【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，尤其涉及一种与肿瘤免疫治疗效果相关的生物标志物及其在预测肿瘤免疫治疗效果中的应用。
技术介绍
1、肿瘤是一种古老的疾病，恶性肿瘤一旦形成，便不受机体控制而自主性生长。肿瘤可对邻近正常组织造成侵犯，并可经淋巴或血行途径转移至全身，直至引起患者死亡。手术、放疗、化疗三大常规方法为肿瘤患者的治疗作出了巨大贡献。伴随着封闭负向调控机体免疫功能的抗ctla-4抗体、抗pd-1/pd-l1抗体和car-t细胞治疗在临床肿瘤治疗中取得的显著疗效，人们已经开始对免疫治疗有了更新、更深入的认识。随着免疫学理论的丰富及对众多肿瘤抗原的认识，肿瘤免疫治疗取得了显著的进步。肿瘤的主动免疫治疗也称为肿瘤疫苗，主要是指利用肿瘤细胞或肿瘤抗原物质免疫机体，使宿主免疫系统产生针对肿瘤抗原的抗肿瘤免疫应答，从而阻止肿瘤生长、转移和复发。大量研究证实肿瘤的进展与t细胞免疫关系密切，癌组织浸润t细胞的表型、功能和数量与预后密切相关。
2、t细胞具有高度的异质性，根据不同的分类方法，t细胞可分为若干个亚群。根据cd分子，可分为cd4+t细胞和cd8+t细胞。根据功能特征分为：辅助性t细胞、细胞毒性t细胞(cytotoxic t cell,ctl)和调节性t细胞。ctl为cd8+t细胞，是细胞免疫中的主要效应细胞，能够通过释放穿孔素、颗粒酶杀伤靶细胞，并能够连续的杀伤靶细胞，具有高效性，在肿瘤微环境中，ctl能够与自然杀伤细胞构成重要免疫防线，识别肿瘤相关抗原，特异性杀伤肿瘤细胞。肿瘤浸润t淋巴细胞是从实体肿瘤组织中分离出来的富含肿瘤特异
3、t细胞受体(t cell receptor,tcr)：又称t细胞抗原受体，是t细胞特有的表面标志，可表达于所有成熟t细胞表面。大多数t细胞的tcr由α和β肽链组成，少数t细胞的tcr由γ和δ肽链组成。t细胞识别对应的抗原是通过其细胞表面的tcr，它特异性识别抗原提呈细胞上的抗原肽-mhc复合物，进而激发t细胞免疫应答。tcr的每一条肽链又可分为恒定区(c)、可变区(v)、胞质区和跨膜区等几个区，v区是tcr识别抗原多样性和特异性的主要取决区。而α和β两条肽链的v区又含有3个互补决定区(complementarity determiningregions,cdr),分别为cdr1、cdr2、cdr3，这3个cdr最能代表t细胞免疫应答的特征。其中以cdr3变异最大，其长度和序列决定tcr的特异性，从而决定tcr与抗原的特异性结合，一种cdr3序列决定一个t细胞克隆。在tcr识别mhc-抗原肽复合体时，cdr3直接与抗原肽相结合，直接影响tcr对抗原肽的识别能力，cdr1和cdr2高变区相对于cdr3比较稳定，在tcr识别mhc-抗原肽复合体时，cdr1和cdr2两个高变区识别和结合mhc分子抗原结合槽的侧壁。
4、免疫组库测序是以t/b淋巴细胞为研究对象，以多重聚合酶链式反应或5’race技术扩增决定bcr(b细胞抗原受体)或tcr多样性的互补决定区，再结合高通量测序技术，全面评估机体免疫系统的多样性和特异性，深入挖掘疾病与免疫组库的关系。高度多样性的tcr组库是有效的免疫系统的基本性质。然而，现在人们了解到免疫组库可随着感染性疾病的发生和进展而发生很大的变化。目前免疫组库测序已应用于医药和疫苗的研发、微小残留病检测、生物标志物的发现等领域。对于疾病特异的生物标志物的研究，可以通过免疫组库测序在患有同种疾病的人群中找到疾病特异性的cdr3，经过验证后的这些疾病特异性cdr3序列就可以作为代表该病或者监测疾病并指导用药的生物标志物。
5、gp96属于热休克蛋白(heat shockproteins，hsps)90家族。hsps分子除了具备分子伴侣的功能，还具有结合多肽的能力，产生hsp-多肽复合物(hsp-pcs)，这种蛋白复合物能够诱导肿瘤特异性免疫。因此，从患者肿瘤中纯化该复合物后，gp96肽复合物可被开发为个性化多价癌症治疗疫苗，通常被称为热休克蛋白肽复合物96(hsppc-96)。
6、hsppc-96是一种个性化的多价抗肿瘤疫苗，以注射的方式回输到患者体内，通过抗原交叉呈递激发患者体内针对特有肿瘤抗原的特异性细胞免疫应答，包括激活肿瘤特异性cd8+t淋巴细胞，进而杀伤并清除术后残留的肿瘤细胞，可有效防止肿瘤复发、转移，延长患者生命并提高生存质量，在治疗各种恶性肿瘤方面都有不俗的表现。20世纪90年代起，国外学者开始尝试将hsppc-96疫苗用于治疗人类恶性肿瘤，至今已在胰腺癌、肾细胞癌、神经胶质瘤、黑色素瘤等多个领域获得并发表了其疗效及安全性数据。根据这些数据，hsppc-96疫苗在美国已经被fda批准为治疗神经胶质瘤、黑色素瘤和肾癌的孤儿药，在欧盟已经被emea批准为治疗神经胶质瘤及肾癌的孤儿药。2008年在俄罗斯获批上市治疗肾癌。
7、然而，虽然hsppc-96疫苗在肿瘤治疗中取得了不错的成就，但是有数据表明，接受hsppc-96疫苗治疗肿瘤的患者，其总生存期时间差别很大，部分患者并没有从中获益。因此，迫在眉睫的是识别和开发可预测hsppc-96疫苗疗效的生物标志物，以精准发现单独或联合使用hsppc-96疫苗治疗后的获益患者。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种与肿瘤免疫治疗效果相关的生物标志物及其在预测肿瘤免疫治疗效果中的应用，旨在预测断施用免疫治疗的临床效果，以助于判断该肿瘤患者能否从免疫治疗中获益。
2、为实现以上专利技术目的，采用的技术方案为：
3、一方面，本专利技术提供了一种用于预测或判断hsppc-96疫苗治疗肿瘤效果的生物标志物，所述生物标志物为tcr。
4、优选地，所述tcr包括tcrβ链可变区，所述tcrβ链可变区为第一tcrβ链可变区、第二tcrβ链可变区、第三tcrβ链可变区、第四tcrβ链可变区、第五tcrβ链可变区以及第六tcrβ链可变区中的任意一种。
5、优选地，所述第一tcrβ链可变区可以包括如seq id no.3所示序列的cdr3，所述第二tcrβ链可变区可以包括如seq id no.4所示序列的cdr3，所述第三tcrβ链可变区可以包括如seq id no.5所示序列的cdr3，所述第四tcrβ链可变区可以包括如seq id no.8所示序列的cdr3，所述第五tcrβ链可变区可以包括如seq id no.9所示序列的cdr3，所述第六tcrβ链可变区可以包括如seq id no.10所示序列的cdr3。
6、进一步的，所述第一tcrβ链可变区还可以包括如seq id no.1所示序列的cdr1和/或如seq id no.2所示序列的cdr2，所述第二tcrβ链可变区还可以包括如seq id no.1所示序列的cdr1和/或如seq id no.2所示序列本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于预测或判断HSPPC-96疫苗治疗肿瘤效果的生物标志物，其特征在于：所述生物标志物为TCR。
2.如权利要求1所述的用于预测或判断HSPPC-96疫苗治疗肿瘤效果的生物标志物，其特征在于，所述TCR包括TCRβ链可变区，所述TCRβ链可变区为第一TCRβ链可变区、第二TCRβ链可变区、第三TCRβ链可变区、第四TCRβ链可变区、第五TCRβ链可变区以及第六TCRβ链可变区中的任意一种。
3.如权利要求2所述的用于预测或判断HSPPC-96疫苗治疗肿瘤效果的生物标志物，其特征在于，所述第一TCRβ链可变区包括如SEQ ID NO.3所示序列的CDR3，所述第二TCRβ链可变区包括如SEQ ID NO.4所示序列的CDR3，所述第三TCRβ链可变区包括如SEQ ID NO.5所示序列的CDR3，所述第四TCRβ链可变区包括如SEQ ID NO.8所示序列的CDR3，所述第五TCRβ链可变区包括如SEQ ID NO.9所示序列的CDR3，所述第六TCRβ链可变区包括如SEQ ID NO.10所示序列的CDR3。
4.如权利要求2所述的用于
5.如权利要求2所述的用于预测或判断HSPPC-96疫苗治疗肿瘤效果的生物标志物，其特征在于，所述第三TCRβ链可变区包括如SEQ ID NO.1所示序列的CDR1和/或如SEQ IDNO.2所示序列的CDR2，所述第四TCRβ链可变区包括如SEQ ID NO.6所示序列的CDR1和/或如SEQ ID NO.7所示序列的CDR2。
6.如权利要求2所述的用于预测或判断HSPPC-96疫苗治疗肿瘤效果的生物标志物，其特征在于，所述第五TCRβ链可变区包括如SEQ ID NO.6所示序列的CDR1和/或如SEQ IDNO.7所示序列的CDR2，所述第六TCRβ链可变区包括如SEQ ID NO.6所示序列的CDR1和/或如SEQ ID NO.7所示序列的CDR2。
7.如权利要求1所述的用于预测或判断HSPPC-96疫苗治疗肿瘤效果的生物标志物，其特征在于，所述TCR选自受试者接收HSPPC-96疫苗治疗肿瘤之前的肿瘤病检组织、手术切除肿瘤组织、血清、血浆、组织间隙液、脑脊液和尿液中的任意一种；所述肿瘤为胶质母细胞瘤、肾癌、肝癌、胃癌、黑色素瘤、结直肠癌和肺癌中的任意一种；所述受试者为健康个体、患有或者疑似患有某种疾病的个体，所述个体为人或者非人哺乳动物。
8.如权利要求7所述的用于预测或判断HSPPC-96疫苗治疗肿瘤效果的生物标志物，其特征在于，所述HSPPC-96疫苗治疗肿瘤为单独HSPPC-96疫苗治疗或为联合其它免疫疗法和/或化疗、放疗、靶向治疗的联合治疗；其中，所述其它免疫疗法为HSPPC-70、BCG疫苗、PD-1、PD-L1、CTLA-4、BTLA、TIM-3、LAG-3、TIGIT以及LAIR1中的任意一种。
9.一种如权利要求1～8任一项所述的用于预测或判断HSPPC-96疫苗治疗肿瘤效果的生物标志物，其特征在于，提取纯化所述HSPPC-96具体包括如下步骤：
10.一种如权利要求1～8任一项所述的TCR生物标志物在预测或判断受试者HSPPC-96疫苗免疫治疗肿瘤效果中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种用于预测或判断hsppc-96疫苗治疗肿瘤效果的生物标志物，其特征在于：所述生物标志物为tcr。
2.如权利要求1所述的用于预测或判断hsppc-96疫苗治疗肿瘤效果的生物标志物，其特征在于，所述tcr包括tcrβ链可变区，所述tcrβ链可变区为第一tcrβ链可变区、第二tcrβ链可变区、第三tcrβ链可变区、第四tcrβ链可变区、第五tcrβ链可变区以及第六tcrβ链可变区中的任意一种。
3.如权利要求2所述的用于预测或判断hsppc-96疫苗治疗肿瘤效果的生物标志物，其特征在于，所述第一tcrβ链可变区包括如seq id no.3所示序列的cdr3，所述第二tcrβ链可变区包括如seq id no.4所示序列的cdr3，所述第三tcrβ链可变区包括如seq id no.5所示序列的cdr3，所述第四tcrβ链可变区包括如seq id no.8所示序列的cdr3，所述第五tcrβ链可变区包括如seq id no.9所示序列的cdr3，所述第六tcrβ链可变区包括如seq id no.10所示序列的cdr3。
4.如权利要求2所述的用于预测或判断hsppc-96疫苗治疗肿瘤效果的生物标志物，其特征在于，所述第一tcrβ链可变区包括如seq id no.1所示序列的cdr1和/或如seq idno.2所示序列的cdr2，所述第二tcrβ链可变区包括如seq id no.1所示序列的cdr1和/或如seq id no.2所示序列的cdr2。
5.如权利要求2所述的用于预测或判断hsppc-96疫苗治疗肿瘤效果的生物标志物，其特征在于，所述第三tcrβ链可变区包括如seq id no.1所示序列的cdr1和/或如seq idno.2所示序列的cdr2，所述第四tcrβ链可变...
【专利技术属性】
技术研发人员：田瑞东，黄锡坚，方巧慧，
申请(专利权)人：深圳市康尔诺生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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