2.根据权利要求1所述的一种检测食源性病原菌的试剂盒，其特征在于，所述沙门氏菌的特异性检测靶标的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述大肠杆菌o157的特异性检测靶标的核苷酸序列如seq id no.2所示，所述志贺氏菌的特异性检测靶标的核苷酸序列如seqid no.3所示。

3.根据权利要求2所述的一种检测食源性病原菌的试剂盒，其特征在于，根据沙门氏菌的特异性检测靶标的核苷酸序列设计引物，沙门氏菌引物的核苷酸序列如seq id no.4以及seq id no.5所示。

4.根据权利要求2所述的一种检测食源性病原菌的试剂盒，其特征在于，根据大肠杆菌o157的特异性检测靶标的核苷酸序列设计引物，大肠杆菌o157引物的核苷酸序列如seq idno.6以及seq id no.7所示。...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋达峰，陈杰，白雯霞，胡凯睿，赵童，
申请(专利权)人：浙江工商大学，
类型：发明
国别省市：