【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医疗器械，具体涉及一种异常凝血酶原荧光免疫层析法的试剂盒。
技术介绍
1、pivka-ii是维生素k缺乏或拮抗剂-ii诱导的蛋白质(protein induced byvitamin kabsence orantagonist-ii)，又称异常凝血酶原(des-gamma-carboxyprothrombin,dcp)，正常肝脏在维生素k作用下会产生凝血酶原，但在维生素k缺乏或者肝细胞癌患者中产生异常凝血酶原，其血清水平在维生素k缺乏的患者、使用华法林治疗的患者或肝细胞肝癌(hcc)患者的血清中会升高，可用于hcc的诊断。国内早在慢性乙型肝炎防治指南(2015更新版)就已将pivka-ii列为肝细胞癌的重要诊断指标，可与afp互为补充。pivka-ii是凝血酶原的一种前体形式。在正常肝脏中，凝血酶原前体经过转移后羧基化，然后释放到外周血中。羧基化作用将特定的氨基末端谷氨酸残基转化为γ-羧基谷氨酸。在许多hcc细胞中不存在发生羧基化作用的维生素k依赖性羧化酶，而是分泌一种全部或者部分未转化为谷氨酸的异常凝血酶原。因此，非羧基化形式的凝血酶原(pivkaii)已被用作hcc的肿瘤标记物。
2、目前，肝癌的诊断包括以下三种：(1)组织病理学检查：肝活检是金标准，一种创伤性检查，漏诊率为10％-30％，技术和仪器设备要求较高，穿刺后疼痛以及其他并发症，患者接受度差。(2)影像学诊断：以超声较普遍，对轻度和中度肝纤维化诊断不灵敏，具有一定的局限性。(3)血清学诊断：取样方便，价格低，无创伤，因而较为实用。国内目前
3、为了解决现有技术问题的不足，本专利技术提供了一种一种异常凝血酶原(pivka-ii)荧光免疫层析法的试剂盒及检测方法。荧光免疫层析技术是基于抗原抗体特异性免疫反应的膜检测技术。该技术以固定有检测线(包被抗体或包被抗原)和质控线(抗抗体)的纤维层析材料为固定相，测试液为流动相，荧光标记抗体或抗原固定于连接垫，通过毛细管作用使待分析物在层析条上移动，由固定在膜上特定区域的捕获抗体获取信号，经过特定数据处理，由检测仪根据标记荧光微球的发射光谱检测膜上检测线处的荧光信号。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种异常凝血酶原荧光免疫层析法的试剂盒，该试剂盒操作方便，可在各种场景使用。
2、本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
3、一种异常凝血酶原荧光免疫层析法的试剂盒，包括检测卡和校准卡；
4、所述试剂盒的制备方法包括以下步骤：
5、步骤一、荧光垫的制备
6、将抗pivka-ⅱ单克隆抗体与微球进行结合，制作成标记荧光微球，用喷金划膜仪喷涂到玻璃纤维膜上，于37℃烘干；
7、步骤二、划线硝酸纤维素膜的制备
8、使用划膜抗体稀释液对抗pivka-ⅱ单克隆抗体进行稀释，并用喷金划膜仪在硝酸纤维素膜划线，于37℃烘干；
9、步骤三、层析板的组装
10、将荧光垫、样品垫、吸水垫及划线硝酸纤维素膜分别贴合在pvc底板的相对应位置；
11、步骤四、装配
12、将层析板切成宽度为3.4mm的试纸条，进行压壳，压壳后形成检测卡，将其放入铝箔袋中，同时放入一袋干燥剂，封口即可。
13、进一步地，步骤一中，所述微球是粒径为200nm的时间分辨荧光微球。
14、进一步地，步骤一中，所述活化液是浓度为10mg/ml的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液。
15、进一步地，步骤二中，所述划膜抗体稀释液是浓度为1m的磷酸盐缓冲溶液。
16、进一步地，步骤三中，所述荧光垫包括时间分辨荧光微球偶联标记抗pivka-ⅱ单克隆抗体。
17、进一步地，步骤三中，所述样品垫中含有处理缓冲液，所述处理缓冲液包括85-95％的ph为8.0的tris溶液、1-5％的bsa溶液、5-10％的蔗糖溶液、0.1-0.2％的proclin300防腐剂。
18、进一步地，步骤四中，所述校准卡中存储有试剂的标准曲线信息。
19、该试剂盒测使用原理为：当待测样本滴加到样品垫上，在经过荧光垫时，会与标记抗体结合，形成抗原-抗体-荧光微球复合物，再由虹吸作用通过硝酸纤维素膜，与包被抗体结合，形成抗体-抗原-荧光微球免疫夹心复合物，通过荧光免疫分析仪进行识别荧光信号，由校准卡设置的标准曲线进行转化，即可得出待测样本中标志物的浓度。
20、本专利技术的有益效果：
21、(1)本专利技术制作的试剂盒可以常温运输及存储。
22、(2)待测样本可直接上样，操作简单，15分钟即可得出结果。
23、(3)本专利技术制作的试剂盒可以单样本检测也可以批量检测。
24、当然，实施本专利技术的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。
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1.一种异常凝血酶原荧光免疫层析法的试剂盒，其特征在于，包括检测卡和校准卡；
2.根据权利要求1所述的一种异常凝血酶原荧光免疫层析法的试剂盒，其特征在于，步骤一中，所述微球是粒径为200nm的时间分辨荧光微球。
3.根据权利要求1所述的一种异常凝血酶原荧光免疫层析法的试剂盒，其特征在于，步骤一中，所述活化液是浓度为10mg/ml的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液。
4.根据权利要求1所述的一种异常凝血酶原荧光免疫层析法的试剂盒，其特征在于，步骤二中，所述划膜抗体稀释液是浓度为1M的磷酸盐缓冲溶液。
5.根据权利要求1所述的一种异常凝血酶原荧光免疫层析法的试剂盒，其特征在于，步骤三中，所述荧光垫包括时间分辨荧光微球偶联标记抗PIVKA-Ⅱ单克隆抗体。
6.根据权利要求1所述的一种异常凝血酶原荧光免疫层析法的试剂盒，其特征在于，步骤三中，所述样品垫中含有处理缓冲液，所述处理缓冲液包括85-95％的pH为8.0的Tris溶液、1-5％的BSA溶液、5-10％的蔗糖溶液、0.1-0.2％的proclin300
7.根据权利要求3所述的一种异常凝血酶原荧光免疫层析法的试剂盒，其特征在于，步骤四中，所述校准卡中存储有试剂的标准曲线信息。
...【技术特征摘要】
1.一种异常凝血酶原荧光免疫层析法的试剂盒，其特征在于，包括检测卡和校准卡；
2.根据权利要求1所述的一种异常凝血酶原荧光免疫层析法的试剂盒，其特征在于，步骤一中，所述微球是粒径为200nm的时间分辨荧光微球。
3.根据权利要求1所述的一种异常凝血酶原荧光免疫层析法的试剂盒，其特征在于，步骤一中，所述活化液是浓度为10mg/ml的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液。
4.根据权利要求1所述的一种异常凝血酶原荧光免疫层析法的试剂盒，其特征在于，步骤二中，所述划膜抗体稀释液是浓度为1m的磷酸盐缓冲溶液。
【专利技术属性】
技术研发人员：邬宗玲，薛绍礼，孙京海，范传华，
申请(专利权)人：安徽华培生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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